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实验二
水产品中的组胺的检测
一、
实验目的
l
.了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理。
2
.掌握正戊醇提取组胺的操作技术。
3
.学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。
二、实验原理
水产品中的组胺用正戊醇 提取,
遇偶氮试剂显橙色,
与标准系列比较定量。
组胺是水产
品中游离的组氨 酸在组氨酸脱羧酶作用下,
发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。
脱羧酶来
自一些含有 组氨酸脱羧酶的微生物,
如某些肠杆菌、
弧菌属等,
其中最主要的是摩根变形杆
菌和组胺无色杆菌。
当水产品受到这些细菌污染后,
会产生大量的组胺,
从而反映出 水产品
受微生物污染的程度。
三、仪器与试剂
(1)
正戊醇;三氯乙酸溶液
(100g/L)
;碳 酸钠溶液
(50g/L)
;氢氧化钠溶液
(250g/L)
;盐酸
( 1+11)
。
(2)
偶氮试剂
①
甲液:
称取
0.625g
对硝基苯胺,
加
6.25mL
盐酸溶液溶 解后,
再加水稀释至
250mL
,
置冰箱中。
②
乙液:亚硝酸钠溶液
(5g/L)
,临用现配。
甲液
5mL
、乙液
40mL
混合后立即使用。
(3)
磷酸组胺标准贮备液准确称取
0.2767 g
于
(100
士
5)
℃干燥
2h
的磷酸组胺,溶于 水,
移入
100mL
容量瓶中,加水至刻度。此溶液每毫升相当于
1.0mg
组胺,
(4)
磷酸组胺标准使用液
吸取
5.0mL
磷酸组胺标准贮备 液,置于
250mL
容量瓶中,
加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于
20μ g
组胺。
四、实验步骤
1
.样品处理
称取
5 .00
~
l0.00g
切碎样品,置于具塞锥形瓶中,加入
15
~< br>20mL
三氯乙酸溶液,浸泡
2
~
3h
,
过滤。吸取
2.0mL
滤液,
置于分液漏斗中,
加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加入
3mL
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