西安哪个妇科医院好HIV实验室检测方法和步骤

2021年1月27日发(作者：红疹图片)
HIV
实验室
检测方法和步骤


1.

目的：
为
HIV
实验室各技术人员统一实验操作程序，
保证
实验质量 ，特制定本程序。

2.

适用范围：适用于
HIV
实验室技术人员。

3.

规范性引用文件：
《全国艾滋病检测技术规范》
（
2004
年
版）
。

4
．

相关器材设备：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂 盒（双
抗原夹心酶联免疫法）
HIV
（
1+2
）
。

5
安全防护器材与措施：
一次性乳胶手套、
隔离衣、
口罩、< br>帽子，接收或取用试剂时应把试剂视作感染性材料对待。首
先穿好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子 ，最后戴好乳胶手套
后再接触试剂。

6
检测方法与步骤

6.1
双抗原夹心酶联免疫法

6.1.1
试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒

6.1.2
试剂厂家：北京万泰生物试剂有限公司

6.1.3
原理 及用途：采用基因工程抗原
gp41
和
gp36
包被酶
联板，用基因 工程
HIV-1
和
HIV-2
嵌合抗原
ENV18
标记辣根
过氧化物酶，与其他试剂组成试剂盒，应用双抗原夹心法检
测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病 毒抗体，用于献血员及
高危人群中人类免疫缺陷病毒感染的筛查。

6.1.4
试剂盒组成（
96
人份）

6.1.4.1.
预包被板条

12
孔×
8/8
孔×
12











6.1.4.2.

HIV
酶标记物

12ml
×
1
瓶


6.1.4.3.
阴性对照

1ml
×
1
瓶


6.1.4.4.
阳性对照

1ml
×
1
瓶

6.1.4.5.
25
倍浓缩洗液

80ml
×
1
瓶

用去离子水或蒸馏水
稀释


6.1.4.6.
底物缓冲液

8ml
×
1
瓶


6.1.4.7.
底物液

8ml
×
1
瓶


6.1.4.8.
终止液

7ml
×
1
瓶

6.1.4.
9.
封口袋

1
个

6.1.4.10.
说明书

1
份

6.1.5
操作方法

6.1.5.1.
加样：将预包被板条固定于板架上。每次试验设
阴性对照
2
孔、
阳性对照
2
孔，
分别加入阴、
阳性对照
10 0ul
；
设空白对照
1
孔，不加样品。其余孔加入待测样品
100u l
。

6.1.5.2.
温育：置
37
℃温育
60
分钟。

6.1.5.3.
洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，
静置
3 0
－
60
秒，弃去孔内洗液，扣干。重复洗
5
次。

6.1.5.4.
加酶：空白对照孔不加酶，其余孔加入酶标记物
100ul
。

6.1.5.5.
温育：置
37
℃温育
30
分钟。

6.1.5.6.
洗涤：弃去孔内酶标记物，重复洗
5
次（同操作
步骤
3
）。

6.1.5.7.
显色：每孔加入底物缓冲液
50ul
，再加入底物液
50ul
，振荡混匀，置
37
℃温育10
分钟。

6.1.5.8.
终止：每孔加入终止液
50u l
，轻拍混匀。在单波
长
450nm
或双波长
450nm/630n m
下，用空白孔校零，再读取
各孔
OD
值。

6.1.6
结果判读

9
6.1.6.1.
要求：

阳性对照
OD
值应
> 0.80










阴性对照
OD
值应
< 0.08
（空白校零
后）

6.1.6.2.
临界值（
C.O.
）计算：

临界值（
C.O.
）＝

阳性对照平均
OD
值×
10%




备注：阳性对照
OD
值大于
2.5
按
2.5
计算。

6.1.6.3.
结果判定：

样品
OD
值

＞

临界值（
C.O.
）为
HIV
抗体阳性

样品
OD
值

≤

临界值（
C.O.
）为
HIV
抗体阴性

初筛试验 阳性者应重新取样进行双孔复试，按照《全国艾滋
病检测工作规范》需将血样或重新采血送“
H IV
筛查中心实
验室”进行确认试验。

6.2.1
试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒

6.2.2
试剂厂家：英科新创
(
厦门
)
科技有限公司

6.2.3
原理及用途
:
本试剂盒采用双抗原夹心两部法检测人
血清或血浆样本中
(HIV 1/2)
型抗体
.
采用多种
HIV-1
和
HI V-2
的特异性抗原制作预包被板及酶结合物
.
当待检样本
中存在
H IV
抗体时
,
在反应过程中形成“固相
HIV
抗原
-HIV
抗体
-
酶标记
HIV
抗原”的免疫复合物
,
加入底 物后形成显色
反应
.
适用于辅助诊断及献血员筛查。

6.2.4
试剂盒组份

6.2.4.1.
测
抗
-HIV
酶
联
板

1
块

(96
孔
)












7.
显
色
剂
A



















1
瓶
(7ml)
6.2.4.2.
测
抗
-HIV
样
品
稀
释
液

1
8.
显
色
瓶

剂
(7ml)














B

















1
瓶

(7ml)
6.2.4.3.
测
抗
-HIV
酶
标
抗
原

1
终
瓶

止
(13ml)












9.
液

1
瓶
(7ml)
6.2.4.4.
抗
-HIV
阳性
对
照
(
已
灭
活
)





1
瓶

(1ml)














10.
不
干
胶
封
片

2
张

6.2.4.5.
抗
-HIV
阴
性
对
照
(
已
灭
活
)





1
瓶

(1ml)














11.
书

1
份

说
明
6.2.4.6.
20
×
洗
涤
液


1
瓶

(50ml)












12.
密
封
袋
、
干
燥
剂

1
套

6.2.5
标本要求

血清或血浆
(
可用枸橼酸钠、肝素等作抗凝
剂
)
6.2.6
仪器要求

酶标仪


洗板机


恒温箱


加液器等

6.2.7
检测程序

6.2.7.1
．将各种试剂移到室温（18-25
℃）平衡半小时后，
取一瓶
20
×洗涤液，加蒸馏水至
1000 ml
，混匀后备用。

6.2.7.2
．将酶联板从密封袋中取 出，每孔加入
1000
μ
l
酶
标抗体，设一个空白对照孔，两个阳性 对照孔，两个阴性对
照孔。
取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各
20
μ< br>l

加
入对照孔中，其余每个孔加待检血清
20
μ
l
，充分混匀，将
酶联反应板置微板振荡器上混合
5
－
10
秒，用不干胶封片封
盖反应板。未用完的板条在密封袋中保存。

6.2.7.3
．酶联板置
37
℃温育
60
分钟
,
小心吸干孔中血清，
用洗涤液洗
5
次，然后在吸水纸上拍干。

6.2.7.4
．每孔加显色剂
A
50
μ
l
，显色剂
B
50
μ
l
，
轻轻振荡后置
37
℃暗处显色
30
分钟，每孔加终止液
50
μ
l
。

6.2.7.5
．选择酶标仪测定波长
450nm
，用空白孔 调零点，测
定各孔
OD
值。也可选择
630 nm
作为参考波长，用双波长测
定。

6.2.8
结果判定

6.2.8.1
．
Cutoff
值＝
0.12
＋
N
（阴性对照的平均值）

6.2.8.2
．阴性对照
OD
值 大于等于
0.10
。

6.2.8.3
．阳性对照
OD值大于等于
0.80
，阴性对照
OD
值大
于
0.1，则实验不成立，全部实验重做。

6.2.8.4
．
标本
OD
值小于
Cutoff
值为阴性，
大于等于
Cutoff
值为 阳性。

6.2.8.5
．阳性者须重新取样双孔复试，复试阳性者应按全
国
HIV
管理规范，送
HIV
筛查中心实验室进行确认。

6.2.9
注意事项

6.2.9.1.
本试剂的使用单位必须是 经当地卫生行政部门批
准的
HIV
初筛实验室。

6.2.9.2.
整个
HIV
检测必须符合《全国艾滋病检测技术规
范》生物安全守则规定，严 格防止交叉感染。操作时必须戴
手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

6.2.9.3.
HIV-1/HIV-2
抗体测定结果的判定必须以酶标仪读
数为准。

6.2.9.4.
样品及各种试剂应用加液器加注，并经常校对其
准确性。

6.2.9.5.
洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口有游离酶不