西苑医院子宫内膜异位症动物模型再评价

2021年1月31日发(作者：孩子的饮食)





















子宫内膜异位症动物模型再评价

子宫内膜异位症

（内异症）

是指有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的
身 体其他部位的疾病。是一种激素依赖性、

出血性、

炎症性、

遗传性疾病，

临床症状可
表现为盆腔痛、

月经失调、

不孕、

盆腔包块等
[ 1]
。自
1860
年首次报道该病以来，

其发
病机理至今尚未完全明了，

它仍是令妇科专家们

“迷惑的疾病”

。根据近年来的研究显
示，

内分泌异常改变有利于子宫内膜移位种植，

未成熟卵泡黄素化可能是发生内异症的病
因之一。患者常伴有细胞和体液免疫功能的异常，

有部分免疫球蛋白与补体的变化及细胞
免疫反应异常，

患者的血中与腹腔液中可发现多种自身抗体。
加强对本病的基础研究，

特
别是建立理想的动物模型模拟人类内异症，

以便进行反复的、

可控的实验，

在动物身上
进行病因病理、

药物治疗等的研究，

才能有助于尽快地攻克此病。


文献一
















子宫内膜异位症动物模型的构建

1
、材料与方法

1. 1


标本来源


2002
年

4
月至

2002
年

7
月因

EM
入我院妇产科行腹腔镜诊治的患者

8
例。

术后病理
均证实为

EM,
取其在位内膜及腹腔内膜异位囊肿壁。

1. 2


实验动物
[ 1]


SCID
小鼠
,
雌性
,
8
周龄
,
体重

20
～

25g,46
只
,
由军事医学科学院实验动物中心提供

SPF(specific -pathogen free)
条件饲养。

1. 3


方法

1. 3. 1


标本处理



标本置入盛有

4ml
DMEM
培养液
(
含
100U/ml
青霉素
,
100U/ml
链霉素
)
无菌瓶后
,
置于冰
壶
,
快速送入实验室接种
( 1h
内
,
否则影响接种成功率
)[ 1]
。

标本用
0. 1mol/L
的无菌

PBS
漂洗

3
次
,
尽量洗去血块和粘液。

然后于无菌培养皿内等量分置
,
分装入盛有

D MEM
液
的无菌管内
,
准备接种。

1. 3. 2


动物处理


用

1%
的戊巴比妥钠约

0.
07ml
腹腔注射麻醉

SCID
小鼠
,
待小鼠麻醉后固定于操作板上
,
腹部酒精消毒备皮
,
夹起腹部皮肤
,
用无菌小弯剪剪开

0. 5cm
长的小口
,
将已备标本种植于
皮下
,
无菌丝线缝合及纱布包裹。

种植后第

2
天
,
于小鼠腿部肌肉注射

0.
02
ml(
1mg/ml)
苯甲酸雌二醇
,
以促进种植内膜的生长
[ 2]
。

1. 3. 3


动物分组


将在位内膜种植于

SCID
小鼠腹部皮下
,
为在位内膜组
,
再分为

2
周组、
4
周组、
6
周组、
8
周组
,
每组
10
只

。取

SCID
小鼠

6
只将巧克力囊壁种植于其腹部皮下
,
为异位内膜组。

2


结

果

2.
1


种植成功率


除去非手术原因死去的小鼠外

,44
只成活小鼠病灶均种植成功

,
成
功率为

100%
。

2. 2


在位内膜组


分别于

2
周

、

4
周、

6
周、

8
周从小鼠的腹部皮下取出病灶
,
常
规石蜡包埋

,HE
染色
,
可见明显的腺体和间质

。由经验丰富的病理科医生鉴定为子宫内膜
腺体和间质

。光镜下

,
各组间形态学无明显差异。

2.
3


异位内膜组


种植巧克力囊壁的病灶

,HE
染色切片未见腺体和间质
,
却见丰富的
纤维结缔组织

,
经病理科医生鉴定可能为卵巢的纤维组织。

文献二
















自体移植法复制大鼠子宫内膜异位症模型
*
实验动物


1.
普通级雌性成熟未交配过的

SD
大鼠

30
只
,
体重
180- 220 g.
2.
造模方法
[1]
2.1
筛选合格大鼠


所有雌性大鼠每日进行阴道细胞涂片检查
,
选择动情周期

4-
5
d
的大
鼠
,
随机分为模型组及假手术组。在第三个动情周期的动情期
,
将大鼠进行自体移植法手术
造模及假手术。

2.2
手术在无菌条件下
,
以

1%
的戊巴比妥钠
(
40mg/
kg,
ip)
麻醉
,
然后固定大鼠四肢
,
剖
腹
,
切口长约
1-5
cm,
切取右侧宫角处的一段子宫
,
长约

1
cm,
迅速将其置于生理盐水中
,
将子宫内膜与肌层分离
,
并剪取两块各约

5
mm
的内膜组织块
,
将上皮层反向对着体壁
,
将
组织块四角缝固在腹壁上
,
左右各一。右侧宫角断端吻合结扎。关腹前予以庆大霉素生理盐
水溶液冲洗腹腔
,
最后缝合各层组织
,
普通级环境饲养。
4
周后再次剖腹观察移植物生长状
况
,
发现移植物体积增大
,
出现液体积聚
,
移植物被结缔组织或大网膜覆盖并有血管形成。
同时切取移植物送检
,
证实移植物中有子宫内膜上皮细胞、

腺体及间质的生长
,
并有分泌活
动。说明造模成功。

2.3

假手术组处理方法

手术条件及麻醉、

开腹方法均同

EMT
模型组
,
开腹后将右侧子宫
角结扎
,
目的使假手术组达到与

EMT
组均为单侧宫角子宫的生殖环境。同样以庆大霉素生
理盐水冲洗腹腔
,
逐层缝合各层组织。

所有实验动物均同样环境饲养。

3
观测指标


以阴道细胞涂片法分别观察两组大鼠造模后

4
周、

8
周性周期的情况
,
观察内容包括是否
存在动情间期、

动情前期、

动情期、

动情后期的周期性变化即是否有排卵迹象、

周期时
间长短等。
于造模后

8
周各组均于动情期取

3
只实验大鼠
,
假手术组取在位子宫内膜组织
,
模型组取在位及异位内膜组织
,
均以

75%
乙醇固定
,
行石蜡病理切片
,
进行观察。

结

果

1
、子宫内膜异位症模型大鼠性周期的研究


选取性周期规则且周期时间为

4- 5
天的大鼠。
别进行自体移植法造子宫内膜异位症模型及
假手术
,
两组动物各

13
只
,
研究结果表明
,
造模

4
周内子宫内膜异位症模型大鼠及假手
术大鼠性周期均无显著变化。而造模

8
周后再观察性周期
,
此时

EMT
模型组有

2
只大鼠
发生性周期改变
,
性周期改变率
15-38%,
且两只失去正常性周期的大鼠均表现为性周期延
长
,
分别变为

6
d
、

7
d,
仍有动情间期、

动情前期、

动情期、

动情后期的变化
,
但动情
间期时间延长。而假手术对大鼠性周期无影响
,
手术后

8
周
, 13
只大鼠仍保持原性周期。

2
．

子宫内膜异位症模型大鼠动情期在位、

异位子宫内膜的病理分析


假手术组

大鼠在位内膜组织呈分泌早期改变
,
内膜较厚
,
多数腺上皮见核下空泡
,
间质血
管较丰富
,
间质细胞轻度疏松。同样是处在动情期的

EMT
模型组

大鼠
,
在位内膜发育相对
略迟于假手术组
,
部分腺上皮见核下空泡
,
但仍有少量腺上皮呈假复层排列
,
间质亦相对较
致密。

EMT
模型组
(
图

3)
异位内膜较薄
,
发育又迟于其在位内膜
,
腺体呈囊状
,
腺上皮较少
,
仅
少量见核下空泡
,
腺腔内有分泌物潴留
,
间质相对于在位者致密。

文献三















建立裸鼠皮下荧光子宫内膜异位症模型

1

材料和方法



材料：


实验动物：清洁级雌性裸鼠

18
只，
6-8
周龄，体质量

17-20 g
。