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实验
HA
与
HI
一、
实验原理
某些病毒(如新城疫病毒,减蛋综合症)能凝集某些动物的红细胞,这种现象虽非抗原抗体,
但利用这一现象可检查样品中是否有病毒存
在,测病毒滴度,病毒红细胞血凝由于能被相应抗体所抑制,因此可
以通过病毒的血凝抑制试验测定抗体的效价。
二、实验试剂与器材
1
、实验器材
小烧杯、电子天平、离心机、离心管、采血针、玻璃棒、微量
移液器(
50
μ
l
)
、枪头(
50
μ
l
)
、培养皿、96
孔板恒温箱
2
、实验材料
免疫过的鸡
3
、实验试剂
3*1 0.9%
生理盐水(
200ml
)
称取
1.8gNaCl,
溶解于
200ml
蒸
馏水中,即可制成
3*2 1%
红细胞配制
< br>(
1
)
、取抗体凝血,离心(
1000~1500rpm,5min< br>)
(
2
)
、
弃上清,
取
5ml
生理盐水,
离心
(
1000~1500rmp,3~5m in
)
(
3
)
、弃上清,取5ml
生理盐水,离心(
3000rmp , 3~5mim
)
(
4
)
、以红细胞体积,加入生理盐水,制成
1%
浓度
抗体制备
3*3
(
1
)
、从鸡翅取血,放入离心管中(
2000rmp , 3~5min
)
(
2
)
、吸取上清,即为抗体(黄色清亮)
3*4
抗原制备
(
1
)
、取新城疫病毒干粉,加生理盐水(灭菌过)
)
、
(
2
)
、溶解,即为抗原
三、实验步骤
1
、
HA
实验步骤
(
1< br>)
、前
10
孔与第
12
孔,每孔加
50
μ< br>l
生理盐水
(
2
)
、第
11
孔加
50
μ
l
病毒液,第
12
孔不加,前< br>10
空依次倍
比
孔口
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
项目
50 50
50
50
50
50 50
50
50 50
50
不稀释液
加
→→→→→→→→
不病毒液弃
50
→
50
,
50
50
加
50
50 50 5050
50 50 50
11
:
1024
:
2 1
阳
毒病液:
:阴
14 1
:
1
:
1
:
1
:
8 11
:
:
16
256
倍稀释
性
64
性
32
128
512
对对
数
照
照
50 50 50
50
红细胞
50 50 50 50 50 50 50
50
放用作时
37
℃恒温箱
20min
温间与
度凝凝
结果凝凝凝凝凝
不
不
不
凝
不
凝
集
凝
凝
凝
集
集
集
集
集
集
集.
12 10 11 5 6 7 8 9 2
孔口
1 3 4
项目
50 50 50 50
不加
50 50
稀释液
50 50 50 50 50
50
50
→,→→→→→→
→
不→被检抗
50
病毒倍比稀
50
毒
l
5050l50l50l
……
1211110
生
ll50
μ病毒
50
μ
生理盐水每孔
50
μ
l
液
理盐水
l
红细胞
3
)
、每孔加入
50
μ(
,
观察结果
20min
、
放
37
℃恒温箱
(
4
)
实验步骤
2
、
HI 1ml
抗原液,加
2^2 ,
则取
/
、四单元抗原:取病毒滴度
(
1
)
2^n
生
理盐水。
—
1ml(n-2)
入
2^50
μ
l
孔第
50
μ
l1210
、
(2)
前孔与第孔每孔加入生理盐水,
11
生理盐水.
体
血清稀
释倍数
50
50
50
50
50
50
50
1
:
256
50
1
:
512
50
弃
加
性
1
:
2
1
:
4
8
:
1
:
16
1
:
32
1
:
64
1
:
1
128
:
11024
阳性
阴
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