吸脂丰胸病毒的分离与鉴定

2021年1月28日发(作者：东莞人民医院)
病毒的分离与鉴定


（一）
病毒的分离




病毒分离的一般程序是：
检验标本→杀灭杂菌
(
青、< br>链霉素)→接种易感的动物→出
现病状

鸡胚→病变或死亡

细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型
(
血清学方法
)
无菌标本
(脑脊液、血液、血
浆、血清
)
可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液 洗液洗涤后制成
10
～
20%
悬液离…


（一）病毒的分离






病毒分离的一般程序是：


易感的动物→出现病状

检验标本→杀灭杂菌
(
青、链霉素)→接种

鸡胚→病变或死亡

细胞培养
→细胞病变











无菌标本(
脑脊液、血液、血浆、血清
)
可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培< br>养液洗液洗涤后制成
10
～
20%
悬液离心后，取上清接种；咽洗液、 粪便、尿、感染组织或
昆虫等污染标本在接种前先用抗生素处理，杀死杂菌。




1
．细胞培养

用分散的活细胞培养称细胞培养（
Cell culture
）
。所用培养液 是含血清
（通常为胎牛血清）
、葡萄糖、氨基酸、维生素的平衡溶液，

pH 7.2
～
7.4
。
细胞培养
适于
绝大多数病毒生长，是病毒 实验室的常规技术。




原代
细胞培养
(Primary cell culture)
用胰蛋白酶 将人胚
（或动物）
组织分散成单细胞，
加一定培养液，
37℃孵育
1 -2
天后逐渐在培养瓶底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、
兔肾细
胞。原代细胞均为二 倍体细胞，
可用于产生病毒疫苗，如兔肾细胞生产风疹疫苗，
鸡成纤维
细胞产生麻疹疫 苗，
猴肾细胞生产脊液灰质炎疫苗。
因原代细胞不能持续传代培养，
故不便
用 于诊断工作。




二倍体
细胞培养
(Diploid cell cultune)
原代细胞 只能传
2-3
代细胞就退化，在多数细
胞退化时，
少数细胞能继续传下来，< br>且保持染色体数为二倍体，称为二倍体细胞。
二倍体细
→鉴定病毒种型
(
血清学方法
)
胞生长迅速，并可传
50
代保持二倍体特征，通常是胚胎组 织的成纤维细胞（如
WI-38
细胞
系）
。二倍体细胞一经建立，应尽早将细 胞悬浮于
10%
二甲基亚砜中，大量分装安瓿贮存于
液氮
（
-
196℃
）
内，
做为“种子”，
供以后传代用。
目前多用二倍体 细胞系制备病毒疫苗，
也用于病毒的实验室诊断工作。




传代
细胞培养

(Continous cell culture)
通常是由癌细胞或二倍体细胞突变而来（如

Hela
、
Hep-2
、

Vero
细胞系等）
，染色体数 为非整倍体，细胞生长迅速，可无限传代，
在液氮中能长期保存。
目前广泛用于病毒的实验室诊 断工作，
根据病毒对细胞的亲嗜性，
选
择敏感的细胞系使用。






表
5.
病毒增殖用部分细胞系及来源


细胞系名称

二倍体细胞系

HDCS ,MRC-9 ,WI-38
传代细胞系

Hela ,Hep-2 ,Vero ,BHK
（一）
病毒的分离




病毒分离的一般程序是 ：
检验标本→杀灭杂菌
(
青、
链霉素)→接种易感的动物→出
现病状

鸡胚→病变或死亡

细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型
(
血清学方法
)
无菌标本
(
脑脊液、血液、血
浆、血清
)< br>可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成
10
～
20 %
悬液离…


来源

人胚肺细胞

,
人宫颈癌细胞

,
人上皮细胞

,
猴肾细胞

,
地鼠肾
细胞





淋巴细胞培养（
Lymphocyte culture
）

正常成熟的淋巴细胞不经特殊处理不能在体外传代培养。然
而
EBV
感染的
B
淋巴细胞却能在体外持续传代，这是病毒转化细胞的例证 ，也是分离出
EBV
的标志。
T
淋巴细胞在加入
T
细胞生长 因子（
IL-2
）后可在体外培养，为研究人类逆转录病毒（
HIV
、
HTLV
）提供了
条件，
HIV
在
T
淋巴细胞培养物中增 殖形成多核巨细胞。




2
．动物试验
这是最原始的病毒分离培养方法。常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等。接种途径根
据各病毒对组 织的亲嗜性而定，可接种鼻内、皮内、脑内、皮下、腹腔或静脉，例如嗜神经病毒（脑炎病
毒）接种鼠脑 内，柯萨奇病毒接种乳鼠（一周龄）腹腔或脑内。接种后逐日观察实验动物发病情况，如有
死亡，则取病 变组织剪碎，研磨均匀，制成悬液，继续传代，并作鉴定。




3
．鸡胚培养

用受精孵化的活鸡胚培养病毒比用动物更加经济简便。根据病 毒的特性可分别接种在鸡
胚绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊、脑内或静脉内，如有病毒增殖，则鸡 胚发生异常变化或羊水、
尿囊液出现红细胞凝集现象，常用于流感病毒及腮腺炎病毒等的分离培养；但很 多病毒在鸡胚中不生长。




（二）分离病毒的鉴定




1
．病毒在细胞内增殖的指征