睾丸疼痛是怎么回事标准菌种确认标准操作规程

2021年1月30日发(作者：满月脸怎么办)



一


目的

建立标准菌种确认标准操作规程，
以减少菌种污染和生长特性的改变，
保证实验结果的可
靠性和准确性。


二


范围

本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。


三


内容

1.1
试验菌株

大肠埃希菌（
Escherichia coli
）
[CMCC(B)44102]
金黄色葡萄球菌（
Staphylococcus aureus
）
[CMCC(B)26003]
枯草芽孢杆菌（
Bacillus subtilis
）
[CMCC(B)63501]
白色念珠菌（
Candida albicans
）
[CMCC(F)64941]
黑曲霉（
Aspergillus niger
）
[CMCC(F)98003]
铜绿假单胞菌（
Pseudomonas aeruginosa
）
[CMCC(B)10104]
生孢梭菌（
Clostridium sporogenes
）
[CMCC(F)98001]
1.1.1
标准菌株

1.1.1.1
标准菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构。

1.1.1.2
标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。

1.1.1.3
标准储备菌株应进行纯度和特性确认。

1.1.2
工作菌株

1.1.2.1
标准储备菌株可用于制备每两个月或定期转种的工作菌株。

1.1.2.2
工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过
5
代（从菌 种收藏机构获得的标准菌
株为第
0
代）
，以防止过度的传代增加表型变化的风 险。因此必要时，应对工作菌株的纯度和
特性进行确认。

1.2
菌种确认试验的主要内容

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7
页


1.2.1
菌种的纯度确认

1.2.1.1
纯度检测：是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。

1.2.1.2
试验内容

①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适 宜培养后，同一平
板上的单菌落的大小、
形状、
颜色、
质地、
光泽等 是否相似；
对于两种或以上形态的出发菌株，
应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是 否重复出现相同特征。

②镜检特征：对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞 形状、大小、荚膜、芽
孢等特征应相似。

1.2.2
菌种的特性确认

1.2.2.1
生化试验：各种微生物具有各自的独特 的酶系统，因而在代谢过程中所参与的物质
分解和合成代谢的产物也不同，这些代谢产物又具有不同的生 化特征。根据此特征，利用生物
化学方法来鉴定不同的微生物的试验即为微生物的生化试验。

1.3
菌种的确定方法

用无菌接种环粘取培养物，在相应的培养基平板 上划线分离单个菌落，并在适宜条件下培
养。培养后观察是否具有典型的菌落形态，然后挑取单一纯菌落 ，进行革兰氏染色、镜检，观
察其染色特性及菌形。再做生化试验或使用菌种鉴定系统进一步鉴定菌种。

1.3.1
大肠埃希菌的确认

1.3.1.1
菌落形态

1.3.1.1.1
取大肠埃希菌新鲜培养物至营养肉汤培养 基中，经
35
℃培养
18
～
24h
后，形成菌
膜， 管底有粘液状沉淀，培养物有粪臭味。

1.3.1.1.2
取上述培养物接种于 曙红亚甲蓝琼脂
(EMB)
琼脂平板和麦康凯琼脂平板上，
35
℃培
养
18
～
24h
后，观察结果。

①曙红亚甲蓝琼脂
(EMB)
平板上菌落形态呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色
,
菌落中心呈深紫< br>色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑、湿润，常有金属光泽。

② 麦康凯琼脂平板上菌落形态呈鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘
整齐，表面光 滑，湿润。

1.3.1.2
革兰染色、镜检

1.3.1.2.1
革兰染色

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①以接种环沾取无 菌水于洁净载玻片上，
取菌落形态
（①、
②）
的培养物少许，
制成均 匀涂片，
自然或微温，再通过火焰
2
～
3
次干燥使固定。

②滴加结晶紫染液，染色
1min
，水洗。

③滴加碘液，媒染
1min
，水洗，以滤纸吸干余水。

④滴加95
﹪乙醇，脱色
20
～
30s
，至流出液无色，水洗。

⑤滴加沙黄染液，复染
1min
，待干后，镜检。

1.3.1.2.2
染色结果应是：革兰阳性菌呈蓝紫色：革兰阴性菌呈红色。

1.3.1.2.3
镜检结果应是：两端钝圆的短小直杆菌，单个或成对，革兰阴性，无芽 孢，多有
鞭毛，以周身鞭毛运动或不运动，许多菌株有荚膜和微荚膜。

1.3.1.3
生化试验

1.3.1.3.1
靛基质试验 （
I
）
：取菌落形态（①、②）的培养物接种于蛋白胨水培养基中，培
养24-48h
，沿管壁加入靛基质试液数滴，轻轻摇动试管，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色< br>为阴性。

1.3.1.3.2
甲基红试验（
M
）
：取菌落形态（①、②）的培养物接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养
基中，培养
48
±< br>2h
，于培养液中加入甲基红指示液
2
～
3
滴（约
1 ml
培养液加指示液
1
滴）
，轻
微摇动，立即观察，呈鲜红色或橘红 色为阳性，呈黄色为阴性。

1.3.1.3.3
乙酰甲基甲醇生成试验（
V-P
）
：取菌落形态（①、②）的培养物接种于磷酸盐葡
萄糖胨水培养基中，培养
48
±
2h
，
，于
2ml
培养液中加入
α
-
萘酚乙醇试液
1ml
，混匀，再加
40%
氢氧化钾试液< br>0.4ml
，充分振摇，在
4h
（通常在
30min
）内出现 红色应判为阳性，无红色反
应为阴性。

1.3.1.3.4
枸橼酸盐利 用试验（
C
）
：取菌落形态（①、②）的培养物接种于枸橼酸盐培养基
斜面上 ，培养
2-4
天，培养基斜面有菌苔生成，培养基由绿色变为蓝色时为阳性，培养基颜色
无改变、无菌苔生长为阴性。

1.3.1.3.5
乳糖发酵试验：取菌落形态 （①、②）的培养物接种于乳糖发酵管，培养
24-48h
，
观察产酸（指示剂为酸性 品红者为红色：指示剂为溴麝香草酚蓝者为黄色）
，产气（小倒管内
有气泡，气泡无论大小都是 产气）
。

1.3.2
金黄色葡萄球菌的确认

1.3.2.1
菌落形态

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页，

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7
页