男用壮阳药VB12发酵工艺研究

2021年1月28日发(作者：胸骨痛)
VB12
发酵工艺研究

[
摘要
]
通过研究甜菜碱 的不同加量对脱氮假单胞杆菌发酵生产
VB12
的影响，结
果发现甜菜碱的减量能够提 高
VB12
发酵单位，
在此基础上又进行了发酵培养基
中甜菜碱加量对
VB12
发酵单位的影响，结果发现发酵培养基中甜菜碱有
7g/L
降到
4 g/L
时，
对
VB12
发酵单位无显著性影响，
在补料中，
甜菜碱的减量有
30g/L
降低到
15g/L
时，对
VB12
发酵单位无显著性影响。因此，在不影响
VB12
产量
前提下，可以通过甜菜碱的减 量达到节约成本，提高经济效益的目的。

[
关键词
]
甜菜碱，发酵培养基，发酵工艺






预计未来若干年内，国际上对添加各种维生素的食品的需求仍将不断增 加。
作为
OTC
药品的多种维生素制剂产品在国外的应用已相当普遍，今后市场需求< br>还会增加。
另外，
由于欧、
美等发达国家受到
“疯牛病”
事件 的影响，
现在欧洲、
北美以及亚洲的日、
韩等国的饲养场都已采用人工生产的各种维生 素作为饲料添
加剂，不用危险的“肉骨粉”
。这些因素使得国际市场对维生素
B12< br>的需求在未
来一段时间里将保持持续增长。因此，通过研究
VB12
的发酵工艺 ，提高
VB12
的产量和质量具有重要的意义，
本文通过探讨甜菜碱不同加量对
VB12
发酵单位
的影响，以期达到降低原材料加入量，提高经济效益的目的。

1
材料与方法

1.1
材料

菌种为脱氮假单胞杆 菌，种子培养基组成：
70g/L
甜菜糖蜜
+2g/L
硫酸
铵
+1.5g/L
硫酸镁
+1.5g/L
硫酸锌
+0.02g/L
硫 酸锰
+0.02g/L
硝酸钴，调节
pH=7.0
；
发酵培养基组成 为
150g/L
的甜菜糖蜜
+15g/L
蔗糖
+3.5g/L
氯化胆碱
+7g/L
甜菜碱
+0.15g/L
硫酸镁
+0.07g /L
硫酸铵
+1.5g/L
硝酸钴
+0.15g/L
硫酸锌
+0.9g/L
氧化镁
+1g/L
甘油，
调节
pH=7.0
，
补料组成为：
175g/L
甜菜糖蜜
+150g/L
蔗糖
+30g/L
甜
菜碱
+0.5g/L
二甲基苯并咪唑，调节
pH=7 .0
。

1.2
发酵方法

首先用无菌水刮洗斜面的菌体制 备菌悬液，
取
2
毫升液体接入装有
30mL
种子培养基的三角瓶（规 格为
300mL
）中，在
28
℃条件下，以每分钟
200
转 的速度震荡培养，直到菌体吸光度值为
0.2
。摇瓶培养方法为：在三角瓶（规
格为< br>300mL
）中装入培养基
35mL
，接种
10%
，在
32
摄氏度条件下，放置在旋
转式摇床中培养一周（转速设置为
200r/min< br>）
。

1.3
采集数据方法

对菌体浓度的测量采用 吸光度法（取
2mL
的待测样品稀释定
容至
100mL
后测量吸光度 ）
，对
VB12
发酵单位的测量采用高效液相法：选用
C18
色谱柱 ，流动相为甲醇和水（
28:100
）
，设定检测波长为
361nm
，流速设置
为
1mL/min
。

2
结果

2.1
发酵培养基中进行的甜菜碱减量实验结果：甜菜碱的减量对
VB12
发酵单位
没有显著性影响；当甜菜碱的配比为
4g/L
时，随着甜菜碱量的继续降低，
VB12
的发酵单位随之降低，具体数据统计结果如下表
1
：

表
1
：发酵培养基中进行的甜菜碱减量实验数据统计结果

甜菜碱加量

（
g/L
）

7.0
发酵单位

（
mg/L
）

205.2
211.3
207.7
6.0
208.6
210.8
211.2
5.0
210.7
211.0
208.4
4.5
210.0
210.1
207.6
4.0
208.1
208.0
207.2
平均单位

（
mg/L
）


207.9


210.4


209.9


209.5


207.5

提高百分比

（
%
）


--


0.95


0.95


0.50


0.00

2.2
补料中甜菜碱减量实验结果：甜菜碱的减量对
V B12
发酵单位没有显著性影
响；当甜菜碱的配比为
10g/L
时，随着甜菜 碱量的继续降低，
VB12
的发酵单位
随之降低。