血液生理

2021年1月25日发(作者：蓝仁)
实验四

血液的组成和红细胞比容

的测定

[
目的
]
了解血液的组成，学习和掌握测定红细胞比容

的方法。

[
原理
]
血液由血浆和血细胞组成，加抗凝 剂使血液成为抗凝血，静置或经过离
心，可将血浆和血细胞分离。上面无色（或淡黄色）半透明的部分为 血浆，下面
红色部分为红细胞，在血浆和红细胞之间有一薄层灰白色部分为白细胞和血小
板。< br>若不加抗凝剂，
任其自然凝固则析出血清。
血液脱去纤维蛋白后则不会凝固，
称 脱纤血。红细胞占全血的体积百分比叫红细胞比容（
hematocril
value
），可
用分血管，如温氏分血管（
Wintrob
e’s hematocrit tube）离心分离。

实验中将一定量的抗凝血灌注于特制有刻度 的毛细玻璃管中
（或溫氏分血管）
中，
用离心沉淀的方法使血细胞与血浆分离。
离心后血细胞下沉，
彼此压紧而又不改
变细胞的正常形态。根据分血管上刻度，可计算出红细 胞在全血中的容积比值，
即为红细胞比容（压积）（图
6.1-1
）。

[
实验对象
]
哺乳动物（种类不限）

[
实验材料
]
草酸盐抗凝剂、或
10
g·L
- 1
肝素，
75%
酒精，温氏分血管
,
酒精灯，
离心机，天平 ，注射器，长针头，干棉球，带有开叉橡皮管的玻棒，烧杯等。

[
实验方法与步骤
]
1
．温氏分血管比容测定

1.

草酸盐抗凝剂配成水溶液，
取适量该溶液
（根据取血量确定抗 凝剂溶液用
量，如草酸钾，每
1ml
血需加
1-2mg
。配制
10%
水溶液，每管加
0.1ml
则
可使
5-10ml
血 液不凝固），放入大试管，烘干后备用。

2.

取血：
可采取静 脉取血或心脏取血，
将血液沿大试管壁缓慢放入管内，
用
涂有凡仕林的大拇指堵住试管 口，缓慢颠倒试管
2
～
3
次，让血液与抗凝
剂充分混匀，并不使血细 胞破碎，制成抗凝血。

用带有长注针头的注射器，取抗凝血
2 ml
将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出
注射针头，使血液至刻度
10 cm
处。

1.

离心：将分血管以
3000 r·min
-1
离心
30 min
，取出分血管，读取红细
胞柱的高度，再以同样的转速离心
5 min
，第二次读取红细胞柱的高度，
如果读数与前次相同，表明红细胞已被压紧。该读数即为红细胞比容值。
例如，读数为
4.2 cm
，即表示
100ml
血液中红细胞容积占
42ml
，或者以
4.2
乖以
10
即得到红细胞比容的数值 。

2
．
取新鲜血
20ml
放在小烧杯中，
用顶 端带有开叉橡皮管的玻璃棒搅动数分钟后，
可见开叉
的橡皮管上有许多丝状物缠绕，
此 即为纤维蛋白。
经水冲洗后，观察其颜色及韧性。脱去纤
维蛋白的血液则称为脱纤维蛋白血液， 简称脱纤血。

3
．取新鲜血
2ml,
加入到无抗凝剂的试管中， 静置数分钟，可发生血液凝固现象，血凝块回
缩，挤出的液体即为血清。

[
注意事项
]
1
．选择抗凝剂必须考虑到不使红细胞变形、溶解 。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细
胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。

2
．血液与抗凝剂混合时应避免剧烈振动，引起红细胞破裂。

3
．操作过程应在
2
小时内完成，以免溶血和水分蒸发。抗凝血加入到分血管中应避免产生
气泡，影响读数的准确性。

[
思考题
]
1
．血液由哪些成分组成，各有什么生理作用。

2
．血浆和血清有何区别，如何制备？

3
．测定红细胞比容的实际意义是什么？

实验六

血红蛋白的测定


[
目的
]
掌握用直接比色法测定动物血红蛋白的含量。

[
原理
]
血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关，因而不利于比色。但当用氧
化剂，如盐酸将其氧化时，可使 其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色
与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。与标准比 色板比色，从而测得血
红蛋白含量。通常以每
100ml
血液中含血红蛋白克数来表示 。

[
实验对象
]
哺乳动物（种类不限）

[
实验材料
]
沙里血红蛋白计、抗凝血、
0.1N HCl
、蒸镏水、棉球等。

[
实验方法与步骤
]
1
．
沙里血红蛋白计

主要由标准褐色玻璃比色箱和
1只方形刻度测定管组成。
比
色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl
-1(
每
100 ml
血液中所含血红蛋白的克数
)
表示，从
2
～
22 g
；另一侧为血红蛋白相对值，以
%
（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从
10%
～
160%
。为避免所使用的平均
值不一致，
因此一 般采用绝对值来表示。
实验前应先检查血红蛋白计和测定管是
否清洁，如不清洁要洗涤干净，待 清洁后方可开始实验。

2
．具体测定方法如下：

①用滴管加
5
～
6
滴
0.1 mol/L HCl
到刻度测定管内
,
至管下方刻度“2”或
10%
处。

②用血红蛋白吸管吸取血液至
20 μl
处，用脱脂棉仔细揩去吸管外的血液。

③将吸血管中的血液轻轻吹到测定管底 部的盐酸中，
反复以上清吸吹
3
次，
使吸
管壁上的血液全部进入测定 管中。在吸吹时尽量避免产生气泡
,
以免影响比色。
用细玻棒轻轻搅动，将血液与盐酸 充分混合，静置
10 min
，使管内的盐酸和血
红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。

④把比色管插入标准比色箱，
使无刻度的两面位于空格的前后方向，
便于透光和
比色。
用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，
并不断搅匀，
同时对着自然光用肉眼
进行 比色，直至溶液的颜色与标准比色板的颜色相同为止。

⑤读出管内液体凹面所在的刻度，< br>可以是相对值，
也可以是绝对值，
可参照血红
蛋白计的使用说明书。国产沙里氏 血红蛋白计通常
100%
相当于
14.5
克，如液体
表面在刻度70%
处，要计算其绝对克数，可用下列比例求得：
x:14.5=70:100,
x=10.15
。

[
注意事项
]
1
．要准确用吸血管吸取和转移
20
μl
血液至比色测定管中，若 吸入过快，有盐
酸或血液被吸入采血管的乳胶头，
则应将吸管洗涤干净，
重新吸血。< br>洗涤过程是：
先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、
95%
酒精、乙醚 洗涤采血管
1
～
2
次，使采血管内干净、干燥。

2．
血液和稀盐酸的作用时间不能少于
10
分钟，
不然血红蛋白不能充分变 成高铁
血红蛋白，使结果偏低。

3
．比色应在散射自然光下进行，避免在黄色灯光下进行比色，以免影响结果。
< br>4
．加蒸馏水时，开始可以多加几滴，随后逐滴加入，并用玻棒不断混匀，以防
稀释过度 。

[
思考题
]
测定血红蛋白的方法有哪些？

实验八

红细胞沉降率（血沉）测定


[
目的
]
了解红细胞沉降率的意义并掌握其测定方法。

[
原理
]
将加有抗凝剂的血液置于一特制的具有刻度的玻璃管（血沉管）内 ，置
于血沉架上，
由于红细胞的比重比血浆大，
经过一定时间，
红细胞因重力 作用而
逐渐下沉。通常以第
1
小时末红细胞下降的距离
,
作为红细胞 沉降速率（
ESR
），
简称为血沉。
血沉的快慢取决于红细胞是否相互叠连，
红细胞叠连后，
表面积与
容积减少，因而与血浆的磨擦力减少，沉降加快。而红细胞叠 连的形成，主要取
决于血浆的成分。
临床上某些疾病可引起血沉加快，
因此血沉具有临 床诊断意义。

[
实验对象
]
哺乳动物（种类不限）

[
实验材料
]
抗凝血、魏氏血沉管、血沉管架，试管，采血针，
2ml
移液管，消毒
5ml
注射器
及
8
号针头，棉签，75%
的酒精棉球，碘酒，
3.8%
柠檬酸钠溶液等。

[
实验方法与步骤
]
1
．取血：静脉取血
1.6 ml
，加入含
3.8%
柠檬酸钠
0.4 ml
的小试管中，轻轻颠< br>倒小试管
3~4
次，使血液与抗凝剂充分混匀。

2
．吸血：
用干燥的魏氏沉降管从小试管内吸血至至刻度“0”处，
管内不能有气
泡， 试去血沉管下端外面的血液，将血沉管直立于血沉架上，并计时。

3
．观察结果：
1 h
末，准确读出红细胞下沉后暴露出的血浆段高度，即为 红细
胞沉降率（
mm/h
）。

[
注意事项
]
1
．抗凝剂与血液比例为
1
：
4
，并充分混匀。

2
．血沉管放置要垂直，不得有气泡和漏血。

3
．沉降率随温度 的升高而加快，故应在室温
22~27℃左右为宜，全部测定过程
应在采血后
2 h
内完成。

4
．血沉管必须清洁，如内壁不清洁可使血沉显著变慢。

[
思考题
]
影响红细胞沉降率的因素是什么？

实验七

红细胞脆性的测定


[
目的
]
学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正
常形态与功能的重要性。

[
原理
]
红细胞在高渗溶液内会因失去水分而皱缩；反之，在低 渗溶液内，则水
分进入红细胞，使红细胞膨胀。如溶液渗透压继续下降，红细胞会膨胀而破裂，
并释放血红蛋白，
称之为溶血。
红细胞膜对低渗溶液的抵抗力称为红细胞渗透脆
性。其 大小可用
NaCl
溶液浓度的高低来衡量，对低渗盐溶液抵抗力大的其渗透
脆性较小， 抵抗力小的其渗透脆性较大。将血液滴入不同浓度的低渗
NaCl
溶液
中，开始出现溶 血的
NaCl
溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力。而刚出现完
全溶血的
N aCl
溶液浓度为该血液红细胞的最大抗力。最小抵抗力代表其最大脆
性，
而最大抵抗 力代表其最小脆性。
生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等
渗溶液，而将能使悬浮于其中的 红细胞保持正常形态和大小的溶液称为等张溶
液，等渗溶液不一定是等张溶液（如
1.99%< br>的尿素溶液）。

[
实验对象
]
动物种类不限。

[
实验材料
]
抗凝血，
1%
氯化钠溶液，
蒸馏水 ，
10ml
小试管，
试管架，
滴管，
1
ml
移液管，
1.99%
尿素。

[
实验方法与步骤
]
1
．
溶液配制：
取口径相同
10
支小试管编号排列于试管架上，
按下表将
1%
的
NaC l
稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为
2ml
。


试管号

1%NaCl(ml)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1.40
1.30
1.20
1.10
1.00
0.90
0.80
0.70
0.60
0.50
蒸馏水（
ml
）

0.60
0.70
0.80
0.90
1.00
1.10
1.20
1.30
1.40
1.50
NaCl
浓度（
%
）

0.70
0.65
0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
2
．加抗凝血：用滴管吸取抗凝血 ，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀（用拇指堵住试管口，
顺序将试管缓慢倒置二次。

3
．在室温下静置
1
～
2 h
。

4
．观察结果：依据各管中液体颜色和浑浊度的不同，
判断红细胞溶血程度。

①试管内液体下层为浑浊红色，
上层为无色透明，
表明
无红细胞破裂，未发生 溶血。

②试管内液体下层为浑浊红色，
上层出现透明红色，
表
示 部分红细胞破裂，称为不完全溶血。

③试管内液体完全变成透明红色，
管底无红细 胞沉淀，
表明红细胞完全破裂，
称为完全溶血。

5
．红细胞渗透 脆性范围：根据前述原理判断出开始溶血及刚开始完全溶血的试管，前者的
NaCl
浓度为红细 胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。

6
．等渗溶液和等张溶液：另取两支试 管，分别加入
0.85%
和
1.99%
尿素各
2ml,
随后 分别各
加一滴抗凝血，轻轻颠倒混匀，观察比较其溶血情况并分析原因。

[
注意事项
]
1.

小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，滴管握持角度尽可能一致。

2.

血液滴入试管后，立即轻轻混匀，避免人为溶血。

3.

配制不 同浓度的
NaCl
溶液必须准确。
NaCl
溶液的浓度梯度可根据畜禽特点进行调整。

[
思考题
]
1.

为什么同一个体不同红细胞的渗透脆性存在差异？

2.

等渗溶液和等张溶液的区别？

3.

测定红细胞渗透脆性有何临床意义？

实验五

红细胞和白细胞细胞计数


[
目的
]
了解红细胞、白细胞人工计数原理，并学习其测定方法。

[
原理
]
血液中血细胞数很多，无法直接计数，需要将血液稀释后，置于血 细胞
计数板的计数室内，在显微镜下计数一定容积的稀释血液中的红、白细胞数量，
然后将之换 算成每升血液中所含的红、
白细胞数。
白细胞稀释液可破坏血细胞膜，
但白细胞中有核 ，故可通过在计数室内计数一定体积血液中所有的白细胞核数，
来进行白细胞计数。

[
实验材料
]
抗凝血，血红蛋白吸管，试管架，小试管，移液管，洗耳球 ，显微镜，血细胞计
数板（包括盖玻片），计数器，蒸馏水，
75%
酒精，
9 5%
酒精，乙醚，
1%
氨水，红
细胞和白细胞稀释液