血浆蛋白的测定及临床意义

2021年1月23日发(作者：戴伯行)
血浆蛋白的测定及临床意义


一、

血浆蛋白质测定方法的进展
：

（一）
、比色法：例如总蛋白的测定 方法：双缩脲反应法；白蛋白的测定方法：溴甲酚绿
法。

（二）
、电泳法：是进一步分离蛋白质的方法。

（三）
、免疫测定法：是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。

特点：
（
1
）特异性好：即某一抗原只与其相应的抗体起反应。

（
2
）敏感性高，可检测出纳克（
ng
）水平的的量。

免疫测定法包括：

1
、

免疫扩散法：敏感度在
ug/ml
，因此只能用于检测含量较高的蛋白质。且操作
繁琐、时间长，需
18-4 8
小时。

2
、

免疫电泳法：
是区带电泳与免疫 扩散相结合的方法。一般不能定量，
仅用于检
测异常蛋白成分。

3
、

免疫浊度法：
基本原理是：当可溶性抗原与相应抗体特异结合 ，在二者比例合
适，
并有一定浓度的电解质存在时，
可以形成不溶性的免疫复合物，< br>即沉淀反
应。

二、

免疫浊度法的原理：

免疫浊度法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。

1
、透射免疫比浊法 ：当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被形成的免
疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定 范围内，吸光度（
A
）与
IC
量呈正
相关。
因此当抗体量固 定时，
根据吸光度可计算出抗原量。
要求形成的
IC
达到
一定的数量 ，而且分子颗粒较大，否则难以精确测定，因此检测灵敏度相对较
低。

2
、 散射免疫比浊法：光线通过检测溶液时，被反应形成的抗原抗体复合物折射而
部分偏转，产生散射光，散 射光强度（
I
）与样本的
IC
量、散射夹角（
θ
）成
正比，而与入射光波长成反比。



散射免疫比浊法又可分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法

（
1
）

终点散射免疫比浊法：当反应达到平衡时进行检测，通常需
10-30min
，
且灵敏度较低。

（
2
）

速率散射免疫比浊法：
由于抗原与抗体结合形成免 疫复合物的速度在单
位时间内时不同的，当反应开始时，进行动力学测定可以发现在某一时
间反 应速度最快，
IC
形成最多，
散射光强度相应最大，
即所谓速率峰
（ 最
大反应速率
Vmax
）
，
Vmax
与待测抗原量呈正相关 而获得测定。

主要优点：快速、灵敏、精密度高、检测范围广。

三、

免疫比浊分析的影响因素：

1
．抗原抗体的比例： 抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。免疫比浊法的基本条
件是在保持抗体过剩的情况下测定加入的抗 原。但抗体过剩又必须适量。一般原
则是先确定某一被测物的正常值，以±
50%
作为 检测范围，抗体在此范围内应保
持过剩。

2
．抗体的质量：要求抗体有很强 的特异性，有较高的效价，以及有高的亲和力。一
般采用
R
型抗体。

3
．反应溶液：一般采用
PH
在
7.0
左右的磷酸盐缓冲液。
4
．增浊剂的作用：一般使用浓度为
3%-4%
的
PEG6000
四、

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特定蛋白分析仪的简介：

1
．原理：采用速率散射比浊法。

2
．测定速度：
40- 80
结果
/
小时，每次可检测
40
个标本。

3
．
特点：
具有
抗原过剩识别
功能。

在 抗体量一定的情况下，免疫复合物生成量随着抗原量的增加而增多，但抗原量
超过一定域值后，免疫复合 物的量却随之减少，影响检测的准确性。
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具
有的抗原过剩识别功能的 工作原理是：在检测到抗原抗体反应速率峰之后，在反
应溶液中加入能与过剩抗体反应的微量的
Ag
，若反应溶液中有过剩抗体存在，
则与加入的
Ag
反应，形成一个过剩抗 体峰；若反应溶液中无过剩抗体存在，不
能检测到过剩抗体峰的存在。当一个反应，有速率峰和过剩抗体 峰同时存在时，
仪器将确认第一次出现的速率峰有效，并将结果打印出来；而没有过剩抗体峰存
在的反应，仪器将重新对标本进行更高稀释度的稀释，然后再测定结果。