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HPV临床常用检测方法

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-25 03:39

国家免费孕前优生健康检查-

2021年1月25日发(作者:曾昭科)
精品文档

由于
HPV
不能在体外细胞培养,
故不能用简便 的血清血检测进行
HPV
的诊断和分型。
临床上
用于检测
HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和
PCR
等,其中以< br>PCR
方法的敏感性最高,是目前应用最多


感染的
HPV
型别、
含量、
持续时间决定病变的发展与预后
,
是进行
HP V
检测的主要内容。
目前主要是通过应用分子生物学方法进行
HPV DNA
的检测。

1
、现有的
HPV
实验室主要检测手段
:


聚合酶链反应
(PCR, Polymerase Chain Reaction):
扩增位于两段已知序列之间的
DNA
片断的方法。该法有较高的敏感度
,
可 进行
HPV
分型
,
缺点是对实验室环境要求较高
,

易发生样本间的交叉污染
,
从而导致假阳性率高。



核酸杂交检测

有较好的特异性和敏感度
,
还可以进行
HPV
DNA
的分型
,
各种核酸杂交检测方法有一定的
优缺点。

A
核酸印迹原位杂交


适用于
HPV
分型和
HPV DNA
分子量鉴定
,
虽然灵敏度高
,
但因操作复杂
,
需要新鲜组织标

,
不便在临床上大规模使用。

B
斑点印迹


其敏感度和 特异性均低于核酸印迹原位杂交法
,
虽然经济实用
,
但实验过程存在有放射< br>性污染
,
是环保所不能轻视的问题。

C
原位杂交(
in situ hybridization
,一种核酸杂交 技术,可用来测定基因或特定核
苷酸序列在核酸分子的所在部位,检测重组体
DNA


通过非放射性探针对石蜡组织进行检

,
能作定位检测
,
假阳性率低
,
但灵敏度不高
,
大大降低了临床使用价值。

D
杂交捕获法
(Hybrid Capture)

杂交捕获试 验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。
首先使
DNA
双链释放并分解
成为可以杂交的核苷酸单链
,DNA
单链与
RNA
组合探针结合为
R NA-DNA
杂合体
,
特异性抗体将
RNA- DNA
杂合体捕获
,
偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与
RNA-DNA
杂合体结合
,
碱性磷酸酶使酶
底物发光
,
根据光的强弱可确定碱性磷 酸酶的含量
,
从而确定
RNA-DNA
杂合体的含量。
能检测
13
种高危型
HPV,
包括
HPV16

18

31

33

35

39

45

51

52

56

58
、< br>59

68



各种检测方法的比较


各种检测方法的比较

.
精品文档

方法学

细胞学(
Cytology


斑点印迹(
Dot blot


核酸印迹原位杂交(
southern
灵敏度







特异性







技术特点

操作容易,成本较低,准确度较差

有一定放射性

标准、麻烦,不宜大规模使用

blot
hybridization


原位杂交(
In Situ


hybridization


无放射性,易使用, 高、低危型间有交叉反
杂交捕获(
HC

HC2






应,且不能分型

取材容易,但目前已应 用试剂的只能检测少
普通多聚酶链反应(
PCR


很高



数单一型别,如
6

11

18等,且由于技术上的问
题存在假阳性



蜡块组织包埋内检测
HPV






2
、最新推出的
HPV
的实验室检测技术

高灵敏度高危型
HPV
分型多色荧光实时
PCR
试剂:
为欧洲著名分子生物学研究机 构专门
针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型
HPV
分型多色荧光实时
PCR< br>检测试剂,
可同时检测高危
型中最主要的
16

18

31/33

35/45
型。


了解宫颈疾病 人乳头状瘤病毒(
HPV
)感染患者中
HPV
亚型分布情况及高危型
HPV
的年
龄分布。
方法采用专利
Invader
酶切信号放大法,
利用
Cervista HPV HR Cervisat
核酸杂交
基因分型 试剂检测宫颈脱落细胞
HPV

14
个亚型
DNA


HPV
型组

A5/A6
A7
A9



亚型

51

56

66
18

39

45

59

68
16

31

33

35

52

58

备注





.

国家免费孕前优生健康检查-


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