人工授精的费用乙肝表面抗原检测操作规程

2021年1月29日发(作者：中老年吃什么奶粉好)
精品文档

乙型肝炎病毒表面抗原检测（
ELISA
）

1
原理：


在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（
HBsAb
）
，配
以酶标记抗体（
HbsAb-HRP
）及
TMB
等其它试剂，采用夹心
法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（
HBs Ag
）
。

2
试剂：

2.1
试剂名称：
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
（酶联
免疫法）

2.2
试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司

2.3
包装规格：
96Test/Kit
2.4
试剂盒组成：
HbsAb
预包被微孔板
（包被
HbsAb
）
，
HbsA g
酶标抗体（含
HRP
标记
HbsAb
）
, HbsAg< br>阳性对照（含基因
工程
HbsAg
）
，
HbsAg
阴 性对照（正常人血清）
，
HbsAg
样品稀
释液（含
BSA
缓冲液）
，浓缩洗涤液（
PBS-T
缓冲液）
，底物
A
（含
H2O2
）
，底物
B
（含
TMB
）
，终止 液（含
H2SO4
）
，封板
膜，自封袋，说明书。

2.5
试剂储存条件及有效期：
2~8
℃避光保存，
有效
12
个
月。

3
样本采集：


取静脉血
3-4ml
于干净容器中分离出血清或血浆标本，
如不及时测定可置于
4
℃ 冰箱保存，如长期保存需置于
-15
至
-20
℃冻存，并避免样本反复冻融。 高脂血、高胆红素及
溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。

4
所需仪器

.
精品文档

4.1
全自动酶免分析仪

4.2
新鲜蒸馏水或去离子水

4.3
酶标仪（单波长
450nm
或双波长
450nm/630nm
）

4.4
微量移液器

4.5 37
℃恒温箱或水浴箱

4.6
洗板机或洗瓶

5
检验方法

5.1
平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至 室温
（
18~25
℃）
，微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。

5.2
配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分
溶解）
，浓缩 洗涤液和蒸馏水去离子水按
1
：
19
稀释后使用。

5.3
编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。

5.4
稀释：每孔加入
20ul
样品稀释液。

5.5
加样：分别在相应孔中加入
100ul
阴、阳性对照血清
或待测样本。

5.6
温育：置
37
℃温育
60min
。

5.7
加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体
50ul
。

5.8
温育：置
37
℃温育
30min
。

5.9
洗涤：用洗涤液充分洗涤
5
次、洗涤后扣干（每次应
保持
30~60s
的浸泡时间）
。

5.10
显色：每孔加 入底物
A
、
B
各
50ul
，轻拍混匀，
37
℃
暗置
30min
。

5.11
终止：每孔加入终止液
50ul
，混匀。

5.12< br>测定：用酶标仪单波长
450nm
或双波长
450nm/630nm
.
精品文档

测定各孔
OD
值（用单波长测定时，需用空白对照调零）
，并
记录结果。

6
结果判定与分析


临界值
（
C.O.
）
的计算：
临界值
=
阴性对照 孔
OD
平均值
*2.1
；
阴性对照
OD
均值小于< br>0.05
时以
0.05
计算。


结果判定：样 本
OD
值
S/C.O.>=1
者为
HbsAg
阳性


样本
OD
值
S/C.O.<1
者为
HbsAg
阴性


阴性对照均值< br>>0.1
或阳性对照均值
<0.4
时，
实验无效，应重新试验。

7
质量控制

每次试验用
HBsAg
的质控血清同步检 测，
S/CO
值应在控制范
围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正
常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。

8
参考范围


阴性

9
临床意义


在血清或血浆 中
HbsAg
的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝
或为无症状携带者。

10
操作性能

灵敏度为
ng/ml
，特异性高

11
方法的局限性

11.1
此方法仅适用于个体的血清或血浆 样本的检测，
不适
合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。

11.2
该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。

11.3
试剂 盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，
阳
性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂 盒中的组分
.