蛋白表达不同检测方式的比较和分析

2021年1月23日发(作者：贾冲之)
蛋白表达不同检测方式的比较和分析

免疫组化法
(
immunohistochemistry
)
原理 ：
免疫组化，是应用免疫学基本原理
——
抗原
抗体反应，即抗原与抗体特异性 结合
的原理，通过化学反应使
标记抗体
的
显色剂
（
荧光素< br>、酶、金属离子、
同位素
）显色来确定
组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）
，对其进行定位、定性及定量的研究，称为
免疫组织化学技
术
(
immun ohistochemistry
)
或
免疫细胞化学技术
(
immu nocytochemistry
)
。

特点：
是融合了免疫学原理
（抗原抗体特异性结合）
和组织学技术
（组织的取材、
固定、
包埋、 切片、脱蜡、水化等）
，通过化学反应使标记抗体的显色剂
(
荧光素、酶、金属离子、
同位素
)
显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究
(主要是定位
)
。样本是
细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质 阳性和核阳性。


蛋白免疫印迹
(
Western Blot
)

原理：
蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝 胶转移到固相支持物
NC
膜或
PVDF
膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗 原的一种蛋白质检测技术。

特点：
先要进行
SDS-PAGE
，然 后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，
而后利用抗原
-
抗体
-
标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。


ELISA
检测

原理：
酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法， 或者
ELISA
法，它的中心就是让抗体
与
酶复合物
结合，然后通过 显色来检测。

特点：
用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆 、尿液、细胞或
组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操 作
上

开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，
从而使后来形成的抗原< br>-
抗体
-
酶
-
底物复合物
粘附在载体上，这就是“
吸附
”
的含义。




免疫组化和
elisa
所用到的原理

大致相同，
只是因为 所检测的样品不同，
从而在操作方法
上有所不同。
Elisa
多用于定量分析 ，其灵敏度非常高。






3
种蛋白检测水平的比较


蛋白检测方式

相同点

样品类
型

分析方
式

Western blot
法

ELISA
试剂盒法

原理：抗体
-
抗原结合反应

组织或细胞

组织或细胞

血清、血浆、尿液、
细胞或组织培养上
清液

定位、定性及定量的研究
可以用于
定性
和半定
多用于
定量< br>分析，
其
(
主要是
定位
，
定位敏感性
量，定 量较免疫组化
灵敏度非常高

远远高于
Western blot
法准确

法
)
免疫组化图（膜阳性、质
电泳图（着色的位置
蛋白浓度

阳性和核阳性）

和着色深度）

特异性强、敏感性高、定
分析容量大、敏感度
灵敏、特异、简单、
位准确、形态与功能相结
高、特异性强

快速、稳定、易于自
合

动化操作及节省实
验经费
< br>⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别
是检测蛋白质特性、
是分泌性蛋白检测
诊断；⑵确定转 移性恶性
表达与分布的一种最
首选方法之一。

肿瘤的原发部位；⑶对某
常用的方法。

⑴免疫酶染色各种
类肿瘤进 行进一步的病理
⑴组织抗原的定性定
细胞内成份的定位；
分型；⑷软组织肿瘤的治量检测；⑵多肽分子
⑵研究抗酶抗体的
疗一般需根据正确的组织
的质量测定；⑶病 毒
合成；
⑶显现微量的
学分类，因其种类多、组
的抗体（或抗原）检
免疫沉淀反应。
⑷定
织形态相像，有时难以区
测；⑷疾病早期诊断

量检测体液中抗原
分其组织来源，应用多种
或抗体成份。
【多种
标志进行免疫 组化研究对
病原微生物所引起
软组织肿瘤的诊断是不可
的传染病、
寄生虫病< br>缺少的；⑸发现微小转移
及非传染病等方面
灶，有助于临床治疗方案
的免疫诊断 】

的确定，包括手术范围的
确定。⑹为临床提供治疗
方案的选择。


免疫组化法

观察结
果

优点

不同
点

应用范
围



各组检测方法之间的差别及特点：

以下是
western
和
ELISA
的区别：

1.
western blotting
可以看到特异性的条带，但是定量比较烦

2.
ELISA
可以直 接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。

3.
WB< br>只能半定量
,
但是可以检测细胞膜蛋白
,
这点
ELISA做不到

4.
ELISA
可用定量方法检测蛋白
,
也 就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响


5.
WB
所检测的一般是抗原，而
ELISA
抗原抗体都可以检测。

6.
WB
所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一 句话，
WB
可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而
ELISA
无能为力 。

7.
WB
所适用的一抗一般是线性位点的，
ELISA
线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意
义上讲，
WB
可以做抗体是线性位点还是 构象型位点的补充判定，而
ELISA
不行。

8.
WB
一次处理量就是一块胶版，
10-20
个样品最多了。
ELISA
一块
96
孔板一次可以处理
96
个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测 的可信度。

9.
WB
操作常见的非特异性条带，
膜本底差，显色不好等缺点在
ELISA
上表现得要好得多。



《
HMGB1
、
MMP-9
和
CEA
在非小细胞肺癌组织 中的表达及临床意义》

中英文实例分析：

一、免疫组化
（免疫组化图——阳性表达率）