试管二代过程医院消毒灭菌的效果监测

2021年2月1日发(作者：试管孕囊上方积液)
医院消毒灭菌的效果监测

1
前言

医院消毒是预防医院 内感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消
毒方法是否合理、消毒效果是否可靠的手段，因而在 医院消毒工作中至关重要。

医院消毒效果监测时需遵循以下原则：监测人员需经过专业培训， 掌握一
定的消毒知识，具备熟练的检验技能；选择合理的采样时间
(
消毒后、使用前< br>)
；
遵循严格的无菌操作。

2
热力灭菌效果的监测方法

2.1
压力蒸汽灭菌效果监测方法

2.1
化学监测法

(1)
化学指示卡
(
管)
监测方法：
将既能指示温度，
又能指示温度持续时间的
化学指示管(
卡
)
放人每一待灭菌的物品包中央，经一个灭菌周期后，取出指示
管< br>(
卡
)
，根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。

(2)
化学指示胶带监测法：
将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外，
经
一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过灭菌处理。

(3)
结果判定：
检测时，
所放置的指示管
(
卡
)
的性状或颜色均变至规定的 条
件，可认为该包灭菌合格。

(4)
注意事项：监测所用化学指示剂须经卫生部批准，并在有效期内使用。

2.1.2
生物监测法

(1)
指示菌株：指示菌株为嗜热脂肪杆 菌芽胞
(ATCC7953
或
SSIK31
株
)
，菌
片含菌量为
5.0X10
5
-5.0x10
6
cfu/
片 ，
在
121
℃±
0.5
℃条件下，
D
值为
13-1.9min
，
杀灭时间
(KT
值
)
≤
19 min
，存活时间
(ST
值
)
为≥
3.9min
。

(2)
培养基：试验用培养基为溴甲酚紫蛋白胨水培养基。

1

(3)
检测方法：
将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装人灭菌小纸袋内，< br>置于
标准试验包中心部位。

灭菌柜室内
,
排气口上方放置一 个标准试验包
(
由
3
件平纹长袖手术衣，
4
块小手术巾，< br>2
块中手术巾，
1
块大手术中，
3O
块
10cm x 10cm8
层纱布敷料包
裹成
25cm
X
30cm
x
30cm
大小
)
。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒
(22cm
x
13cm
x 6cm)
代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放 于中心部位的两只灭菌
试管内
(
试管口用灭菌牛皮纸包封
)
，将贮物 盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。

经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通 气贮物盒中的指
示菌片，
投人溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，
经
56
℃ 培养
7
天
(
自含式生物指示物
按说明书执行
)
，观 察培养基颜色变化。检测时设阴性对照和阳性对照。

(4)
结果判定：每个指示菌片 接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判
定为灭菌合格；指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养 基，由紫色变为黄
色时，则灭菌不合格。

(5)
注意事项：监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内使用。

20 .2.2
干热灭菌效果监测方法

2.2.1
化学检测法
(1)
检测方法：将既能指示温度又能指示该温度持续时间的化学指示剂分别
放人待灭菌的 物品中。经一个灭菌周期后，取出化学指示剂，据其颜色及性状
的改变判断是否达到灭菌条件。

(2)
结果判定：检测时，所放置的指示管的颜色及性状均变至现定的条件，
则可认为 该包达到灭菌条件。

(3)
注意事项：
检测所用的化学指示剂需经卫生部认 可，
并在有效期内使用。

2.2.2
物理检测法：
(
热电偶检测法
)
2

(l)< br>检测方法：检测时，将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层
内、中、外各点。关好柜门 ；将导线引出，由记录仪中观察温度上升与持续时
间。

(2)
结果判定：若 所示温度
(
曲线
)
达到预定温度，则灭菌温度合格。

2.2.3
生物检测法：

(1)
指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽 胞
(ATCC9372)
，菌片含菌量为
5.0XI0
5
一
5.0XI0
6
cfu/
片。其抗力应符合以下条件：在温度
160
±
2
℃时，其
D
值为
1.3-1.9min
，存活时间≥< br>3.9min
，死亡时间

≤
1.9min
。
(2)
检测方法：
将枯草杆菌芽胞菌片分别装人灭菌中试管内
(1
片/
管
)
。
灭菌
器与每层门把手对角线内，外角处放置
2
个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，
关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至
80
℃时，加盖试管帽后取出试管。
在无菌条件下，加人普通营养肉汤培养基
(5ml/< br>管
)
，以
37
℃培养
48h
，观察初
步结果 ，无菌生长管继续培养至第七日。

(3)
结果判定：若每个指示菌片接种的肉汤管均 澄清，判为灭菌合格，若指
示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格，对难以判定的肉汤管，取
0.1ml
接种于营养琼脂平板，用灭菌
L
棒涂匀，放
37
℃培养
48h
，观察菌落形态，并
做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长；若有指示菌生长 ，判为灭菌不合格；
若无指示菌生长，判为灭菌合格。

(4)
注意事项：检测所用的指示菌片需经卫生部认可，并在有效期内使用。

3
紫外线消毒效果的监测

3.1
紫外线灯管辐照度值的测定

1)
检测方法：开启紫外线灯
5min
后，将测定波长为
254nm
的紫外线辐照计
探头置于被检紫外线灯下垂直距 离
1m
的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为
3

该紫外线灯管的辐照度值。

(2)
结果判定：普通
30w
。直管型紫外线灯，新灯辐照强度≥
90Uw/cm2
为合
格；使用中紫外线灯辐照强 度≥
70Uw/cm2
对为合格；
30W
高强度紫外线新灯的
辐照强 度≥
180 Uw/cm2
行为合格。

(3)
注意事项：测定时电 压
220v
土
5v
，温度
20
一
25
℃， 相对湿度
<60%
，
紫外线辐照计必须在计量部门检定的有效期内使用。

3.2
生物监测法

(1)
空气消毒效果监测

①表面消毒效果监测

4
医疗器械灭菌效果的监测

4.1
采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。

4.2
常规监测

(1)
检测方法：用无菌的方法将拟检缝合针、针头、手术刀片等 小件医疗器
械各
5
支，分别投人
5ml
的无茵洗脱液中；注射器则取
5
副在
5ml
无菌肉汤中
分别抽吸
5
次；手术钳、 镊子等大的医疗器械在无菌操作下取
2
份以上用沾有
无菌洗脱液的棉拭子反复涂擦采样 ，并将棉拭子投入
5ml
无菌洗脱液中。将采
样管用力振打
80
次， 用无菌吸管吸取
lml
待检样品放于灭菌平皿内，加人已熔
化的
45
℃
-48
℃的营养琼脂
15-18ml
，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37
℃温箱
培养
48h
，计数菌落数。

(2)
结果判定：平板上无菌生长为灭菌合格。

(3)
注意事项：若消毒因子为化学消毒剂时，采样液中应加人相应中和剂。

4.3
无菌检验

4.3.1
无菌检验前准备

4

(1)
洗脱液与培养基无菌性试验：无菌试验前
3
天 ，于需一厌养培养基与霉
菌培养基内各接种
Iml
洗脱液，分别置
30-35
℃与
20-25
℃培养
72h
，应无菌生
长。
< br>(2)
阳性对照管菌液制备：在试验前一天取金黄色葡萄球菌
(26003)
的 普通
琼脂斜面新鲜培养物，接种
1
环至需一厌氧培养基内，在
30-35℃培养
16-18h
备用。

4.3.2
无菌操作：取缝合针 、针头、刀片等小件医疗器械
5
件直接浸人
6
管需一厌氧培养管
(< br>其中一管作阳性对照
)
与
4
管霉菌培养管
C
培养基用 量为
15ml/
管。

取
5
副注射器，在
5ml< br>洗脱液中反复抽吸
5
次，洗下管内细菌，混和后接
种需一厌养菌培养管
(
共
6
管，其中
1
管作阳性对照
)
与霉菌培养管< br>(
共
4
管
)
。
接种量：
lml
注射 器为
0.5ml
，
2ml
注射器为
Iml
，
5-1 0ml
注射器为
2ml
，
20-50ml
注射器为
5ml< br>，
培养基用量：
接种量为
2ml
以下为
15ml/
管 ，
接种量
5ml
为
40ml/
管。

手术钳、镊子 等大件医疗器械取
2
件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹
采样，将棉拭子投人
sml
无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需一厌氧培养
管
(
共
6
管，其中
1
管作阳性对照
)
与霉菌培养基
(
共< br>4
管
)
。接种量为
lml/
管，
培养基用量为
15ml/
管。

4.3.3
培养：在待检样品的需一厌氧培养管中，接 种预先准备的金黄色葡
萄球菌阳性对照管液
1
：
1000
稀释
1ml
，
将需一厌氧培养管以及阳性与阴性对照
管均于
30-35
℃培养
5
天，霉菌培养管与阴性对照管于
20-25
℃培养
7
天，培养
期间逐日检查是否有菌生长，如加人供试品后培养基出现混浊或沉淀，经培养
后不能 从外观上判断时，可取培养液转种人另一支相同的培养基中或斜面培养
5

基上，培 养
48-72h
后，观察是否再现混浊或在外面上有无菌落生长，并在转种
的同时，取 培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。

4.3.4
结果判定：阳性 对照在
24h
内应有菌生长，阴性对照在培养期间应
无菌生长，如需一厌氧菌及霉菌培 养管内均为澄清或更显混浊但经证明并非有
菌生长，判为灭菌合格；如需一厌氧菌及霉菌培养管中任何< br>1
管显混浊并证实
有菌生长，应重新取样，分别同法复试
2
次，除阳性 对照外，其他各管均不得
有菌生长，否则判为灭菌不合格。

4.4
注意事项

(1)
送检时间不得超过
6h
，若样品保存于< br>0-4
℃，则不超过
24h
。

(2)
被采样本表面积
<100cm2
取全部表面；被采样本表面积

≥
100Cm2
，取

100cm2
。

(3)
若消毒因子为儿学消毒剂，采样液中应加人相应中和剂。

4.5
热原检查法：

4.5.
鲎试验

本法系利用鲎试剂与细菌 内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细
菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。内毒素的量用 内毒素单位
(EU)
表示。
细菌内毒素国家标准品
(
以下简称
RSE)
系自大肠杆菌提取精致得到的内毒素。
以
细菌内毒素国际标准品为基准，经 过协作标定，使其与国际标准品单位含义一
致
.RSE
用于标定、
复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品
(
以下
简称
CSE)。
CSE
系经
RSE
为基准进行标定，确定其重量的相当效价。每毫微克
(Ing)CSE
的效价应不小于
2EU
，不大于
50EU
，并具备均一性和稳定性的实验数
据。
CSE
用于试验中空试剂灵敏度复核、干扰试 验及设置的阳性对照。

(1)
试验准备：试验所用器皿，需经处理，除去可能存在的外源性内毒素，
6

常用的方法是
250
℃于烤至少
lh
或
180< br>℃干烤至少
2h
，
也可用其他适宜的方法。
试验所用器皿应确证无吸附 细菌内毒素的作用。试验操作过程应防止微生物的
污染。

(2)
鲎试剂灵敏 度复核：根据尝试剂灵敏度的标示值
(
λ
)
，将
RSE
或< br>CSE
用
细菌内毒素检查用水
(
与批号鲎试剂
24h
不产生凝集反应的灭菌注射用水，以下
简称
BET
水
)
溶解，在旋涡 混合器上混合
15min
，然后制备成
2.0
λ
、
λ
、
0.5
λ
A
和
0.25
λ
等
4
个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混
合
30
秒钟，按“检查 法”项下试验，每一浓度平行做
4
管，同时用
BET
水做
4
管阴性对照，如最大浓度
(2.0
λ
)4
管为阳性，最低浓度
(0. 25
λ
)4
管均为阴性，
阴性对照
4
管均为阴性，按下式计 算反应终点浓度的几何平均值即为鲨试剂灵
敏度的测定值
(
λ
)
。< br>
λ
c=
Lg
-1
(
∑
X/4)
式中
X
为反应终点浓度的对数值
(Lg)
。反应终点浓度是系列浓度递减的内
毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。

当
λ
c
在
0.5
λ
-2.0
λ
(
包括
0.5
λ
和
2.0
λ
)
时，方可用于细菌内毒素检查，
并以
λ
为该批空鲎剂的灵敏度。每批新的鲨试剂在用于试验前都要进行灵敏度
的复核。鲎试剂灵敏度定义为在本 检查法规定的条件下能检测出标准溶液或供
试品溶液中的最低内毒素浓度，用
EU/ml
表示。

(3)
供试品干扰试验：按“鲎试剂灵敏度复核”项下试验，用
B ET
水和未检
出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数
(MVD)
的稀释液分别制成
合
CSE2.0
λ
、
λ
、
0.5
λ
和
0.25
λ
等
4
种浓度的内毒素溶液。用BET
水和供试
品溶液或稀释液制成的每一浓度平行做
4
管，另取
BET
水和供试品溶液或稀释
液各做
4
管阴性对照。
如标准溶液最 大浓度
(2.0
λ
)4
管均为阳性，
最低浓度
(0.25< br>7

λ
)4
管均为阴性，两种阴性对照
8
管均为阴 性时，按下式计算用
BET
水制成的
内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(E
S
)
和用供试品溶液或稀释液制
成的内毒素溶液的反应终点浓度的几 何平均值
(E
T
)
。

E
S
=ig
-1
(
∑
X
s
/4)
E
T
二
ig
-1
(
∑
X
T
/4)
式中
X
s

X
T
分别为用
BET
水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应
终点浓度的对数值
(Lg)
。

当
E
T
在
0.5Es-2.0Es(
包括
0. 5Es
和
2.0Es)
时测认为供武品在该浓度下不干
扰试验，否则需进行适 当处理后重复试验，或使用更灵敏的鲎试剂，对供试品
进行更大倍数稀释，是排除干扰因素的简单有效的 方法。每个品种要求至少对
三个批号的供试品进行干扰试验，若鲎试剂的来源、供试品的配方或生产工艺
有变化时，须重复进行干扰试验。

供试品的最大有效稀释倍数
(MVD)
按下式计算：

MVD
二
L/
λ

L
为供试品的细菌内毒素限值，
以
EU/ml
表示，
当正文中的限值以
EU/mg
或
EU/U
表示时，应乘以供试品溶液的浓度，再以所得值代人上式。

(4)
检查法：取装有
0.1ml
鲎试剂溶液的
10
×
75mm
试管或
0.1ml/
支规格的
鲨试剂原安瓿
6
支，
其中2
支加人
0.1ml
或
0.2ml
供试品溶液
(其稀释倍数不得
超过
MVD)
作为供试品管，
2
支分别加人0.1mll
或
0.2ml
用
BET
水将
CSE
制成
的
20
则需进行适当处理后重复试验，
或使用更灵敏的 餐试剂，
对供试品进行更
大倍数稀释，是排除干扰因素的简单有效的方法。每个品种要求至少对 三个批
号的供试品进行干扰试验，若鲨试剂的来源、供试品的配方或生产工艺有变化
时，须重复 进行干扰试验。

8