制备与纯化

2021年1月23日发(作者：易先)
抗体制备
:
重组蛋白抗原

抗体制备：重组蛋白抗原
< br>目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原，这两种方法各有优缺点，需结合实验需求进行选择。

重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇，其中有些是顺序决定簇，有些为结 构决定簇。利用变
性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物，在一般应用 中能够用于检测天
然结构或变性的目标蛋白。
利用变性蛋白做为免疫原的一个附带的好处是变性 蛋白往往有更强的免疫原性，
能够刺激动物产生强的免疫应答。


用做抗原 目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系，因为该体系时间与金钱成本最低。为了提高目标
蛋白质表 达的可能性与纯化的方便性，人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定的结构域。大肠杆
菌系统是 欣百诺最早建立的成熟表达体系，有一系列设计完美的表达载体与非常成熟的表达培养条件，能
够在较短 时间内获得基因表达产物，且所需的成本相对较低。


如果制备抗体的目的单纯用于
wb
检测，采用合成的小肽作为抗原是经济快速的，但是存在由于肽段选择
不合适造成 的免疫原性弱或者无反应原性的风险，由于抗体制备需要较长的周期，因此利用多肽抗原制备
抗体时，常 常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。


一般用多肽制备的抗体只能识别顺 序决定簇，用于检测非变性状态的抗原时效果很差，特别是制备中和抗
体时，需要最大可能的保持抗原的 天然结构。重组抗原在免疫原性、表位多样性上远优于多肽


·
抗体制备（重组蛋白抗原）
——

步骤

1.
重组蛋白抗原表达及纯化制备


免疫用的多肽抗原

纯度 要求大于
80%
，更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体，实际操作过
程中 动物总是要产生大量非特异性抗体，从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。

抗原序列的决定：

客户提供目标蛋白序列或
cDNA
序列，我们 将进行抗原性分析预测，并结合您的实际需要，选取最佳的区
域作为抗原序列。

此步骤服务说明请查考

重组蛋白表达与纯化技术服务（
E. coli
表达系统）。


·
抗体制备（重组蛋白抗原）
——

步骤

2.
免疫动物
/
采血


目前我们仅提供兔子的多抗制备，采用 的动物为
SPF
级新西兰大白兔。每两周免疫一次，共免疫
5
次。

ELISA
检测，确保免疫后血清效价大于
1:4000
。

客户需要提供的材料：

若客户提供交联好的蛋白，请与客服人员沟通其具体要求。

提供客户
：< br>60-100ml
免疫后血清，
1ml
免疫前血清对照，效价检测结果

时间
：
10
周左右





抗体制备
:
合成多肽抗原

抗体制备：合成多肽抗原




目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原，这两种方法各有优缺 点，需结合实验需求进行选择。


重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇 ，其中有些是顺序决定簇，有些为结构决定簇。利用变
性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原 决定簇的抗体的混合物，在一般应用中能够用于检测天
然结构或变性的目标蛋白。
利用变性蛋白 做为免疫原的一个附带的好处是变性蛋白往往有更强的免疫原性，
能够刺激动物产生强的免疫应答。

用做抗原目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系，因为该体系时间与金钱成本最 低。为了提高目标
蛋白质表达的可能性与纯化的方便性，人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定 的结构域。大肠杆
菌系统是欣百诺最早建立的成熟表达体系，有一系列设计完美的表达载体与非常成熟的 表达培养条件，能
够在较短时间内获得基因表达产物，且所需的成本相对较低。

< br>如果制备抗体的目的单纯用于
wb
检测，采用合成的小肽作为抗原是经济快速的，但是存 在由于肽段选择
不合适造成的免疫原性弱或者无反应原性的风险，由于抗体制备需要较长的周期，因此利 用多肽抗原制备
抗体时，常常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。


·
抗体制备（合成多肽抗原）
——
步骤

1.
多肽合成


免疫用的多肽抗原

纯度要求大于
8 0%
，更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体，实际操作过
程中动物总是要产生大量 非特异性抗体，从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。

客户需要提供的材料：

委托我们合成时请提供您的目标多肽序列或蛋白质序列，由我们与你讨论决定具体采用的序列。

提供客户
：合成好的多肽，多肽高效液相图谱

时间
：
2
周


·
抗体制备（合成多肽抗原）
——
步骤

2. KLH
交联

用小片段多肽制备抗体时必须交联到适当的载体抗原上以增强其免疫原 性。
我们提供
KLH
与白蛋白两种抗
原载体。

客户需要提供的材料
：