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乳房疼痛性病实验室梅毒sop(1)

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-31 18:19

早上空腹跑步好吗-联科肾病医院

2021年1月31日发(作者:哈尔滨癫痫病医院)

山东省皮肤病医院性病实验室

操作手册


编码

文件名称

制订人


梅毒螺旋体检测标准操作规程

页数




实施日期




审核人


批准人

批准日期

制订日期

审核日期



的:规范的梅毒螺旋体检验操作,确保检测结果准确。

适用范围:性病实验室工作人员





人:实验操作者

1
、标本的采集与处理

标本采集的基本要求

1.1.1
操作应规范化。

1.1.2
所有标本都应当被视为具有传染性,医务人员应戴手套谨慎操作。

梅毒标本采集

梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法,

各期梅毒的检测方法及

部位见下表。

临床表现

一期梅毒

二期梅毒

潜伏梅毒

三期梅毒

神经梅毒

取材部位

溃疡、淋巴结、血液

皮损、淋巴结、血液

血液

血液、脑脊液

血液、脑脊液

检查方法

暗视野检查、血清学检查

暗视野检查、血清学检查

血清学检查

血清学检查

血清学检查



1.2.1
血液

1.2.1.1
血清标本

根据需要,用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血

2-5 ml
,室温静置

1-2
小时(或

37
℃静置

30
分钟),待血液凝固、血块收缩后,

3000r/min
离心

10-15
分钟,分离新鲜血清,备用。也可采
用保存于

2-8
℃或

-20
℃的血清。溶血、脂

血或污染的标本可影响试验结果。

1.2.1.2
血浆标本

根据需要,用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血

2-5 ml
,轻轻颠倒混



8-10
次,

3000r/min
离心

10-15
分钟,分离血浆,备用。血库血浆以及

EDTA
抗凝血浆同样可
以用于梅毒血清学实验

(一般仅用于

RPR
实验,),但易出现假阳

性反应(需用血清复试)

,如
用其他抗凝剂应首先评价后再用。

1.2.1.3
末梢全血

消毒局部皮肤(成人和

1
岁以上儿童可选择手指或耳垂,

1
岁以下儿童采用足跟

部)。一次性采血针刺破皮肤,用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液,立

即用于检测。

1.2.2
皮损部位组织液

1.2.2.1
用于病原学检查

用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀

/
刮勺轻刮、挤
压皮损

部位,取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视

野显微镜检
测,或取渗出液直接涂片,用于镀银染色试验。

1.2.2.2
用于核酸检测

用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀

/
刮勺轻刮、挤压
皮损

部位,刮取渗出液,加入有

DNA
保存液(

1ml/
管)的标本管中,备用。

1.2.3
淋巴液

无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结,

注入无菌生理盐水并反复抽吸

2-3
次,取少量的

淋巴液直接滴于载
玻片上,加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。

1.2.4
脑脊液

操作由专业人员进行,

一般用腰椎穿刺术获得。

患者侧卧于硬板床,

两手抱膝紧


腹部,头向前胸屈曲,

使躯干呈弓形,

以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿

刺点,相当于第

3-4
腰椎棘突间隙,消毒处理后,用

2%
利多卡因自皮肤到椎间

韧带作局部麻醉。

术者用左手固定穿刺
皮肤,

右手持穿刺针以垂直背部方向缓缓

刺入,针尖稍斜向头部,成人进针深度约

4-6cm
,儿童约



2-4cm
。当针头穿过韧

带与硬脑膜时,

有阻力突然消失落空感,

此时可将针芯慢慢抽出,

即可见
脑脊液

流出,至于合适的容器中,备用。

标本接收的标准

1.3.1
核对样品与运送单,检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚

存留的样品移出,对
样品管和盛器消毒并做记录。

1.3.2
检查样品的状况,

记录有无严重溶血、

微生物污染、

脂血以及黄疸等情况。

如果样品污染
或者认为样品不能被接受,

应将样品安全废弃。

并将样品情况立即

通知运送机构。

1.3.3
对不合要求的标本,可以拒绝接受。

2
、梅毒的实验室检查

梅毒螺旋体暗视野显微镜检查

2.1.1
原理

梅毒螺旋体侵入人体后,

在皮肤黏膜下增殖,

并很快沿着淋巴管到达附近淋巴结,

经过

2-4
周的
潜伏期,在侵入部位发生炎症反应,称为硬下疳,数天到

1
周后,

淋巴结肿大。

二期梅毒是梅毒螺
旋体由局部经淋巴结进入血液,

在人体内大量播

散后而出现的全身表现,一般发生在感染后的

7-10
周或硬下疳出现后

6-24
周,

主要为皮肤黏膜损害,

有扁平疣、

黏膜斑和玫瑰斑疹等。

患梅毒的
孕妇可以通过

胎盘使胎儿受染。研究证明,在妊娠期

7
周时,梅毒螺旋体即可通过胎盘。其梅

毒患
者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可检查到梅毒螺旋体。

将标本置于暗视野显微镜
下,

光线从聚光器的边缘斜射到涂片上,

可使梅毒螺旋

体折射出亮光,从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。

2.1.2
方法

2.1.2.1
仪器耗材:

1)
暗视野显微镜

2)
无菌纱布

3)
不锈钢刮刀

4)
灭菌棉拭子

5)
载玻片、盖玻片



6)
注射器,注射针头

7)
灭菌生理盐水

2.1.2.2
检测流程

1)
将待检标本制成生理盐水涂片,加盖玻片后立即备检。

2)
在预先调整好的暗视野显微镜的聚光器上加数滴浸油,轻轻调低聚光器,使

之在载物台下方。

3)
将标本玻片置载物台上,上升聚光器,使浸油接触载玻片底面,避免浸油内

有气泡。

4)
镜检:先低倍后高倍,寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。

2.1.3
结果

2.3.1.1
结果判读:

在暗视野显微镜下观察

,
发现有纤细、白色、有折光的螺旋状微生物,



6-20um,
直径小于,有

6-
14
个螺旋,具有旋转、蛇行及伸缩等特征性的运动方式,可判

断为梅毒螺旋体。

2.3.1.2
结果报告:

暗视野显微镜下若发现上述特征的梅毒螺旋体则报告阳性结果;

未见到上述特


的梅毒螺旋体则报告阴性结果。

2.1.4
临床意义

1)
梅毒螺旋体暗视野显微镜检测阳性在临床上可确诊梅毒,

特别是对于有皮肤

黏膜损害和淋巴结病
变的一、二期梅毒的诊断具有重要价值,且具有快速,

方便,易操作等特点。

2


若未能发现梅毒螺旋体,不能排除梅毒诊断。阴性结果原因可能为:标本中

的微生物数量不足
(单次的暗视野检测其敏感性低于

50%
)、病人已接受治疗、

皮损已接近自然消退或取自非梅
毒性皮损。

3


无论暗视野显微镜检查的结果如何,都应进一步进行血清学检测。

2.1.5
注意事项

1


取材前,应用无菌生理盐水清洁皮肤表面,取材时应注意无菌操作。

2


应取到组织渗出液,尽量避免出血,以提高检出阳性率。

3


取材后应立即置暗视野显微镜下观察,如搁置太久,梅毒螺旋体活动能力会

下降,导致镜下难以
观察到阳性结果。



4


对口腔溃疡标本,

在暗视野显微镜下如观察到梅毒螺旋体的特征性形态和运

动方式,应与其他
螺旋体相区别。

.
甲苯胺红不加热血清试验(

TRUS

T

2.2.1
原理

梅毒螺旋体一旦感染人体,

宿主迅速对感染早期被损害的自身细胞以及梅毒螺旋

体细胞表面所释放
脂类物质做出免疫应答,



3-4
周内可产生抗类脂抗原的抗体

(亦称为反应素)。这种抗体在体外
可与心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原



%
心磷脂、

%
卵磷脂和

%
胆固醇)发生抗原

-
抗体反
应。心磷脂、卵磷脂和胆固醇

都是醇溶性脂类,

遇水形成胶体溶液。

当含有反应素的梅毒血清与之
混合时,



粘附在胶体颗粒的周围。经摇动、碰撞,形成抗原抗体复合物,出现凝集颗粒,

即为阳
性反应。甲苯胺红不加热血清试验即在抗原中加入甲苯胺红颗粒作为指示

物,与待检血清(浆)中的
反应素结合,形成肉眼可见的红色絮状物。血清不需

灭活,肉眼可观察结果。

2.2.2
方法

2.2.2.1
仪器耗材:

1

TRUST
试剂盒

2


水平旋转仪:要求旋转环状直径为

2cm
,转速为(

100
±
2

r/min
,并带有计

时器和保湿盖)

3


无菌生理盐水(

%


2.2.2.2
检测流程:

2.2.2.
定性试验

1


试剂准备:检测前将试剂盒置室温预温

30
分钟

2


加标本:吸取

50
μ
l
血清(浆)置试验卡片圈中,并均匀地涂布在整个卡圈

内。不能将标本溢出
环圈外面。

3


加抗原:将抗原轻轻摇匀,在每个标本圈中,用专用滴管针头垂直滴加

1



60
±
1

/ml
,约

17
μ
l/
滴)抗原
,
不需要手工混匀。

4


反应:将卡片置水平旋转仪上,建议罩上保湿盖,


100
±
2


r/min
旋转

8
分钟。

5


从旋转仪中取出卡片后立即在亮光下用肉眼观察结果。

用手轻微的旋转或倾

斜卡片可有助于弱

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