熊胆粉的作用总糖的测定

2021年1月30日发(作者：肺癌化疗)
一
.
总糖的测定

食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为

还原性的单糖的蔗糖（水解后为
1
分子葡萄糖和
1
分子果糖），麦芽糖（水 解后为
2
分子葡萄糖）
以及可能部分水解的淀粉（水解后为
2
分子葡 萄糖）。还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含
有游离的醛基（
-CHO
）或酮基
(=C=O)
。

测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础 的。
这些方法中，
以各种根据斐林
氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。
在这里我们主要给大家介绍铁氰化钾法，
蒽铜比色法，
斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反应 复杂，影响因素较多，所以不如铁氰化钾法准确，但其操作
简单迅速，试剂稳定，故被广泛采用。蒽铜比 色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测
液澄清，
此外，
在大多数情况下，
测定要求不包括淀粉和糊精，
这就要在测定前将淀粉，
糊精去掉，
这样就使操 作复杂化，限制了其广泛应用。

（一）铁氰化钾法

1.
原理

样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，
在 碱性溶液中能将铁氰化钾还原，
根据
铁氰化钾的浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应为下 ：

C6H12O6+6K3[Fe(CN)6] + 6KOH
→
(CHOH)4
·
(COOH)2 + 6K4
［
Fe(CN)6
］
+ 4H2O
滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。

2
．试剂

1
）
1
％的次甲基兰指示剂
2 )
盐酸
（水解作用）
3
）
10
％和
30
％ 的
NaOH
溶液
4
）
1
％铁氰化钾
（贮
存 特色瓶，临用前标定）

3
．标定步骤

称蔗糖
1.000 0g
→定容
500ml
→取此液
50ml
→于
100ml< br>容量瓶→加
hcl5ml
→摇匀→
65-70
℃水
裕
15
分钟→取出冷却→用
30
％
NaOH
中和→加水于刻度→倒入滴 定管中→取
10ml1
％铁氰化钾于锥
形瓶中→加
10
％
N aOH2.5ml
加
12.5ml
的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲 基兰
1
滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止，记录用量。

正式滴定比较滴定 时少
0.5ml
糖液，煮沸
1
分钟，加指示剂一滴，再用糖液滴定至兰色褪去 ，
计算铁氰化钾溶液的浓度。

A=(W
·
V)/(1000
×
0.95)
A
：相当于
10ml
铁氰化钾溶液的转化糖的量（克）

V
：滴定时消耗的糖液的体积

W
：称取纯蔗糖的量

1000
：稀释比

0.95
：换算等数

4
．操作方法

稀释
10g
→用
100ml
水作溶液→于
250ml
容量瓶→加
20
％醋酸铅
10ml
→至沉淀完为止→加
10m
l10
％
NA2HPO4
→至不在产生 沉淀为止→加水至刻度→过滤－取滤液
50ml
→于
100ml
容量瓶中→按
铁氰化钾标定法进行转化，中和及滴定，计算糖含量。

总糖（以转化糖计
%
）
= (A
×
1000)/(W
·
V)
×
100
A
：相当于
10ml
铁氰化钾溶液的转化糖的重量，

W
：样品的重量

V
：滴定时样液消耗的体积

5
．实验应注意

（
a
）达终点时，过量的转化糖将指示剂 次甲基兰还原为无色的隐色体，隐色体容量受空气中氧所
氧化，很快又变成指示剂的颜色。

（
b
）整个过程应在低温电炉上进行，滴定要速度，否则终点不明显

（
c
）糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛，生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物，其颜色深 浅与
溶液中糖的浓度成正比，单、双糖等糖类都直接于试剂发生作用，因此不需要水解。

（二）蒽铜的比色法

1.
原理

糖与硫酸反应脱水生成羟 甲基呋喃甲醛，
生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物，
其颜色深浅与溶
液中糖的浓度成正 比，可比色定量。

2.
试剂

（
1
）硫酸锌溶液 ：溶解
500g
化学纯硫酸锌于
500ml
水中

（
2
）亚铁氰化钾溶液：溶解
10.6g
化学纯亚铁氰化钾于
100ml水中

（
3
）
0.2
％蒽铜试剂：溶解蒽铜
0 .2g
于
100ml95
％硫酸中，置棕色瓶中冷暗处保存

（4
）
0.1
％葡萄糖液：准确称干燥葡萄糖
0.1000g
定容
100ml
3.
操作方法

（
1
）标准曲线绘制

（
2
）
100ml
容量瓶编号

沸水浴加热< br>6
分钟，取出冷却→用
1cm
比色杯→
610nm
测定吸光度 →作出以吸光度为横坐标，
糖液浓度为纵坐标的准曲线。

（
3
）样品测定

称
10g
样品→于
10 0ml
热水加入
500ml
容量瓶中－加硫酸锌
5ml
→沸水浴5
分钟→取出再摇动
下加亚铁氰化钾
5ml
，→冷却→定容
50 0ml
→过滤→吸滤液
25ml
→于
250ml
容量瓶→定容
250ml
→
取稀释液
1ml
，于比色管中→加
10ml
蒽铜试剂→摇匀→水浴加热
6
分钟→冷却→比色。

4
．试验注意

（
1
）样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀

（
2
）样品颜色较深时，可用活性炭脱色后再进行测定

（
3
）此法与所用的硫酸浓度和加热时间有关

（
4
）所取糖液浓度在
1-2.5mg/100ml
之间

二
.
还原糖的测定方法

还原糖包括葡萄糖、果糖、麦芽糖，在 葡萄糖分子中含有淤青的醛茎，在果糖分子中含有淤青
的酮茎，在乳糖中和麦芽糖中含有淤青的半缩羧茎 ，因此都有还原性。在测定还原糖时一般测定总
糖时所有将糖类水解为转化糖再测定的方法都可用来测定 还原糖。

（一）斐林氏容量法

1.
此法的原理、试剂、方法与总 糖的测定方法相同。只是样品溶液不必以过转化，而是直接取
滤液进行滴定，
滤液进行滴定，< br>滤液中的还原糖含量以在
0.2-0.5%
为好，
又能通过增减样品量或改变稀释倍数来调节。
10
毫升费林氏
A
、
B
液混合时理 论上相当还原糖量如下：

葡萄糖（无水）果糖或转化糖尿病
0.0500
克；乳糖尿病
0.0678
克；麦芽糖
0.0807
克

2
．试剂

（
1
）斐林氏
A
液，称
69.8g cp
硫酸铜于
100ml
水中，过滤备用。

（
2
）斐林氏
B
液，称

浓流锌钠和
100gcp NaOH
于
1000ml
水中，过滤备用

3
．方法

称取样品
10-20g
：制备与转化同铁氰化钾 法。将样液倒入滴管中，吸取
A,B
液准备预滴定。

预滴定：吸
A
、
B
液各
5ml
→从滴管中加
15ml
样液→加热 至沸→继续滴加样液→至兰色变潜→
加
3
滴次甲基兰→在
1
分钟内滴 定到终点。达到终点时，稍微过量的转化糖，将兰色的次甲基兰染
色体还原为无色的隐色体，而显出氧化 亚铜的红色，去碱性条件下加热糖的产物是复杂的。去碱性
中断裂是由于碱度不同，加热时间不同，生产 不等的碎片，这种碎片给后面滴定带来误差，而且，
这种碎片与糖没有化合量的关系，所以，
L anecrol-Eynon Method
作出数据检索表。

正式滴定：吸A,B
液各
5ml
→于三角瓶→加比预定量少
0.5-1.0ml
样液→
2
分钟内要求沸腾
1
分钟→加
3
滴指示剂→用样液 滴定兰色消失。总沸腾时间为
3
分钟，即滴定在
3
分钟完成。

计算：

还原糖＝
( F
·
V2)/(W
·
V1)
×
100
F
：转还糖回数，即与
10ml
斐林氏试液相当的转化糖毫克数，

V1
：样品试液总体积