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实验
HA
与
HI
一、
实验原理
某些病毒（如新城疫病毒，减蛋综合症）能凝集某些动物的红细胞，这种现象虽非抗原抗体，
但利用这一现象可检查样品中是否有病毒存
在，测病毒滴度，病毒红细胞血凝由于能被相应抗体所抑制，因此可
以通过病毒的血凝抑制试验测定抗体的效价。
二、实验试剂与器材
1
、实验器材
小烧杯、电子天平、离心机、离心管、采血针、玻璃棒、微量
移液器（
50
μ
l
）
、枪头（
50
μ
l
）
、培养皿、96
孔板恒温箱
2
、实验材料
免疫过的鸡
3
、实验试剂
3*1 0.9%
生理盐水（
200ml
）
称取
1.8gNaCl,
溶解于
200ml
蒸
馏水中，即可制成
3*2 1%
红细胞配制
< br>（
1
）
、取抗体凝血，离心（
1000~1500rpm,5min< br>）
（
2
）
、
弃上清，
取
5ml
生理盐水，
离心
（
1000~1500rmp,3~5m in
）
（
3
）
、弃上清，取5ml
生理盐水，离心（
3000rmp , 3~5mim
）
（
4
）
、以红细胞体积，加入生理盐水，制成
1%
浓度
抗体制备
3*3
（
1
）
、从鸡翅取血，放入离心管中（
2000rmp , 3~5min
）
（
2
）
、吸取上清，即为抗体（黄色清亮）
3*4
抗原制备
（
1
）
、取新城疫病毒干粉，加生理盐水（灭菌过）
）
、
（
2
）
、溶解，即为抗原
三、实验步骤
1
、
HA
实验步骤
（
1< br>）
、前
10
孔与第
12
孔，每孔加
50
μ< br>l
生理盐水
（
2
）
、第
11
孔加
50
μ
l
病毒液，第
12
孔不加，前< br>10
空依次倍
比
孔口
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
项目
50 50
50
50
50
50 50
50
50 50
50
不稀释液
加
→→→→→→→→
不病毒液弃
50
→
50
，
50
50
加
50
50 50 5050
50 50 50
11
：
1024
：
2 1
阳
毒病液：
：阴
14 1
：
1
：
1
：
1
：
8 11
：
：
16
256
倍稀释
性
64
性
32
128
512
对对
数
照
照
50 50 50
50
红细胞
50 50 50 50 50 50 50
50
放用作时
37
℃恒温箱
20min
温间与
度凝凝
结果凝凝凝凝凝
不
不
不
凝
不
凝
集
凝
凝
凝
集
集
集
集
集
集
集．
12 10 11 5 6 7 8 9 2
孔口
1 3 4
项目
50 50 50 50
不加
50 50
稀释液
50 50 50 50 50
50
50
→，→→→→→→
→
不→被检抗
50
病毒倍比稀
50
毒
l
5050l50l50l
……
1211110
生
ll50
μ病毒
50
μ
生理盐水每孔
50
μ
l
液
理盐水
l
红细胞
3
）
、每孔加入
50
μ（
，
观察结果
20min
、
放
37
℃恒温箱
（
4
）
实验步骤
2
、
HI 1ml
抗原液，加
2^2 ,
则取
/
、四单元抗原：取病毒滴度
（
1
）
2^n
生
理盐水。
—
1ml(n-2)
入
2^50
μ
l
孔第
50
μ
l1210
、
(2)
前孔与第孔每孔加入生理盐水，
11
生理盐水．
体
血清稀
释倍数
50
50
50
50
50
50
50
1
：
256
50
1
：
512
50
弃
加
性
1
：
2
1
：
4
8
：
1
：
16
1
：
32
1
：
64
1
：
1
128
：
11024
阳性
阴
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