秀发临床生化常用地色原及检测波长

2021年1月30日发(作者：大脚趾骨头痛)
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临床生化常用的色原及检测波长


Toos 545nm
苯酚（对氯苯酚）

505nm

NAD
（
P
）
H
指示系统，波长
340nm
，项 目：
ALT
、
AST
、
GLUC
己糖激酶法、
CK
、
UREA
、
LDH
等。

苯衍生物类，波长400-410nm
，如
ALP
、
GGT
、
CHE等。

过氧化物酶指示系统，项目：
TG
、
TCH
、< br>HDL-C
、
LDL-C
、
UA
等。




可见光波长及其互补色：
可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色
（
630
～
700nm
）
、
橙色
（
600
～
630nm
）
、
黄色
（
570
～
600nm
）
、
绿色
（
500
～
570nm
）
、
蓝色（
435
～
500nm
）< br>、紫色（
400
～
435nm
）
。


★

540nm
：


1.
双缩脲测蛋 白：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子
结合，生成蓝紫色化合物，在
5 40nm
处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以
计算蛋白质含量。


2.
染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红
Y
燃料离 解成
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阴离子型，染料的

黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中
的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基， 离解生成带－
NH3+
基团，与染料阴
离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白 燃料复合物，
其
540nm
处吸光
度大小与蛋白质浓度呈比例。


★

628nm
：


1.
溴甲酚绿法测血清白蛋白：在
PH4.2
的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与
带负电 荷的溴甲酚绿（
BCG
）生成蓝绿色复合物，在波长
628nm
处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。


★

603nm
：


1.
溴甲酚紫法（
BCP）测血清白蛋白：
BCP
溶于
PH5.2
的醋酸缓冲液中，呈黄
色。当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长
603
出有最大吸收峰。


★

650nm
：


1.
磷钨酸法测黏蛋白：
以
0.6mol/L
过氯酸沉淀血清中蛋白质时，
黏蛋白 不被沉
淀，
仍存留在滤液中，
再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，
然后以酚试剂测定沉 淀物中蛋
白质的含量。


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2.
米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶 液中与钼酸铵反应生
成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。在试剂中加入吐温－
80
以抑制蛋白质的干扰。


★

604nm
：


1.
邻苯三酚红钼络合显色法测脑脊液 总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红色
复合物
（吸收峰
475nm
）
。
该复合物在酸性条件下与蛋白质形成复合体，
其吸收
峰移至
604nm< br>。用比色法求蛋白质含量。


★

530nm
：


1.
比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋 白质与磺基水杨酸－硫酸钠试剂作用产生
沉淀，所形成的浊度在
530nm
处进行吸光 度测定，与同样处理的标准液比较测
得蛋白含量。


★

415nm
：


1.
亲和层析法测
HbA1c< br>：用于分离糖化与非糖化
Hb
的亲和层析凝胶柱，是交
联间－氨基苯硼酸的琼脂 糖珠。硼酸与结合在
Hb
分子上葡萄糖的

顺位二醇基
反应，形成可 逆的五环化合物，致使样品中的糖化
Hb
选择性地结合在柱上，而
非糖化
Hb
则被洗脱。
然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化
Hb
，
在
415nm
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分别测定解析液的吸光度，计算糖化
Hb
的百分率。


★

550nm
：


1.
糖化血清蛋 白测定：血清葡萄糖能与白蛋白及其他血清蛋白分子
N
末端的氨
基发生非酶促糖化反应 ，
形成高分子酮胺结构。
此酮胺结构能在碱性环境中与硝
基四氮唑蓝
（
NBT
）
发生还原反应，
生成甲？，
以
1
－脱氧－
1
－吗啉果糖
（
DMF
）
为标准参照物，在
550nm< br>处进行比色。


★

340nm
：


1.
血清前白蛋白测定：
血清中的
PA
与抗
P A
抗体在液相中反应生成抗原抗体复
合物，使反应液呈现浊度。当一定量抗体存在时，浊度与血 清中
PA
的含量呈正
比，利用
340nm
处的散射比浊或投射比浊技 术，与同样处理的
PA
标准比较，
求得样品种
PA
含量。


2.
尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反< br>应生成抗原－抗体复合物，
产生浊度，
与尿中白蛋白浓度呈正比，
利用透射比浊
法测定
340nm
处吸光度，与同样处理的标准品制备的标准曲线比较，求得尿液中的白蛋白浓度。


3.
己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（< br>HK
）催化下，
Glu
和
ATP
发生磷酸
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化反应，生成葡萄糖－
6
－磷酸（
G-6-P
）与
ADP
。前者在葡萄糖－
6
－磷酸脱
氢酶（
G
－
6
－
PD
）催化下脱氢，生成
6
－磷 酸葡萄糖醛酸（
6
－
PG
）
，同时使
NADP
还原 成
NADPH
。反应式如下：

葡萄糖
+ATP
—
HK
—
> G6P+ ADP
G6P + NADP
—
G6PD
—
> 6PG + NADPH + H+
NADPH
的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。
NADPH
在波长
340nm
有吸 收峰，
检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。


4.
葡萄 糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（
GDH
）催化葡萄糖脱氢，氧
化生成葡萄糖 酸（
D
－葡萄糖酸－
&
－内酯）
。

B
－
D
－葡萄糖
+NAD+
—
GDH
—
>D
－ 葡萄糖酸内酯
+NADH
向反应液中加入变旋酶可缩短反应达平衡时间，反应过程中
NADH
生成量与葡
萄糖浓度成正比关系。


5.
血浆 乳酸测定：
在
NAD
存在下，
乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，
同 时生
成
NADH
：

L
－乳酸
+ NAD+
—
LDH
—
>
丙酮酸

+ NADH + H+
在
PH9.8
时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，
使丙酮酸不断从反应体系中移去，
进一步促进反应向右移动，
从而驱动反应< br>的完成。分光光度计波长
340nm
，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。


6.
全血乳酸测定：在
NAD+
存在下，
LDH
催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸
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