有毒中药染色方法总结

2021年1月30日发(作者：北京整形医院排名)
mydye
发表于
2006-3-4 14:37:00

AgNOR
染色法
:

1
、试剂配制：

（
1
）
AgNOR
染色液：

甲液：明胶
2 g
溶于双蒸水至
99 ml
，在
60℃使之完全溶解，再加入纯
甲酸
1 ml
摇匀待用。

乙液：硝酸银
50 g
溶解于双蒸水中至
100 ml
，4℃冰箱保存。

（
2
）
AgNOR
工作液

取甲液
10 ml
，乙液
20 ml
临用前混合。

2
、步骤：

（
1
）切片脱蜡至水

（
2
）双蒸水洗
2
次

（
3
）
AgNOR
工作液中（25℃）浸染
30
分钟（暗处进行）（镜下观察）

（
4
）双蒸水洗
3
次

（
5
）脱水
,
透明
,
封固

3
、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色，
AgNOR
呈棕黑色颗
粒状。


B
鞭毛染色法
:

１．试剂配制：

甲液：丹宁酸

５克

氯化铁（ＦｅＣｌ
3
）

１．５克

福尔马林（１５％）

２．０毫升

氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％

１．０毫升

乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ
3
）

２克

蒸馏水

１００毫升

制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升 备用，向余下的９０毫升
硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶
解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，
先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续 边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻
微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。

２．染色方法：

（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６ —
２０小时，备用。

（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水 ，然后
用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流
至另一水滴中，两 水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，
待干燥后染色。

（３）在干燥涂 片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或
用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒 钟。染色时在酒精灯
上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。

（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

３．注意事项：

（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。

（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。

（３）防止水及培养物沾有氯化物。

（４）切忌用接种环涂抹培养物。
< br>（５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，
浸泡２４小时，取出水洗 除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。

（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。


β
－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。

β
－半乳糖苷酶的活性可以用
X-gal
（
5-
溴－
4-
氢 －
3
－吲哚－
β
－
D
－
半乳糖苷）等显色底物加以 检测，
β
－半乳糖苷酶可将
X-gal
转变为不
溶性的深蓝色沉淀。

X-gal
可以做为组织染色剂，可以在所有表达
β
－半乳糖苷酶 的植物和
动物组织上产生颜色。

应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。


C
CAE
染色步骤

1
、试剂配制：

（
1
）
A
液：萘酚
-AS
—
D
氯 醋酸
10mg
溶于
N,N-
二甲基甲酰胺
1ml
中。

（
2
）
4
％副品红液：取盐酸副品红
(EM
级
)1g
，溶于蒸馏水
20ml
内，再
加入
10m1
／
L
的
HCl 5m1
，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下。于
使用前，取等量副品红液与新鲜的
4
％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化
物试纸测试，瞬 间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的
亚硝酸盐。

（
3）
B
液：
o
．
1mol/L
的
Michael is Veronal-
醋酸缓冲液
(PH 7.6)30ml
，
加入新配制 的副品红液
3
滴，用
1moI
／
L HCl
使
PH
值调至
6
．
3
。

2
、染色步骤：

（
1
）将
A.
、
B
二液混合，过滤，加入氟化钠
(17mg/10ml),
使之最后浓
度为
0.04mol/L.
（
2
）切片置于上述溶液内孵育
1h(30℃)

（
3
）流水冲洗。

（
4
）苏木素复染。

（
5
）空气干燥后封固。


G
Grimelius
硝酸银反应法（嗜银反应）
:

1
、试剂配制：

硝酸银液
: 1%
硝酸银水溶液
3
毫升

蒸馏水
87
毫升

0.2M
醋酸缓冲液
(PH5.6) 10
毫升

还原液
:
对苯二酚
1
克

亚硫酸钠
5
克

蒸馏水
100
毫升

2
、染色步骤
:
（
1
）切片脱蜡至蒸馏水

（
2
）60℃硝酸银液内
3
小时

（
3
）用滤纸吸去周围银液
,
蒸馏水速洗

（
4
）入
45℃的还原液处理
1
分钟

（
5
）蒸馏水洗

（
6
）
5%
硫代硫酸钠处理
1
分钟
(
可不做
)
（
7
）水洗
,
脱水
,
透明
,
封固

3
、结果：嗜银颗粒呈棕黑色 。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，
故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。


H
HID
染色法
1
、染色步骤
:
（
1
）切片脱蜡至蒸馏水

（
2
）放入预热的
1
当量盐酸中
10
分钟

（
3
）蒸馏水洗

（
4
）
Schiff
液中染
10
分钟
< br>（
5
）
自来水洗
15
分钟至细胞核红色
（如
2
～
5
步不做，可在染好爱先蓝
后染核固红
2
分钟）

（
6
）蒸馏水洗

（
7
）高铁二胺液
18
～
24
小时

（
8
）爱先蓝液
(p H2.5)
染
10
～
20
分钟

（
9
）蒸馏水洗

（
10
）脱水
,
透明
,
封固

2
、结果
:
硫酸化酸性粘液呈棕黑色
,
羧基化酸性粘液（ 唾酸粘液）物质
蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，
此法多用 于确定肠化的分型。


HP
（硝酸银法）

1
、试剂配制：

（
1
）醋酸缓冲贮备液，
PH3.6
0.2N
醋酸缓冲液，
PH3.6 10 ml
蒸馏水
240 ml
以下各液均用此液配制

（
2
）
1 %
硝酸银液

硝酸银
1 g
醋酸缓冲贮备液，
PH3.6 100 ml
（
3
）
2 %
硝酸银液

硝酸银
0.2 g
醋酸缓冲贮备液，
PH3.6 10 ml
（
4
）
5 %
明胶液

明胶
5 g
醋酸缓冲贮备液，
PH3.6 100 ml
先把醋酸缓冲贮备液加温至
40℃左右，
然后倾入明胶，
于< br>37℃温箱内慢
慢溶解，搅

拌。

（
5
）
3 %
对苯二酚液

对苯二酚
0.3 g
醋酸缓冲贮备液，
PH3.6 10 ml
（
6
）明胶对苯二酚液

3 %
对苯二酚液
1 ml
5 %
明胶液
15 ml
（
7
）显影液

明胶对苯二酚液
16 ml
2 %
硝酸银液
3 ml
在操作到第
4
步完成前
5
分钟充分混合，置于
56℃水浴箱中保温 待用。

2
、操作方法：

（
1
）组织脱蜡至蒸馏水

（
2
）醋酸缓冲贮备液洗
2
次

（
3
）入
1 %
硝酸银液中，56℃，
1
小时

（
4
）切片不水 洗，直接放入预热的显影液中
56℃，肉眼呈黄棕色为止。

（
5
）倾去显影液，于
56℃的水中浸洗
2
分钟

（
6
）水洗

（
7
）脱水，透明，封固。

3
、结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。


Highman
甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）

1
、试剂配制：

甲醇刚果红染液
:
刚果红
0.5 g
甲醇
80 ml
甘油
20 ml
碱性乙醇分化液
:
氢氧化钾
0.2 g 80%
乙醇
100 ml
2
、染色步骤
:
（
1
）切片脱蜡至水

（
2
）甲醇刚果红染液染
10
～
20
分钟

（
3
）用碱性乙醇分化液分化数秒

（
4
）水洗

（
5
）苏木素复染
2
分钟

（
6
）水洗

（
7
）脱水
,
透明
,
封固

3
、结果：淀粉样物呈桔红色。

4
、类淀粉染色的应用：

确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织，后者在 刚果红法染色后呈淡
桔色，常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。

L
六胺银染色法
1
、试剂配制：

六胺银液配制：

3%
六次甲基四胺水溶液
5 ml
2.5%
硝酸银水溶液
0.5 ml
摇晃，变清，再加
2.5%
四硼酸钠
1.5~2 ml
加蒸馏水至
30~40 ml
2
、步骤：

（
1
）切片脱蜡至水，蒸馏水洗

（
2
）
0.5%
高碘酸浸
15
分钟，蒸馏水洗

（
3
）六 胺银液
60℃，
1-2
小时，（或六胺银液
80-
90℃，半小时左 右）
蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）

（
4
）
0.2%
氯化金调色数秒

（
5
）丽春红淡染

（
6
）水速洗

（
7
）烘干，透明，封片。

3
、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑
色。


M
Mallory
三色法
1
、步骤

（
1
）切片脱蜡至水

（
2
）
0.5%
酸性复红水溶液
1 min
（
3
）蒸馏水洗

（
4
）入下液
1-2min
苯胺蓝
0.5g
，桔黄
G 2g
，磷目酸或磷钨酸
1g
，蒸馏水
100ml
。

（
5
）蒸馏水洗

（
6
）
95%
乙醇分色

（
7
）脱水，透明，封片。

2
、结果：胶原纤维蓝色，

红细胞桔黄色，核红色。


M
allory
磷钨酸～苏木素染色法（
PTAH
）


1
、试剂配制：

苏木素
0.1 g
磷钨酸
2.0 g
蒸馏水
100 ml
先将苏木素加热溶 于
20
毫升蒸馏水
,
再将磷钨酸溶于
80
毫升蒸馏水。等
苏木素冷却后，加入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可使用。如
急用，可加入0.2 g
高锰酸钾
,
加速其成熟。

2
、染色步骤
:
（
1
）切片脱蜡至蒸馏水。
< br>（
2
）放入
0.25%
高锰酸钾水溶液
5
分钟。
（
3
）蒸馏水洗。

（
4
）
2.5%
草酸漂白
5
分钟。

（
5
）蒸馏水洗多次。

（
6
）置于磷钨酸苏木素 溶液
12
～
24
小时。

（
7
）
95%
酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精，置
60℃温箱中烘干。

（
8
）二甲苯透明，封固。

3
、结果：纤维胶质，肌胶质 ，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝
色。胶原，网状纤维和骨基质着黄色或砖红色。在工作中常用 于观察横
纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征。


Masson
三色染色法、

1
、试剂配制：

丽春红酸性品红液：

丽春红
0.7 g
酸性品红
0.3 g