绿茶左旋肉碱无菌检查操作规程

2021年1月27日发(作者：阴茎增大保健品)


无菌检查操作规程

操作标准
---
质量

文件编号

文件页数

分发部门


1.

目的：

建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。


2.

范围：

适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。


3.

责任：

化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。


4.

定义：

无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。


5.
内容：

5.

1
无菌操作设备：

无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1
无菌室分无菌操作室和缓冲间。在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌

衣放置架及挂钩、拖鞋等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局

部洁净度
100
级超净工作台。缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外

光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2
无菌室应每周 和每次操作前用
0.1
％新洁尔灭或
2
％甲酚液擦拭操作台及

可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌
1
小时。在每次操作完

毕，同样用
2
％甲酚或
0.1
％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外 光灯杀菌半小


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页

颁发部门

接收部门

生效日期

制定人

审核人

批准人







制定日期

审核日期

批准日期





时。

5.1.3
无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程
< br>中需检查空气中菌落数。取直径
90mm
双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯

旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约
20ml
，制成平板：

在
35-37
℃预培养
48
小时，证明无菌后将
3
个平板以无菌方式带入无菌操作间

的洁净区域左、中、右各放
1
个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露
30
分钟后

将盖盖好，置
3 5-37
℃培养
48
小时，取出检查，
3
个平板上生长的菌落数相加

总数不得超过
10
个。


无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到
100
级（一般 用尘埃粒子计数仪）
，检测尘埃粒径≤
5
μ
m
的粒数不得超过
3.5
个／

升；空气流量应控制在
0.75-1.0m
3
/s
；细菌菌落数平均
<1
个，可根据无菌状况

定期置换过滤器。

5.1.4
无菌室内应准备好盛有消毒用
5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、

75
％酒精棉及拖鞋等。

5.2
仪器、用具：

5.2.1
真空泵、
恒温培养箱、< br>生物显微镜、
托盘天平
（精度
0.1g
）
、
抽滤瓶< br>（
500ml
）
、

三角瓶（
100
、
500 ml
）
、移液管（
1< br>、
10ml
）
、注射器（要求规格）
、试管、双碟
（
9cm
）
、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）
、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约
5cm
）
，孔径应在
0.45
±
0.02
μ
m )
载玻片、
洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。

5.2.2
用具的包扎：

5.2.2.1
移液管

在移液管上端管内
,
松松地塞进少许原棉
,
然后放入不锈钢灭菌筒内。
5.2.2.2
试管

在管口塞上纱布棉塞。

5.2.2.3
无菌衣、裤、帽、口罩

将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入布袋，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。

5.2.2.4
注射器

洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内（饭


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盒）一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。

5.2.2.5
滤器


将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡 湿润，
取出后固定在细菌过滤器的滤板
上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。在 灭菌前滤器的螺勿

拧太紧，
滤器上口用
8
层纱布及牛皮纸包扎，装 妥后放入容器内，
再将盛滤器的
容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。

5.2.3
用具的灭菌：

将包扎好的用具，在
121
±< br>0.5
℃蒸汽灭菌柜中灭菌
30
分钟，物品取出时切
勿立即置冷处，以 免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易致染菌，
应置温
箱或或加温烘干。

5.3
培养基、试剂：

5.3.1
一般采用商品干燥培养基，临用 时按照使用说明书进行配制，需注意培养
基的
pH
值应符合规定，否则必须校正后，灭 菌使用。

使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经
30-35
℃培养< br>48
小时，真菌
培养基须经
20-25
℃培养
72
小 时，证明无菌生长后方可使用。


制备的需气菌、
厌气菌培养基应半 个月内用完，在供试品接种前，培养基指
示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约
1/5
，否则须经水浴煮沸加热，只限加
热一次。

5.3.2
革兰氏碘液：

先用
3-5ml
蒸馏水溶解2.0g
碘化钾，
再加入
1.0g
碘片，搅拌溶解后，
加蒸馏水稀释至
300ml
，摇匀。置密闭棕色瓶中备用。

5.3.3
结晶紫染色液：

将结紫
1.0g
溶解于
20ml95%
乙醇中后，与
80ml1%
草酸铵溶液相混合，静置
48< br>小时使用。此液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。

5.3.4
沙黄染色液：

将
0.2g
沙黄溶解于
10ml95%
乙醇中，待完全溶解后再加蒸馏水至
100ml
。

5.3.5
生理盐水：

称取
9g
氯化钠，
加水< br>1000ml
溶解，
分装后于
121
±
0.5
℃湿热 灭菌
30
分钟。
供作稀释剂用。


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5.3.6 75%
乙醇

量取无水乙醇
75ml,
加水稀释至
100m l
，摇匀，即得。

5.3.7 0.1%
新洁尔灭：

量 取
5%
新洁尔灭
20ml
，加水稀释至约
1000ml
，摇 匀，即得。

5.4
培养基灵敏度检查：

5.4.1
新购的干燥培养基或采用不同牌号原材料的新鲜培养基，其质量均应符

合灵敏度检查要求。

(1)
取藤黄微球菌
[Micrococcusluteus CMCC
（
B
）
28001
］的营养琼脂斜面和
白色念珠菌
[Candida albicans CMCC
（
F
）
98001
］
的真菌培养基琼脂斜面的新< br>鲜培养物，分别用
0.9%
无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；取生孢梭菌
[C lostridium sporogenes CMCC
（
B
）
649 41]
不含琼脂的需气、厌气培养基新
鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心， 弃去上清液，沉淀菌体
用
0.9%
无菌氯化钠溶液制成均匀菌悬液。然后以
1 0
倍系列稀释后，制成
1ml
中
含
10-100
个菌并计数 。

(2)
取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气、厌气培养基新鲜培养物，白色念珠菌

的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，取接种至霉菌培养基内，
20-25
℃用
0. 9%
无菌氯化钠溶液作
10
倍稀释，制成
1ml
中含
10 -100
个菌并计数。


将藤黄微球菌的上述
(1)
或
(2)
的稀释液各
1ml
，分别接种至每管装量为
9ml
的需气、厌气菌培养基
3
管，生孢梭菌的上述
(1)
或
(2)的稀释液各
1ml
，分别接
种至每管装量为
12ml
的需气、厌 气菌培养基
3
管，白色念珠菌的上述
(1)
或
(2)
的稀释 液各
1ml
，接种至每管装量为
9ml
的真菌培养基
3
管， 以未接种的培养基
作对照，按规定的温度培养
5
天并逐日记录结果。

结果判定：以每株菌接种后的培养基不得少于
2
管呈现生长，即该培养基的灵

敏度检查符合要求。

5.4.2
配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超 过
2
周，临用前细菌和霉菌

培养基分别经
30-35
℃和
20-25
℃培养不少于
48
小时和
72
小时，证明无菌生 长

后方可使用。

5.4.3
需气菌、厌气菌培养基在试管中装量 高度不得少于
7Cm
，其指示剂氧化层

不得超过培养基深度的
1< br>／
5
，否则须经水浴煮沸
10
分钟，但只限加热一次。