精子活力测定

2021年1月27日发(作者：米景贤)
实验三



精液品质的感观检查精子活率、

密度检查



一、实验目的


掌握检查精子密度、活率的方法；熟悉感观检查精液品质的方法。



二、实验材料


1.
精液


选用牛、羊、猪、马、犬、兔任意一种动物的新鲜精液。

2.
药械用品


显微镜、显微镜保温箱（或显微镜恒温台）
、载玻片、 盖玻片、搪瓷盘、
温度计、滴管、擦镜纸、纱布、蒸馏水、
3%
和
0.9%< br>氯化钠溶液、
2%
煤酚皂溶液、
1/3000
新洁尔灭溶液、
75%
酒精。

3.
其他


精子密度挂图及有关图表。


三、实验内容


（一）精液的感观检查

观察测定下列各项结果并记入登记表内。

1.
测定射精量


将采得的精液倒入有刻度的试管或集精杯中， 测量其容量。各家畜的
射精量平均为：马
70
（
30
—
10 0
）
ml
，驴
50
（
10
—
80
）
ml
，牛
4
（
2
—
10
）
ml
，羊
1.0
（
0.7
—
2.0
）
ml，猪
250
（
150
—
500
）
ml
。

2.
色泽、气味观察


观察精液的色泽并嗅闻气味。

3.
云雾状的观察

< br>观察牛、羊精液翻腾滚动的云雾状态，并按以下符号记入表内，云
雾状显著者以“
+++
”表示，有云雾状者以“
++
”表示，云雾状不明显或无云雾状者以“
+”
表示。

（二）精子密度检查及活率评分

1.
精子的密度


取
1
小滴精液在清洁的载玻片上，加上盖玻 片，使精液分散成均匀一
薄层，不得存留气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放大< br>400
—
600
倍
观察，按下列等级评定其密度。

密——在整个视野中精子密度很大，
彼此之间空隙很小，
看不清楚各个精子运动的活动
情况，这一级属于“密”
，每毫升精液含精子数约在
10
亿个以上，登记时记以“密” 字。

中——精子之间的空隙明显，
精子彼此之间的距离约有一个精子的长度，
有些精子的活
动情况可以清楚地看到。这种精液的密度评为“中”
，每毫升所含精子数约在< br>2
—
10
亿个之
间，登记时记以“中”字。

稀—— 精子分散于视野内，
精子之间的空隙超过一个精子的长度，
这种精液每毫升所含
精子是 在
2
亿以下，登记时记以“稀”字。

牛精子密度示意图

A:
密；
B.
中；
C.
稀


2.
精子的活率评定


必须于采精后立刻在
22
—
26
℃的实验室内进行，
最好是在
37
℃保
温箱内进行 ，在评定精子活率的同时也可以测定精子的密度。

用玻璃棒蘸取
1
滴原精液 或经稀释的精液
（马、猪精液的精子密度低，
可以不稀释，而
牛、羊精液的精子密度大 ，须用
0.9%
氯化钠溶液或其他稀释液进行稀释，其温度须与精液
温度相近）
，滴在载玻片上，加上盖玻片，其间应充满精液，不使气泡存在，也可滴在盖玻
片上翻放于凹玻片的凹 窝上，置于显微镜下放大
250
—
400
倍检查。注意显微镜的载物台须放平，最好是在暗视野中进行观察。









悬滴法检查精子活率
精子的活动有
3
种类型 ，即直线前进运动、旋转运动和振摆运动。评价精
子的活率是根据直线前进运动精子数的多少而定的，即 ：

呈直线前进运动精子数
精子活率
?
?
100
%

总精子数
目前评定精子活率等级的方法有两种：

十级制——在显微镜视野中 估测直线前运动精子所占全部精子的百分数。
直线前进运动
的精子为
100%
者评为
1.0
级；
90%
者评定为
0.9
级；无直线前进运 动精子的精液为“
0
”级。

牛、羊的精液中由于副性腺分泌物少，精子密度 大，因此，要求精液达到
”
密
0.6”
（即
密度为“密”
， 活率为“
0.6
”级）及“中
0.8
”级以上才能作为合格的精液。而马、猪 的精
液中副性腺分泌物多，精子密度小，因此正常的精液定为“中
0.6
”
、
“稀
0.8
”以上的等级。




表
1


种公畜精液品质检查登记表


畜别

畜号

采精时间

（年月日）

射精量

（
ml
）

色泽

气味

云雾状

密度

活率











实验四



精子数量计算和畸形率的测定



一、实验目的


1.
掌握测定每毫升精液中所含精子数的方法，以及测定精子畸形率的操作要点。

2.
测定每一头份冷冻精液内有效精子数，以确定是否符合输精要求。


二、实验材料


1.
精液


任一种公畜或雄性动物的新鲜精液或冷冻精液。

2.
器械


显微镜、载玻片、盖玻片、红细胞及白细胞稀释管、血（色素）吸管、血细
胞计数盘 、光电比色计、
5ml
试管、
1ml
及
2ml
吸管、玻棒、 染色缸、染色架、玻片镊、纱
布。

3.
几种染色液配方

（
1
）
0.5%
龙胆紫


0.5g







96%
酒精


100ml
（
2
）酒精固定液

40%
甲醛（福尔马林）


12.5ml






96%
酒精


87.5ml
（
3
）凡那他氏镀银染色液

①

胡氏固定液

福尔马林


2ml







醋酸


1ml







蒸馏水


100ml
②

染色液

单宁酸


5g








石炭酸


1g








蒸馏水


100ml
③

硝酸银溶液

硝酸银


0.25g











蒸馏水


100ml
（
4
）威廉斯染色液

①

品红原液

品红


10g








96%
酒精


100ml
②

伊红原液


将伊红溶于酒精中制成饱和溶液。

③

染色液

品红原液


10ml









5%
石炭酸


100ml
取混合液


50ml









伊红原液


25ml
注：充分混合，至少放置
14
天后，经过滤可用于精子染色。

④

美蓝原液

美蓝


10g










酒精（
96%
）


100ml
4.
畸形精子形态图、血细胞计算盘构造图

三、实验内容


（一）精子数量测定

1.
血细胞计算盘测定法

（
1
）清洗器械


先将血细胞计算盘及盖玻片用蒸馏水冲 洗，使其自然干燥。血吸管或
红细胞和白细胞稀释管先用蒸馏水冲洗，再用
95%
酒精 清洗，最后用乙醚清洗。试管及吸
管洗净后须经烘干。

（
2
）精液的稀释

①

用
1ml
吸管准确吸取
3% NaCl 0.2ml
或
2m l
，注入小试管中。根据稀释倍数的要求，
再用血吸管吸出
10
μ
l
或
20
μ
l NaCl
溶液弃去。

②

用血吸管或红、白细胞稀释管吸取精液至刻度
10
μ
l
或
2 0
μ
l
处。

③

用纱布擦去吸管尖端附着的精液，将精液注入到小试管中。

④

用拇指按住小试管口，振荡
2
—
3min
使其混合均匀。

（
3
）精子的计数

①

将擦洗干净的计算盘置于显微镜载物台上，在计算室上盖上盖玻片。

②
< br>将试管中稀释好的精液，
滴一滴于计算室上盖玻片的边缘，
使精液自动渗入计算室。注意不要使精液溢出于盖玻片之上，
也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处，
如
果出现有上述现象应重新操作。

③

静置
3min
后以
400
—
600
倍显微镜检查。

④
统计出计算室的四角及中央共
5
个中方格即
80
小方格的精子数。

⑤

统计每个小方格内的精子，只数小方格内压在左线和上线的精子。

⑥

由
5
个中方格（
80
个小方格）所统计的精子 数（
X
）代入下列公式即得出每毫升的
精子数。

X
?400
?
10
?
稀释倍数
?
1000
?
每毫升精液所含精子数
?
X
?
50000
?
稀释倍数
80