上海国济男子医院CART细胞治疗

2021年2月1日发(作者：不孕不育症的治疗)
深圳市合一康生物科技有限公司


HYK
免疫细胞治疗技术



HYK
免疫细胞治 疗技术是通过对单个核细胞，在
GMP
实验室内经过添加细胞因子，使细胞数量扩增、
杀瘤活性增强，再通过静脉、介入等方式分次回输给病人，从而激发和增强患者的免疫力，能有效清除微
小残留肿瘤细胞，延长生存期，是防止肿瘤术后和放化疗后复发和转移的新方法。常用的肿瘤免疫细胞手
段包括
ECIK
细胞、
DC
细胞、
DC- CIK
细胞、
DCIK
细胞、
T
细胞。



HYK
免疫细胞治疗的途径有哪些？



HYK
免疫细胞治疗的途径可分为静脉注射、皮下注射，瘤体内注射和淋巴结注射。



HYK
免疫细胞治疗技术的优势



HYK
免疫细胞治疗是
20
世纪
80
年代以来随着免疫生物学、肿 瘤免疫学和细胞分子生物学的发展而形成
的第四种治疗手段，它克服了传统治疗“易转移，易复发，副作 用大”的缺点，具有传统治疗无法比拟的
优势，具体如下：



低毒：无明显毒副作用



靶向：作用方向明确，仅针对体内异常肿瘤细胞进行杀伤，不会破坏正常的组织细胞



全面：清除微小病灶和残余肿瘤细胞，对原发灶、转移病灶和耐药肿瘤病灶均有疗效

，能有效预防肿
瘤复发



高效：增强机体免疫功能，改善症状，提高生存质量，延长生存期

。



HYK
免疫细胞治疗的适应症：



手术后的肿瘤患者，可防止肿瘤复发转移；



无法进行手术、放疗、化疗的中晚期肿瘤患者；



放疗、化疗失败的肿瘤患者；



肿瘤患者放化疗后的综合治疗，可减轻放化疗的副作用；



骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；



癌性胸、腹腔积液患者；



部分暂不适宜做手术、介入或其他治疗的患者。



HYK
免疫细胞治疗的禁忌症



1
、孕妇或者正在哺乳的妇女；



2
、
T
细胞淋巴瘤患者；



3
、不可控制的严重感染患者；



4
、对
IL-2
等生物制品过敏的患者；



5
、艾滋病患者；



6
、正在进行全身放疗、化疗的患者；



7
、晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低患者；



8
、器官功能衰竭者；



9
、脏器移植者；



10
、长期使用或正在使用免疫抑制剂的患者。


ECIK
细胞治疗技术




增强型细胞因子诱导的杀伤细胞（
Enhanced cytokine induced killer cell, ECIK
）是在普通型
CIK
的基础上，通过优化培养体 系而获得的较
CIK
细胞数量更多、杀瘤活性更强的细胞。其通过采集分离到患
者外周 血中的单个核细胞，
在体外用多种进口的细胞因子共同培养而获得的一群异质性细胞，
其中以< br>CD3+
和
CD56+
双阳性细胞为主要效应细胞，兼具有
T
细胞特异性杀肿瘤和
NK
细胞非
MHC
限制性杀瘤的特
点。



E-CIK
细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、非
M HC
限制性、对正常骨髓造血影响轻微等
优点。
E-CIK
细胞除具有普通型
CIK
细胞的特性外，其显著的特征是增殖能力是普通型
CIK
细胞的
3
～
5
倍，回输的细胞数量达到
100
亿以上，有利于形成杀瘤的 量效优势。




ECIK
细胞可以通过多种机制发挥抗肿瘤免疫效应？



1
．

通过释放穿孔素、颗粒酶等物质直接杀伤肿瘤细胞。



2
．

通过
Fas/FasL
途径诱导肿瘤细胞的凋亡。



3
．

通过分泌
IFN-
γ
、
TNF-< br>α
、
IL-2
、
IL-6
等多种细胞因子，发挥直接或间接的 抗肿瘤免疫效应。



ECIK
细胞抗肿瘤免疫治疗的优势？



1
．
ECIK
细胞增殖速度快，可以在短期内大量扩增，满足临床治疗的需要。



2
．
ECIK
细胞具有特异性识别肿瘤细胞的机制，对正常细胞无毒副作用。



3
．
ECIK
细胞杀瘤活性高，杀瘤谱广，对多种耐药肿瘤细胞同样敏感。



4
．
ECIK
细胞杀瘤活性不受
CsA
（环孢霉素
A
）和
FK506
（普乐可复）等免疫抑制剂的影响。



5
．
ECIK
细胞是活化的自体细胞，安全性好，不会产生排斥等反应，副反应小。




ECIK
的治疗范围



ECIK
细胞能治疗哪些肿瘤？



由于
ECI K
细胞对任何一种肿瘤均有杀伤作用，在多种肿瘤的治疗中展示了应用前景。
如各种肉瘤、黑
色素瘤、恶性淋巴瘤、肾癌、非何杰金氏淋巴瘤及高分化腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵 巢癌、
消化道肿瘤（如胃癌、结肠癌、食道癌）
、胰腺癌、喉癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤（
T
细胞淋巴瘤除外）
、白
血病、多发性骨髓瘤等。



有些肿瘤，如各种肉瘤、黑色素瘤、肾癌、非何杰金氏淋巴瘤及高分化腺癌等对放化疗不敏感，因此ECIK
细胞是这些肿瘤的首选。




ECIK
细胞治疗可用于哪一阶段（期）的肿瘤？



E CIK
细胞治疗可用于任何一期的肿瘤患者，早期、中晚期的病例均有较好的近期疗效。手术切除、介< br>入、射频、氩氦刀等治疗的同时或治疗后的病人疗效更佳。
ECIK
细胞能够杀伤清除不 能用手术切除的极微
小瘤灶或是体内散存的肿瘤细胞，起到延缓或阻止肿瘤的转移或复发的作用。部分暂 时不适宜做手术、介
入或其它治疗的患者，也可以先进行免疫细胞治疗，提高身体机能状况，改善生活质 量，争取其它治疗机
会。



DiKaT
细胞治疗技术





载瘤抗原树突状细胞（
Tumor associated antigen- Dendritic cell, TAA-DC
）激活
CIK
及特异
T细胞整合技术（
Integrated dendritic cell induced killer cell and T cell, DiKaT
）
，根据病人
HLA -a2
分型检测阳性的病人，
选用病人肿瘤相应的特异性抗原
（
TSA
）
负载
DC
，
并分别用
DC
来激活病人的
CIK
、
T
细胞，
DiKaT
技术是综合了
DC
疫苗、< br>CTL
细胞治疗等技术，进行序贯联合设计的一种个性化细胞治疗
技术。



DiKaT
技术采用多种免疫细胞联合作用，克服了单一免疫细胞治疗的 局限性，结合了特异性杀伤和非
特异性杀伤肿瘤细胞的效果，可全面提高病人的免疫功能，对免疫原性较 强的肿瘤效果更好。另外接受本
治疗前必须进行
HLA-a2
分型检测，检测结果阳性 患者适合该技术治疗。



γ
δ
T
细胞治疗技术





γ
δ
T
细胞是介于特异性免疫与非特异性免疫之间的一种特殊类型的细胞，< br>主要分布于皮肤
和粘膜组织，
一般不超过
T
细胞总数的
5%< br>。
活化后的
γ
δ
T
细胞具有强大的特异性和非特异性
杀伤肿瘤细胞的双重特性，此外
γ
δ
T
细胞还具有
DC
的抗 原递呈能力，可高效激活
T
细胞形
成
CTL
细胞；
HYK< br>的专利技术能在体外高效扩增
γ
δ
T
细胞，从而解决有效细胞量不足和
DC
抗原递呈细胞无法扩增的缺点。







D-CIK
细胞治疗技术




树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞（
Dendritic
cell
activated
and
cytokine
induced
killer
cell,
D-CIK
）
，是将人体外周血单个核细胞分别诱导培养成
DC
和
CIK
细胞，
DC
培养成熟后再与
CIK
细胞共培养而获得的异质性细胞群体。二者共培养时，T
细胞促使
DC
进一步成熟后释放大量
IL-12
、
I FN-
γ
等细胞因子，
使
CIK
细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性明显增 强，
CIK
细胞扩增倍数上升；
DC
分泌高
水平的
IL-2
、
IL-12
诱导
Th1
型细胞免疫应答，有利于清除肿瘤细胞，达 到
1+1>2
的效果。



一、
TIL
细胞治疗技术



肿瘤浸润淋巴细胞（
tumor infiltrating lymphocyte, TI L
细胞）是一群存在于肿瘤间质中的异质性
淋巴细胞，一般从肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性 胸腹水中分离出的淋巴细胞经
IL-2
培养得到，其肿瘤
杀伤活性为
MHC< br>限制性，即为自体肿瘤特异性杀伤细胞，具有
CD3+CD8+
或
CD3+CD 4+
表面标志。
TIL
细胞对
癌性胸、腹腔积液患者疗效显著。



TIL
细胞治疗肿瘤的优点



增殖性及杀伤性强；



IL-2
量用量小；



取材于肿瘤组织。



对癌性胸水和腹水治疗效果较好。




二、
CTL
细胞治疗技术



CTL
细胞技术



CTL(cytotoxic T lymphocyte)
细胞即细胞毒性
T
淋巴细胞，它在
T
细胞免 疫应答中起重要作用。
CTL
的功能特点是可以在
MHC
限制的条件下，直接 、连续、特异性的杀伤靶细胞。
CTL
对靶细胞的杀伤过程
可以分为三个时相：
（
1
）接触相：
CTL
通过
TCR
及粘附分子与靶细胞接 触。此过程只需要几分钟。
（
2
）分
泌相：
CTL
与靶细胞 紧密结合，
CTL
活化并使细胞颗粒性内容物呈现极化分布，随即启动胞吐机制，分泌细
胞毒性物质，作用于靶细胞。
（
3
）裂解相：靶细胞死亡的过程。

CTL
的杀伤特点：
（
1
）杀伤力强；
（
2
）反 复杀伤靶细胞，而且在杀伤靶细胞的过程中本身不受损伤；
（
3
）
MHC限制性。



CTL
的杀伤机制：
（
1）穿孔素：穿孔素以单体形式释放后，插入靶细胞膜，形成管状多聚穿孔素（孔
道）
，容许
Na+
和水分子进入靶细胞，

使靶细胞渗透压改变，最终导致靶细胞溶解。
（
2
）颗粒酶：
CTL
细胞
通过胞吐作用释放的颗粒酶，可 通过穿孔素构建的管状结构穿越靶细胞膜进入其胞浆中，激活
caspase10
（半胱天冬氨 酸蛋白酶
10
）
，引发
caspase
级联反应，使靶细胞凋亡。< br>（
3
）肿瘤坏死因子：包括
TNF
α
-
和
T NF-
β
，它们可以与靶细胞表面的相应的受体结合，启动靶细胞的凋亡。



CTL
疗法



1. Tc
细胞简介

CD8+T
细胞又称细胞毒性
T
（
Tc
或
CTL
）细胞，能直接攻击带异抗原的靶细胞，因此在抗病毒感染、同种异体移植排斥反应和抗肿瘤免疫中起重要作用。



2. Tc
细胞的作用机制



Tc
细胞对靶细胞的杀伤作用是 抗原特异性的，
只杀伤相应靶细胞而对其它细胞无损伤作用。
Tc
细胞杀
伤靶 细胞的过程分为两个阶段。



（
1
）

效靶细胞结合阶段



Tc
细胞到达抗原所在部位后，通过
TCR-CD8
复合物与靶细胞表面抗原 肽
-MHCI
类分子复合物紧密结合，
并在多种粘附分子、细胞因子等参与下，完成复 杂的识别、粘附、信号传递等过程，触发细胞活化释放溶
细胞介质。



（
2
）

致死性打击阶段（杀伤主要机制）



Tc
细胞主要通过三种方式杀伤靶细胞。



①穿孔素
-
颗粒酶系统途径



Tc
细 胞释放颗粒中预先合成的穿孔素和颗粒酶。穿孔素以单体形式释放后，插入靶细胞膜，形成管状
多聚穿孔 素（孔道）
，容许
Na+
和水分子进入靶细胞，

使靶细胞渗透压改 变，最终导致靶细胞溶解。另一
方面为颗粒酶进入靶细胞提供通道。
颗粒酶是一类丝氨酸酯酶，

具有核酸酶效应。从颗粒中释放后经多聚
穿孔素进入靶细胞，在靶细胞内触发引起< br>DNA
断裂的机制，导致靶细胞调亡。由于颗粒中的物质是预先合
成的，所以这一途径引 起的杀伤是非常迅速的。效应细胞颗粒中储存的穿孔素和颗粒酶数量使得一个效应
细胞足以连续杀伤许多 细胞。



②FasL/Fas
系统途径



效应
Tc
细胞杀伤靶细胞的另一种方式是通过与靶细胞的直接接触，活化的
CTL
膜上表达
FasL
，它与
靶细胞膜上的
Fas
结合，导致靶细胞调亡。



③细胞因子途径



效应
Tc
细胞分泌
TNF-
α
和
TNF -
β
，杀伤靶细胞。



3. Tc
细胞的临床应用



Tc
细胞在抗肿瘤和抗病毒性感 染
（如肝炎）
治疗方面有很好的应用。
Tc
细胞是杀伤白血病细胞的关键性效应细胞，
因而将体外诱导并扩增的白血病细胞特异性
Tc
细胞回输给患者，< br>是一种有效的白血病治疗方
法。