自身抗体检测项目及临床意义

2021年1月23日发(作者：蔡景楷)
一、抗核抗体








抗核抗体（
antinuclearantibodies
，
ANA
）泛指抗各
种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。
ANA
的性质主要是
IgG
，也有
IgM
和
IgA
，甚至
IgD
和< br>IgE
。
ANA
可以与不同来源的细胞
核起反应，无器官特异性和种属 特异性。
ANA
主要存在于血清中，也
可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。< br>





ANA
在
SIE< br>患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身
免疫病中，
在许多研究报告中，
都将 检出
ANA
作为自身免疫甚至自身
免疫病存在的依据。这种现象的机制尚未明了，有待 于进一步研究。

（一）
ANA
的类型及意义







由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的
ANA
。






1
．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（
DNP
）由
DNA和组蛋白组
成。
由于
DNP
抗原存在不溶性和可溶性两个部分，
可分别产生相应的
抗体。
不溶性
DNP
抗体通常不完全被
DNA和组蛋白所吸收，
它是形成
狼疮细胞的因子；
可溶性抗原存在于各种关节炎病人的 滑膜液中，
其
相应抗体也出现于
RA
病人的滑膜液中。






2
．抗
DNA
抗体可以分为两 大类：①抗天然
DNA
（
nDNA
）
抗体，或称抗双链
DN A
（
dsDNA
）抗体；②抗变性
DNA
抗体，或称抗
单链
DNA
（
ssDNA
）
抗体。
抗
dsDNA
抗体对
SLE
有较高的特异性，
70
％～
90
％的活动期
SLE
病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。抗
ssDNA
抗体可见于 多种疾病中，特异性较差。

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．抗
ENA
抗体 可提取性核抗原（
ENA
）多从动物的胸腺
中提取。先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出 细胞核；再经盐水或磷酸
盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。
ENA
不含DNA
，对核糖
核酸酶敏感。近年来的研究表明，
ENA
可分为十几种， 现仅介绍几种
主要的
ENA
及其相应抗体。







（
1
）抗
PNP
抗体：
P NA
即核糖核蛋白，对核糖核酸酶和
胰蛋白酶敏感，加热
561h
变性。抗< br>PNP
抗体多见于混合性结缔组织
病。高效价的抗
PNP
抗体对混合性 结缔组织病有诊断意义，

而低效价的抗
PNP
抗体可在
SIE
患者中发现。







（
2
）抗
Sm
抗体：该抗体在一名
Smith
姓的患者血中首
次发现，便以其名字的前 两个字母命名。
Sm
抗原系非核酸性糖蛋白，
对
DNase
及
RNase
均不敏感，
但经碘酸盐及胰蛋白酶处理后可被水解。
抗
Sm抗体是
SLE
的特异性标志之一，
但阳性率偏低，
约为
30％～
4
％；
可能是
SIE
的一种回忆性抗体，
故在非活 动期亦可检出。
若将抗
dsDNA
和抗
Sm
抗体同时检测，可提高< br>SLE
的诊断率。







（
3
）
抗
SS-A
抗体：
SS-A
为干燥 综合征（
SS
）
的
A
抗原，
可从动物胸腺的胞浆中提取。抗
SS-A
抗体主要见于
SS
，但也可见于
其他自身免疫病如
SLE
中。







（< br>4
）抗
SS-B
抗体：
SS-B
为
SS
的< br>B
抗原，亦可从动物
胸腺或小鼠肝细胞浆中提取，可被胰蛋白酶、轻度加热或改变溶液< br>pH
而破坏。
13
％的
SLE
及
30
％的< br>SS
患者有抗
SS-B
抗体。







（
5
）抗组蛋白抗体（
AHA
）： 组蛋白是一种碱性蛋白质，
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含有大量的赖氨酸及精氨酸。
目前已经发现组蛋白抗原可分为
5
个亚
单位：< br>H-1
、
H2A
、
H-2B
、
H-3
、H-4
。抗组蛋白抗体及其抗亚单位抗体
见于
SLE
及药物诱发的
LE
。
SLE
病人血清中的抗组蛋白亚单位抗体检
出率顺序为：抗
H-2B
、抗
H-1
、抗
H-3
、
抗
H-2A及抗
H-4
，
以抗
H-2B
和抗
H-1
为主， 并与
SLE
的活动性有关。

（二）
ANA
的检测方法







由于
ANA
的复杂性及多样性，
故测定方法繁多。目前
ANA
常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、
ELISA
、免疫双 扩散、对流
免疫电泳及免疫印迹技术等。






1
．
免疫荧光法检测血清总
ANA
最常用的方法是荧光 免疫
组化法。
多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，
结果比较稳定可靠，
在 荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。
如将患者血清
先进行不同比例的稀释，可以 做大致的定量试验，在
1:80
稀释仍然
虽阳性时，对
SLE
的诊断 有较大的参考价值。在油镜下观察结果，可
以将
ANA
阳性的荧光现象分成
4
种主要的荧光核型，
核型的确定对临
床诊断有进一步的参考价值。
①周边型表 示抗
DNA
抗体存在；
②均质
型表示有抗
DNP
抗体；③斑 点（颗粒）型多为抗
ENA
抗体；④核仁型
多为抗核小体抗体。
SLE
患者常出现周边型、匀质型或混合型，斑点
型多见于混合结缔组织病，
而硬皮病多为核仁型；
周边型对
SLE
有较
高的特异性。

近年有人用锥虫或血鞭 毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗
dsDNA
抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大 量的纯
dsNDA
，无其
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他抗原干扰；
在阳性结果时，
可见鞭 毛一端的动基体显示清晰的荧光。
因此该试验用于测定抗
dsDNA
抗体具有特异性强 和敏感性高的优点。
另外，短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得推广。






2
．放射免疫法常用检测抗
DNA
抗体，有
Farr
法及过滤
法。
①
Farr
法的原理为用同位素标记
DNA
，
被标记的
DNA
和被检血清
的抗
DNA
抗体结合，经
50
％硫酸铵饱和液沉淀，然后比较沉淀物和上清液中的放射活性，
从而得出
DNA
结合活性，
一般结合率大于
20
％
为阳性。②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器（孔径为
0.45< br>μ
m
）进行过滤，游离的
DNA
被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。






3
．< br>ELISA
临床上主要是应用间接
ELISA
检测抗
dsDNA
抗
体，
其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。
目前已有试
剂盒 供应。






4
．免疫印迹（< br>immunoblotting
）先将混合抗原作凝胶电
泳，分离开不同的区带，然将这 些带转印到硝酸纤维素膜上，最后用
酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。
由于该 试验不需
纯化的单个抗原，可在同一固相上作多项分析检测，灵敏度高，特异
性强。故目前已广 泛用于自身免疫病患者血清中多种自身抗体的检
测，如检测抗
Sm
抗体、抗
R NP
抗体、抗
SS-A
抗体及
SS-B
抗体等。







另外，
还可用传统的琼脂双向扩散法、
对流免疫电泳法、
间接血凝法和补体结合试验等。







这些试验要求的实验条件比较低，但敏感性也比较低。

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二、类风湿因子








类风湿因子
（< br>RF
）是抗变性
IgG
的自身抗体，主要为
19S
的
IgM
，也可见
7S
的
IgG
及
IgA
。它能与人 或动物的变性
IgG
结
合，而不与正常
IgG
发生凝集反应。
RF
主要出现在类风湿性关节炎
患者，
约
70
％～
90< br>％的血清中和约
60
％的滑漠液中可检出
IgG
类
RF
，
这很可能是自身
IgG
变性所引起的一种自身免疫应答的表现。






IgG
是感染等原因诱导的免疫应答 中的主干抗体，这些
抗体与相应抗原结合时会发生变性；
此外，
在炎症等病理条件下滑 漠
或其他部位可能产生不正常的
IgG
；这些变性
IgG
就构成自身 抗原，
刺激免疫系统产生各种抗
IgG
抗体。
滑膜液中的
IgG类
RF
与变性
IgG
结合而形成中等大小的免疫复合物，比血清中的IgM
类
RF
更具有致
病意义，
因为这一类免疫复合物易于沉积 在关节滑膜等部位，
可激活
补体，形成慢性渐进性免疫炎症性损伤。






RF
的检测最初是用致敏绵羊红细胞凝集试验
（
Rose-Waaler
法） 进行检测，目前最常采用
IgG
吸附的胶乳颗粒凝
集试验；但此法的灵敏度和特异性均 不高，而且只能检出血清中的
IgM
类
RF
。
IgG
类和< br>IgA
类
RF
则需要用
RIA
或
ELISA
等方法检测。






RF
在类风 湿性关节炎患者中的检出率很高，
RF
阳性支持
早期
RA
的倾向性诊 断，如对年轻女性应进行
RA
和风湿热间的鉴别；
而对非活动期
RA
的诊断，需参考病史。但
RF
也象
ANA
一样，并不是
RA
独有的特异性抗体。在
SLE
病人均有
50
％
RF
阳性，在 其他结缔组
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