-通城县中医院
酪氨酸酶
是黑素合成的关键酶，可能是
白癜风自身免疫
的重要
抗原
。
最近发现部分白癜风患者
血清
中有酪氨酸酶
抗体
，
且与白癜风
临
床类型
和分期密切相关。
提示自身免疫性白癜风发病机 制与酪氨酸酶
抗体水平有关，
为其
免疫治疗
提供依据。
酪氨酸酶抗体 可以作为白癜
风活动性的一个指标。
酪氨酸酶（
TYR
）是一种< br>75kD
含铜酶，来源于
胚胎神经
峭
细胞
，
是黑素< br>代谢
和
儿茶酚胺
的关键酶。
Spritz
等
[1]< br>证实人
TYR
是一种铜
结合蛋白
，有铜
A
和铜
B
位点
。离子铜特异性能与人
TYR
结合，一个
位点的铜结合可以 促进另一个位点的铜结合。
组氨酸
在铜
B
位点协调
其结合。
TYR
的
多肽
链的适当折叠对铜结合及其
催化
活性是关键性的，TYR
突变
可中断铜结合使其催化活性丧失。
眼、
皮肤白化病
是 由于
TYR
基因突变
所致，该病
TYR
阳性患者色素性皮肤损害发生 率高
[2]
。
超
氧化物
负离子（
O2-
）能穿透< br>黑素细胞
（
MC
）
入胞
内，
TYR
通过利用
O2-
保护
MC
，免受
O2-
细胞毒
作用
[3,4]
。在
黑素瘤
患者黑素瘤细胞
（
MMC
）和
MC
中抗氧化系统失衡，内源性反应性氧生成，细胞内不能
抵御内源性超氧化物的攻击
[5]
。
白癜风患者血清中
TYR
抗体的生成，
提示白癜风的发病 与自身免疫有关。
酪氨酸酶的
抗原性
酶是 多种自身免疫紊乱性
疾病
的
自身抗原
[6]
，
TYR
作为抗原必需
具备下列条件：
①酶活跃性；
②
免疫原性
；
③能诱导识别自身的抗体。
TYR
能暴露于
免疫系统
中，从恶性或 正常
色素细胞
来源的
TYR
，
可以作为
自身抗体
产 物的靶抗原；
TYR
与
蛋白酶
等无
交叉反应
，提示
抗
TYR
抗体对
TYR
是特异性的，
MC
能表达
M HCⅡ
类分子
，
可作为抗原
递呈细胞。人
MMC
能分泌TYR
，
TYR
抗体在黑素瘤患者血清中发现，
其它
恶性肿瘤< br>患者血清中则没有，
提示
恶性黑素瘤
可产生抗
TYR
的抗体
[7,8]
，
TYR
基因
编码抗原能被黑素瘤
细胞毒 性
T
细胞（
CTL
）识别
[9]
，显示系统免疫系统能对< br>TYR
发挥作用
[10]
。
哺乳动物
黑素生成由多个
基因位点
共同参与调控。不同位点基因
及相关
蛋白
具有多 种特征性结构位点（
B
位点，
C
位点，
S
位点和
P
位点）。哺乳动物色素细胞
调节基因
有多种，这些基因的最大特点是
定位于< br>C
位点
（
C-allbino
locus
）
，编码
TYR
。
鼠
C
位点基因长
70kb
，定位第
7
号
染色体
，人
C
位点基因长
50kb
，定位
11
号染色体。鼠及
人
C
位点基因均含有
5
个
外显子
和
4
个
内含子
。
TYR
是一种膜
糖蛋白
，
可在
MC
中特异性表达。
B
位点
（
brown
locus
）
基因编码
TRP-1
（
gp75
）
。
鼠
B
位点基因长
18kb
，有
8
个外显子和
7
个内含子，定位
14
号染色
体 。人
B
位点
基因定位
第
9
号染色体。
TRP-1< br>能在
MC
中表达且定位
黑素体
膜，
具
酪氨酸羟化酶< br>和
多巴氧化酶
活性。
S
位点
（
slaty
locus
）
基因编码
TRP-2
，小鼠
S
位点基因位于第
14
号染色体，为多巴色素
异构酶
。鼠及人
P
位点（
Pmel-17 locus
）基因编码
stablin
蛋白，
人及鼠P
位点基因定位第
10
、
12
号染色体，参与黑素合成终末途径
的调节。
TYR
、
gp75
、
TRP-2
结构相似，其
基因产物
有下列特点：①高
同源
性
（
氨基酸
序列相同
40
％，相似
45
％）。②分子量几乎相同。③
三
级结构
有高度
保守序列半胱氨酸残基
。
④具有
酶活性
铜结合位点。
⑤
含有跨膜区。
TYR
是黑素合成的关键酶，其已 知的氨基酸序列含有一段前导
信
号肽
和一个跨膜结构基元（
motif
），与黑素体膜上的锚定蛋白
（
anchorin
）相一致。
HLA-A2
递呈
TYR
抗原，不同的细胞毒性
T
淋
巴细胞
克隆 识别具有活性基元的九
肽
LLAVLYCLL
，说明
TYR
在不同个
体的表达呈相当高的同源性。
TYR
的表达均一性优于
TRP-2
， 表达频
率亦较
TRP-1
高。除
CD8+T
细胞外，人
CD 4+T
细胞也能特异性识别
TYR
基因编码的相关抗原。黑素瘤患者中检出
T YR
，
TYR
是
MMC
上的
分化抗原
。可作为主动
免疫
的良好抗原靶。
TYR
既受
MHC-
Ⅰ限制，又
受
MHC-
Ⅱ限制的黑素瘤
共同抗原
，诱生的
CD8+T
细胞和
CD4+T
细胞
均能产生有效的抗肿瘤应答。
TRP-1
原位 杂交
证实编码基因位于人第
9
号染色体
q23
区，为
IgG
抗体识别抗原，具有
DHI-2
羧酸
氧化酶活
性，非突变型
TRP-1
抗原可被
HLA-A31
特异性
CTL
识别。外源性TRP-1cDNA
在
MMC
等中表达。
gp100
即
MC/MMC
特异性蛋白
Pmel-17
，
免疫电镜证实
gp100
主要位于Ⅰ、Ⅱ期黑素体膜，广泛表达于人
MMC
（
50
％）。HLA-A2
mMC
的
gp100
可被自体
肿瘤浸润性淋巴细 胞
（
TIL
）
识别。识别部位是十肽
LLDGTATLRL
（
aa457-486
），从
gp100
提取的
十肽能体外诱导TIL
，
将
TIL
细胞与
IL-2
配伍
应用于
HLA-A2+
黑素瘤
患者，可消除自发性黑素瘤的转移灶。
酪氨酸酶抗体
（一）检测方法：
TYR
抗体 在白癜风患者血清中检出。
Song
等
[11]1994
年用
细菌< br>合
成人
TYR
，
免疫印迹法
检测
TYR
抗体 。这种方法相对不敏感且不能定
量检测。
Baharav
等
[12]1996
年使用
蘑菇
TYR
，
ELISA
法检测
TYR抗
体，
此法敏感，
但所用蘑菇
TYR
与人
TYR
同源性低。
而
Xie
等
[13]1996
年则用人
MC< br>提取物作为
TYR
的来源，
免疫沉淀法
等检测
TYR
抗体。
Kemp
等
[14]1997
年采用放免法（
RIA
）检测
TYR
抗体。近来此法已被
用来检测
自身免疫性疾病
患者血清 中的
特异性抗体
[15-17]
。这种方
法能敏感定量检测抗体。
（二）产生、特点、特性：
1.
抗
TYR
抗体的产生：用人
TYR cDNA
转染L
细胞，获得
L-TY
细
胞，免疫同源性
C3H
鼠，即 用
5×106L
-TY
细胞与等量
Frend
佐剂
混
合，
腹膜
内注入有
6
周鼠龄的雌性
C3H
鼠体内，
每次间隔
2
周，
第
3
，
4
次用
5×10 6
细胞裂解物与等量
Frend
佐剂混合免疫动物。第
4
次
注射后
3
天，抽血，分离血清，同时用未转染
L
细胞去除非特异反应
性成分，结果用人
TYR cDNA
转染
L
细胞免疫
的
8< br>只
C3H
鼠中，
4
次
免疫后，有
4
只对TYR cDNA
转染
L
细胞的鼠
血清抗体滴度
＞
10 -4
，
C3H
鼠免疫前及正常鼠对
L-TY
细胞无反应性。用
L-TY
细胞免疫动物
获得的血清能沉淀
L-TY
和有色素
MMC
细胞裂解物。免疫沉淀法可见
分子量为
70kD
～
80kD
的宽幅条带，可能为
TYR
生物合成
中间代谢
产
物，未转染
L
细胞，
TYR
阴性无色素
MMC
中未见特异性条带。
< br>2.
免疫印迹法检测
TYR
抗体：
用抗
TYR
血清< br>10-3
稀释度，
在
TYR
转染
L
细胞和有色素MMC
可见细胞内颗粒
染色
，
亲代
L
细胞内无胞内染色，
在
L-TY
细胞，
细胞内染色颗粒位于核周和
胞质
内。
无色素
MMC
，
不表达
TYR
mRNA
， 无
TYR
活性，与
TYR
抗体无相互作用。有色素
MMC
和 培养
MC
，高度表达
TYR
活性，黑素形成多，
细胞质
颗粒 深度染色。
单克隆抗体
TA99
能识别
TRP-1
糖蛋白 ，
TA99
能与人有色素
MMC
表达的
TRP-1
和转染< br>L-GP
细
（用编码
TRP-1
全长
cDNA
转染鼠
L
细胞
获得）
表达的全长人
TRP-1cDNA
相互作用，
且免疫耗竭实验证实
TA99
不耗竭能产生分子量为
70kD
～80kD
条带的抗
TYR
血清，
免疫荧光
分
析抗
TYR
抗体与
TRP-1
，
TYR
l-GP
细胞无相互 作用，抗
TYR
抗体不沉
淀来自
L-GP
细胞的
TRP-1
。
抗体使
TYR
活性丧失：免疫鼠血清能沉淀鼠
MMC
，
L-TY
细
胞裂解物，提示免疫鼠血清能灭活有色素
MMC
及
L-TY
细胞
TYR
的活
性，加入
L-
多巴
底物
后，见黑素形成，提示
TYR
活性恢复，免疫沉
淀时如用免 疫前血清则无黑素形成
[7]
。
白癜风
简介
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