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骨髓细胞形态学检查操作流程

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-26 11:33

中耳炎的症状与治疗-

2021年1月26日发(作者:贺志华)
骨髓细胞检验

一、骨髓的取材

骨髓取材方式主要有两种,即骨髓 穿刺术及环钻术,后者又称骨髓活检。特别适合
用于
“干抽”
情况下且可看到造血组织 的天然结构,
能判断造血组织与脂肪组织的比例,
有助于对再生障碍时病情严重程度的估计,也 有助于骨髓纤维化、骨髓转移癌及
MDS
的诊断。

(一)骨髓穿刺部位

1.

胸骨穿刺


在第二与第三肋骨之间的胸骨正中线上穿刺,穿刺针长度固定在
1cm
以下。

2.

脊突穿刺


第三、四腰椎脊突为穿刺点,在此处进行穿刺。

3.

髂前上棘穿刺


髂骨前上棘后约
3cm
处。

4.

髂后上棘穿刺


此处骨质较薄,容易穿刺,骨髓液 较丰富,若作骨髓培养,须

5ml~10ml
骨髓液。

(二)

骨髓穿刺时应注意的问题

骨髓穿刺一般由临床医生自行操作,检验人员也应了解以下有关问题:

1.

穿刺前必须向患者作耐心的解释,以尽量减少患者的恐惧心理。

2.

穿刺术必须严格无菌操作,盛骨髓的玻片不能接触穿刺针头。

3.

骨髓抽取量不宜过多,一般以少于
0.2ml
为最好。抽量过多可导致外周血液稀
释 ,失去诊断意义。穿刺困难时,只要针芯有一小滴骨髓即可涂片,若需要作
细菌培养或其他检查,也应先 抽少量涂片,然后再抽所需量。

4.

干抽的意义

< br>干抽是指多部位多次穿刺均抽不出骨髓。可见于骨髓造血细胞异
常增生,如白血病、真性红细胞增 多症等,更易见骨髓纤维化症。肯定干抽时
可用环钻术取活检标本,同时将环钻针内沾有的骨髓液涂片。

5.

骨髓液稀释


此情况由于吸取骨髓液用 力过大或穿刺针头刺入骨髓血窦所致,
可见涂片上骨髓小粒及脂肪滴减少,各阶段细胞比例失调,中性粒 细胞分叶核
﹥杆状核,无巨核细胞、组织嗜碱细胞、网状细胞等。

6.

穿刺部位的差异


骨髓造血组织分布不均,且某些病变也可限于局部,因此 穿
刺部位的不同,其结果可有显著差异。如再生障碍性贫血,特别是慢性再障,
往往远心部位的 髂骨最易首先受损,棘突次之,而胸骨则可再生良好。即或是
同一部位的髂骨也有灶性增生现象,可致两 次穿刺结果不相同。某些疾病诊断
阳性率也因穿刺部位而异。多发性骨髓瘤、转移癌时,均以病变部位穿 刺阳性
率最高。因此对一些疑难病例最好是多部位穿刺。

7.

死亡病例若需作骨髓穿刺明确诊断时,应在死亡后半小时内进行。

(三)骨髓穿刺成功的指标

1.

在抽搐骨髓的瞬间,病人有特殊的疼痛感。

2.

在黄白色的骨髓小粒,多集中于片尾部。

3.

镜下有骨髓内特有的细胞,如巨核细胞、幼红细胞、浆细胞及网状细胞等。

4.

粒细胞的杆状核与分叶核的比值大于外周血,网织红细胞、有核细胞值均应高< br>于外周血。

二、骨髓涂片

骨髓涂片的制备是一项重要的工作,绝对不可忽视。
有时骨髓取材良好,
但由
于玻片的不清洁或推片技术不佳,
而不能得到满意的涂片。
如涂片太厚细胞重叠则
无法辨认细胞的结构;涂片太薄,细胞过于分 散,则影响检查速度和准确性,甚至
漏诊或误诊。因此必须制备薄厚适宜、分布均匀的涂片。

(一)涂片制备

取髓液一滴置于载玻片的一端,以边缘平齐的推片(最好比载片稍窄 或磨去两角)
的一端放在骨髓液的前方,逐渐后移接触骨髓液,使骨髓沿推片散开,将推片与载
片保持约
3
0
°角,
平稳地向前推进至玻片的另一端,
载片上便留下 一薄层骨髓液膜。
图片制成后,在空气中挥动,使其迅速干燥,以免细胞皱缩。

(二)涂片的要求及注意事项

1.

玻片要干净,
不能用 手指触摸玻片表面。
一张良好的骨髓涂片,
要求厚薄适
宜,头、体、尾明显,细胞分布 均匀。

2.

骨髓内纤维蛋白原含量高,
易凝固,
穿刺后 应立即涂片。
应选择有骨髓粒部
分涂片。

3.

图片干燥后用铅笔在髓膜头部写上姓名、编号、日期。

4.

骨髓 液一般不用抗凝剂,
必要时可用肝素抗凝,
但用量不宜过多,
否则影响
细胞形 态。

三、骨髓涂片的染色

骨髓中有核细胞量多,又有许多幼稚细胞,因此染色时应注意以下问题:

1.

涂片要新鲜,涂片后立即进行染色,如不能立即染色,应先固定后保存,但也不宜保存过久,否则血浆蛋白质分解,使染色背景变蓝,效果不佳。

2.
< br>固定时间比血片稍长或另用无染料的甲醇或乙醇固定
5min
~10min
。< br>
3.

染液的用量应多于染血片,
但不宜过浓,
染色时间要 长些,
使幼稚细胞受色
均匀,结构清楚。

4.

最好用瑞特和吉氏混合染液染色。

5.

细胞染色时间长短除与气 温有关外,
也与细胞增生情况,
各批染液的性能有
关,
故要将染色中的涂片,
在显微镜下观察,
待颗粒清楚,
胞核与胞质分明,
着色满意后再终止染色,然 后再冲洗、待干、镜检。

6.

染色过深的涂片,
可用瑞特染液滴 加于涂片上马上冲洗。
过浅可复染,
此时
先加缓冲液后加染液,混合后复染到需要的深 度为止。

四、骨髓细胞分类和骨髓现象观察

(一)骨髓片的低倍镜观察

1.
观察涂片情况

了解 骨髓涂片厚薄是否适度,
有核细胞是否较丰富,
细胞分
布是否均匀,细胞受色是否满意 ,若涂片情况较差,应另选良好涂片,并将情
况填写记录。

2.
判断骨髓增生程度

除个别情况通过骨髓有核细胞直接计数判断增生程度
外 ,一般均借助骨髓涂片中有核细胞与成熟红细胞的比例进行判断,据此可将
增生程度分为
5级(见表
20-6

。由于穿刺吸取骨髓时,只有西式的可能而无
浓缩的 机会,因此检查结果介于两级增生程度之间时,可将其增生程度上提一
级。例如在增生活跃与增生明显活 跃之间,应判断为增生明显活跃。对增生减
低的标本,应观察全部送检的骨髓片,以免遗漏有代表性标本 ,而误将外周血
稀释的不分涂片认为增生减低。


20-6
骨髓增生程度

成熟红细胞与有核细胞之比

常见原因

增生极度活跃

1

1
白血病、红白血病等

增生明显活跃

10

1
白血病、增生性贫血

增生活跃

20

1
正常骨髓或某些贫血

增生减低

50

1
造血功能低下

增生严重减低

300

1
典型的再生障碍性贫血

3.
骨髓巨核细胞计数

取染 色后的骨髓涂片,
低倍镜寻找巨核细胞,
要注意边
缘与尾部,
寻找以
1.5cm
×
3cm
为一单位面积,
约等于
450
~500
低倍视野,
计数
其巨核细胞,如未找到巨核细胞,应再观察其他涂片,均未发现方可报 告未找
到巨核细胞。参考值
7

~35
个。必要时可用油镜进行巨核 细胞分类。

4.
观察有无体积较大、异形或成堆的特殊细胞。如转移癌细胞、高雪
(Gaucher)
氏细胞、尼曼-皮克(
Niemann

Pic k
)氏细胞、巨网细胞、多核巨细胞以及红
细胞有无缗钱状等。观察时要注意边缘及尾部。
5.
了解造血岛的多少及其中的细胞组成及形态。

(二)油镜检查

低倍镜观察全片后,用油镜观察个细胞系形态,在熟悉涂片的基础上 作细胞分类,
在分类过程中继续观察细胞形态有无变化,最后分析结果。

1
.有核细胞分类

一般从骨髓涂片中段开始向尾部上下来回移动分类,< br>依
次计数
200
个或更多的有核细胞,按细胞的种类、发育阶段分别记录,并计算其比值。有核细胞过多而重叠时,应选择涂片染色良好、细胞分
布适当的部位计数。
增生明显活跃以上的骨髓,
应分数
400

~500
个有
核 细胞,增生减低有核细胞很少时,可相应减少分类细胞数。

2
.观察各系细胞形态变化


仔细观察各细胞系的数量、
细胞发育成熟度和
形态是否正常。如有无大小不均、形态异常、巨幼变或巨幼样变、分叶
过多、
颗粒异常、
毒性变、
退行性变、
有丝分裂细胞增多或异常等现象。


1


粒细胞系:除观察红细胞系增生程度,各阶段细胞百分率和 形态变
化外,应同时注意嗜酸、嗜碱粒细胞的百分率和有无形态变异。


2


红细胞系:除观察红细胞系增生程度,各阶段细胞百分率外 ,还应
注意中、晚幼红细胞胞质变化,晚幼红细胞脱核情况,有无巨幼红
细胞出现和其他异常现 象。贫血患者可根据临床需要,单独作
100

~200
个有核红细胞的6
级分类。


3


巨核细胞系:对出血性 疾病的患者,应依次数完骨髓片的巨核细胞
数,并作形态观察和分类计数,注意有无脱血小板现象,估计 血小
板数量及其形态、聚集性、颗粒变化等,要特别注意侏儒性巨核细
胞。


4


单核细胞、淋巴细胞、浆细胞等有无数量改变和形态异常。

3


观察成熟红细胞形态变化


要注意观察成熟红细胞的大小、形态、染
色及结构异常等,特别是贫血的病人,对诊断和鉴别诊断有一定的意义。
成熟红细胞异常应观察外周血 片变化。

4
.观察非造血细胞及异常细胞


如网状细胞 、内皮细胞、组织嗜碱细胞、
吞噬细胞等,因数量太少,应结合高、低倍镜在涂片的边缘、尾部观察,< br>说明是多见或是偶见,有无形态异常。并要注意观察有无异常细胞,如恶
性组织细胞及转移癌细胞 等。

5
.观察核分裂现象



500

~1000
个有核细胞,记录各类细胞有丝分裂

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