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白假丝酵母菌

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-25 13:26

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2021年1月25日发(作者:项立刚)
.
选题的目的和意义




白假丝酵母菌为机 会致病菌,存在于人的皮肤,口腔,上呼吸道,阴道及皮肤黏膜。当机
体免疫力下降或长期使用抗生素引 起的菌群失调等情况出现时,
可引起皮肤、
黏膜感染,


的染所致 疾病的困难程度日益增大
[2]
。白假丝酵母菌有两种生长状态,游离状态和生物膜
状 态。


生物膜是一种粘附于生物或非生物表面的微生物菌落,
它们包裹于自 身产生的细胞
外基质中,
是微生物在生长过程中为适应生存环境而形成的一种于浮游细胞相对应 的存在形

[1]
。感染白假丝酵母菌后多有生物膜的形成。
生物膜细胞对多 数抗真菌药物有明显的耐药


性,因此由白假丝酵母菌感染引起的疾病已构成临床医 生和患者棘手的问题
3




壳聚糖是氨基多糖的天然高 分子物质,
壳寡糖
(COS)
是壳聚糖的降解产物。
与壳聚糖相比,
壳寡糖分子量小、
易溶于水,
极易被人体吸收。
因此壳寡糖具有更独特的功能性质和生 物活
性。抗菌作用是壳寡糖的主要生理功能之一。



本次实验就 是来研究壳寡糖对白色念珠菌游离菌和生物膜菌的杀菌作用,
以降低临床中真
菌感染后难以治愈 的困难。




实验方案


1

材料与方法

1.1
菌株分离、培养、鉴定及细菌悬液的制备




取疑似真 菌感染患者的分泌物(
100
例)

直接涂片革兰染色,
镜下观察并 初步鉴定;
标本立即接种于沙堡琼脂培养基,
挑取可疑菌落
涂片,
革兰染色确 认为酵母样真菌后,转种
CHROMagar
白假丝酵母菌显色培养基,翠绿色
为白假 丝酵母菌。


从沙氏培养基上挑取单菌落实验菌株接种在
YPD
液 体培养基上,
37

摇床培养
24h,
收集对数期生长状态的细胞, 用
PRMI-1640
培养液配置浓度为
1
×
10
7
cell/ml

OD520nm=0.38
的菌悬液。
[4]
1.2
壳寡糖溶液


取平均相对分子质量为
2000< br>的壳寡糖,将壳寡糖溶于无菌蒸馏水分别配
成浓度为
2.5

5

10

20

40g/L
的溶液,高压消毒后备用。< br>
1.3
配制菌液:将
100
μ
L10
%牛血清PRMI-1640
培养液加入无菌
6
孔板中,
37
℃孵育24h

无菌
PBS
冲洗
3
遍。加入
100< br>μ
L
标准悬菌液,对照组加入等体积培养液,
37
℃培养
2h ,




PBS
冲洗
3
遍,洗去未粘附 细胞。
5

1.3.2
壳寡糖对白假丝酵母菌的抑制试验:在六孔板
(2
号)
1-5
孔中加入
48h
培养后的生物膜,然
后加 入
3ml
分子量为
2000
的壳寡糖溶液,浓度依次为
2.5

5

10

20

40g/L,
第< br>6
孔加入
3ml
无菌蒸馏水。作用时间为
30min,
弃去壳 寡糖溶液,用无菌蒸馏水冲洗三次。加
100
μ
LPRMI-1640
,每孔 加入
10
μ
LCCK-8
,避光容器内孵育
2h
后用酶标测
450nm
下的
OD
值。

6


再次取一个新的六孔板(
3
号)
,操作如上,将生物膜换成
2h
培 养得到的游离菌。





预期结果:

病原菌分离培养结果:可以分离出白假丝酵母菌
,
出现表面光滑,带有浓厚酵母气味的典型< br>类酵母菌落。

壳寡糖对白假丝酵母菌的抑制试验
:
比较两组中
1-5
孔和第
6
孔的
OD
值,可明显看出
6


OD
值大于
1-5

OD
值,说明壳寡糖对白假 丝酵母菌生物膜的形成有抑制作用




研究现状:
綦成 、张春燕、亓庆国
[1]
对白色念珠菌进行了生物膜形成的定量分析和形态学
观察,< br>实验表明,
白色念珠菌可以在玻片上形成典型的城市的生物膜结构,
形成过程经过了
.

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