北京白癜风医院各类糖含量的测定

2021年1月30日发(作者：肾亏的症状)
糖的测定方法有很多，大致可分为三类

1.
物理法，
（
1.
旋光法
,

2 .
折光法
,

3.
比重法
,
）

2.
物理化学法
,(1.
点位法
,
2
极普法
,
3.
光度法
,
4.
色谱法
)

3.
化学方法
,(1.
斐林氏法
.
2.
高锰酸钾法
.
3.
碘量法
.
4.
铁氰化钾法
.
5.
蒽铜比
色法
.
6.
咔唑比色法
)

共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。

一
.


总糖的测定

食品中的总糖主要指具有还 原性的葡萄糖，
果糖，
戊糖，
乳糖和在测定条件下能
水解为

还原性的单糖的蔗糖（水解后为
1
分子葡萄糖和
1
分子果糖）
，麦 芽糖（水解后为
2
分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为
2
分子葡 萄糖）
。还原糖类之
所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基（
-CHO
）或酮基
(=C=O)
。

测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧 化为基础的。
这些方法中，
以
各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广 。
在这里我们主要给大
家介绍铁氰化钾法，蒽铜比色法，斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反应 复杂，
影响因素较多，所以不如铁氰化钾法准确，但其操作简单迅速，试剂稳定，故被
广泛采用 。蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测液澄清，
此外，在大多数情况下，测定要求 不包括淀粉和糊精，这就要在测定前将淀粉，
糊精去掉，这样就使操作复杂化，限制了其广泛应用。
（一）




铁氰化钾法

1.
原理：
样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，
在碱性溶液中能
将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的

浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应为下：

C
6
H
12
O
6
+6K
3
[Fe (CN)
6
]
+
6KOH
→
(CHOH)
4
·
(COOH)
2

+
6K
4
［
Fe(CN)
6
］
+
4H
2
O

滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。

2
，试剂

1
）
1
％的次甲基兰指示剂

2)
盐酸（水解作用）

3
）
10
％和
3 0
％的
NaOH
溶液

4
）
1
％铁氰化钾（贮存特色瓶，临用前标定）

标定步骤

称蔗糖
1.0000g
→定容
500ml
→取此液
50ml
→于
100ml
容量瓶→加
hcl5ml
→摇匀→
65-70
℃水裕
15
分钟→取出冷却→用
30
％
NaOH
中和→加水于刻度→
倒入滴定管中→取
10ml1
％铁氰 化钾于锥形瓶中→加
10
％
NaOH2.5ml
加
12.5
ml
的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰
1
滴→立即以糖液
滴足至蓝色退去为止，记录用量。

正式滴定比较滴定时少
0.5ml
糖液 ，煮沸
1
分钟，加指示剂一滴，再用糖液滴定
至兰色褪去，计算铁氰化钾溶液的浓度。

A=(W
·
V)/(1000
×
0.95)

A
：相当于
10ml
铁氰化钾溶液的转化糖的量（克）

V
：滴定时消耗的糖液的体积

W
：称取纯蔗糖的量

1000
：稀释比

0.95
：换算等数

3
．操作方法

稀释
10g
→用
100ml
水作溶液→于
250ml
容量瓶→加
20
％醋酸铅
10ml
→至沉
淀完为止→加
10ml10
％
NA2HPO4
→至不在产生 沉淀为止→加水至刻度→过
滤－取滤液
50ml
→于
100ml
容量 瓶中→按铁氰化钾标定法进行转化，
中和及滴
定

计算糖含量

总糖（以转化糖计
%
）
=
(A
×

1000)/(W
·
V)
×

100












































A
：相当于
10ml
铁氰化钾溶液的转化糖的重量，

W
：样品的重量

V
：滴定时样液消耗的体积

4
．实验应注意

（
a
）达终点时，过量的转化糖将指示剂 次甲基兰还原为无色的隐色体，隐色体
容量受空气中氧所氧化，很快又变

成指示剂的颜色。

（
b
）整个过程应在低温电炉上进行，滴定要速度，否则终点不明显

（
c
）糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛，生产物再与蒽铜缩合成兰色化合
物， 其颜色深浅与溶液中糖的浓度

成正比，单、双糖等糖类都直接于试剂发生作用，因此不需要水解。

（二）蒽铜的比色法

1.
原理：
糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃 甲醛，
生产物再与蒽铜缩合成兰色化
合物，其颜色深浅与溶液中糖的浓

度成正比，可比色定量。

2.
试剂

（
1
）




硫酸锌溶液：溶解
500g
化学纯硫酸锌于
500ml
水中

（
2
）




亚铁氰化钾溶液：溶解< br>10.6g
化学纯亚铁氰化钾于
100ml
水中

（
3
）




0.2
％蒽铜试 剂：溶解蒽铜
0.2g
于
100ml95
％硫酸中，置棕色瓶中冷
暗 处保存

（
4
）




0.1
％葡萄糖液：准确称干燥葡萄糖
0.1000g
定容
100ml

3.
操作方法

（
1
）




标准曲线绘制

（
2
）




100ml
容量瓶编号


沸水浴加热
6
分钟，< br>取出冷却→用
1cm
比色杯→
610nm
测定吸光度→作出以吸
光度为横坐标，糖液浓度为纵坐标的准

曲线

（
3
）样品测定

称
10g
样品→于
10 0ml
热水加入
500ml
容量瓶中－加硫酸锌
5ml
→沸水浴5
分
钟→取出再摇动下加亚铁氰化钾
5ml
，→冷却→定容
50 0ml
→过滤→吸滤液
25
ml
→于
250ml
容量瓶→定 容
250ml
→取稀释液
1ml
，于比色管中→加
10ml
蒽
铜试剂→摇匀→水浴加热
6
分钟→冷却→比色

试验注意

1
，样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀

2
，样品颜色较深时，可用活性炭脱色后再进行测定

3
，此法与所用的硫酸浓度和加热时间有关

4
，所取糖液浓度在
1-2.5mg/100ml
之间

二
.


还原糖的测定方法

还原糖包括葡萄糖、 果糖、麦芽糖，在葡萄糖分子中含有淤青的醛茎，在果糖分
子中含有淤青的酮茎，在乳糖中和

麦芽糖中含有淤青的半缩羧茎，
因此都有还原性。
在测定还原糖时一般测定总糖
时所有将糖类水解为转化糖再测定

的方法都可用来测定还原糖。

（一）斐林氏容量法

1.
此法的原理、
试剂、
方法与总糖 的测定方法相同。
只是样品溶液不必以过转化，
而是直接取滤液进行滴定，滤液进行滴定，滤液 中的还原糖含量以在
0.2-0.5%
为好，又能通过增减样品量或改变稀释倍数来调节。10
毫升费林氏
A
、
B
液混
合时理论上相当还原糖量如 下：

葡萄糖（无水）果糖或转化糖尿病


0.0500
克

乳糖尿病
























0.0678
克

麦芽糖


























0.0807
克


2
试剂

（
1
）




斐林氏
A
液，称
69.8g
cp
硫酸铜于
100ml
水中，过滤备用

（
2
）




斐林氏
B
液，
称

浓流锌钠和
100gcp
NaOH
于
1000ml
水中，
过滤备用

3
方法

称取样品
10-20g
：制备与转化同铁氰化钾法 。将样液倒入滴管中，吸取
A,B
液
准备预滴定

预滴定：

吸
A
、
B
液各
5ml
→从滴管中加
15m l
样液→加热至沸→继续滴加样液→至兰色
变潜→加
3
滴次甲基兰→在
1
分钟内滴定到终点

达到终点时，
稍微过量的转化糖，
将兰色的 次甲基兰染色体还原为无色的隐色体，
而显出氧化亚铜的红色，去碱性条件下加热糖的产物是复杂的。< br>
去碱性中断裂是由于碱度不同，
加热时间不同，
生产不等的碎片，
这 种碎片给后
面滴定带来误差，而且，这种碎片与糖没有化合量的关系，所以，
Lanecrol
-
E
ynon
Method
作出数据检索表

正式滴定：

吸
A,B
液各
5ml
→于三角瓶→加 比预定量少
0.5-1.0ml
样液→
2
分钟内要求沸腾
1
分钟→加
3
滴指示剂→用样液滴定兰色消失

总沸腾时间为
3
分钟，即滴定在
3
分钟完成。

计算：

还原糖＝( F·
V
2
)/(W·
V
1
)×
100

F
：转还糖回数，即与
10ml
斐林氏试液相当的转化糖毫克数，

V
1
：样品试液总体积

V
2
：样品试液滴定量

W
：样品重量

在测量乳糖制品时，若蔗糖与乳糖的含量比超过
3
：
1
时，则应与滴定量中加 上
相关表中（课本中表
9-8
）校正值后在进行计算

我们举例如下：