肥达试验和沉淀反应实验报告

2021年1月23日发(作者：熊佛西)
..
实验报告

实验名称

院




系

姓




名



肥达试验

专




业


学




号

实验日期

班




级




一、实验目的

学会肥达反应 的原理、
方法以及结果分析。
理解肥达反应在伤寒和副伤寒杆菌感染检测中的
应用。< br>

二、实验器材

试剂
：

生理盐水、患 者血清、伤寒杆菌
H
菌液、伤寒杆菌
O
菌液、甲型副伤寒杆菌
H液、乙型副
伤寒杆菌
H
菌液

器材
：

水浴锅、冰箱、小试管
32
支、试管架、记号笔、移液枪


三、实验原理

1.
伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（
O抗原）
、鞭毛抗原（
H
抗原）
、体表抗原（
Vi
抗原）
。其中以
O
抗原及
H
抗原的抗原性较强，而
Vi
抗 原的抗原性不强，且相应抗体效价
低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达试验的检测项目。
（但其检查有助于发
现伤寒带菌者。
）当抗原遇到特异性抗体（抗
O
及抗
H
）时，便会发生凝集反应，通过对凝
集物量多少来推算病人体内抗体的多少，以 协助诊断、治疗及判断预后。


2.
用已知的伤寒沙门菌菌体（
O
）抗原和鞭毛（
H
）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙
门菌、乙型副伤寒 沙门菌
H
抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受
检血清中有无相 应抗体及其效价的试验。


四、实验过程及步骤

1.
取清洁小试管
32
支，分成
4
排，每排
8
支，依次编号。< br>

2.32
支小试管，用移液枪各注入
0.5ml
生理盐水。


3.
第一管内加入
1
：
10
稀释的患者血清0.5ml
，用
1ml
吸管吹吸三次，混匀，吸出
0.5ml
注
入第二管作对倍稀释，……依次稀释至第
7
管，弃去
0.5ml
，第
8
管为对照。第二排、第三
排、第四排以相同步骤加入患者血清。


4.
第一排各管内注入伤寒杆菌
H
菌液
0.5ml
；第二排各管注入伤寒杆菌
O
菌液
0.5ml
；
第三
排各 加入甲型副作寒杆菌
H
液
0.5ml
；第四排各管加入乙型副伤寒杆菌
H
菌液
0.5ml
。

’
.
..

5.
置于
56
℃水浴箱
2~4
小时。


6.
放冰箱过夜或放
37
℃水浴箱
18
小时后观察结果。< br>

7.
结果观察

最强
:
上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。

强：上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。

弱：上液混浊，细菌少部分凝集。

不凝：液体呈乳状与对照管相同。


五、实验总结

1.
结果与分析：

先观察对照 管，正确结果应无凝集现象，再观察各试验管的凝集现象，凝集程度以“
+
”多
少表示 之。

（
+++
）最强，上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。

（
++
）强，上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。

（
+
）弱，上液混浊，细菌少部分凝集。

（
-
）不凝，液体呈乳状与对照管相同。


效价判定：以 能出现“
++
”凝集现象的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。

一般认为
O
抗体效价在
1
：
80
以上，
H
抗体效价 在
1
：
160
以上，有辅助诊断意义。

H
甲或
H
乙
达到
1
：
80
或以上具有诊断意义。< br>
但在分析结果时，应注意以下两点：

（
1
）非肠热症患者 ，由于曾接种过伤寒，副伤寒疫苗或以往在流行区有过隐性感染或患过
伤寒，副伤寒，以及回忆反应等原 因，也可呈现阳性结果。不过，由这些原因所引起的阳性
反应主要是
H
抗体升高，O
抗体效价一般不高，同时，每隔
5~7
天试血一次，其抗体效价
一般不 会随病程而升高。上述这些都有别于现症感染。

（
2
）少数肠热症患者，由 于发病初期曾使用大量抗生素，或机体有免疫缺陷病，或机体反
应性极弱等原因，抗体效价可以很低，甚 至为阴性结果。

因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论，
必须 结合当地流行情况，
既
往接触史，以及临床症状和体征，做出正确的判断。


2.
肥达反应的诊断标准：

肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断，
其结果的解释必须结合临床变现和病程，
病史，
以
及地区流行病学情况。

机体患伤寒、
副伤寒，
一般于发病后
1~2
周内血液中出现特异性抗 体并且随着病程延长而效
价渐升，此时即可为阳性，第
4
周可达峰值，以后又逐渐降低 。

一般以“
O
”凝集效价在
1/80
或以上和
< br>”在
1/160
或以上为阳性。


O
抗体主要是< br>IgM,
出现较早；
H
抗体主要是
IgG
,
出现较晚 。根据此特点，肥达试验结果有
如下诊断价值：

二者均超过正常值，患伤寒的可能性大；

’
.
..
二者均在正常值内，患伤寒的可能性小；

H
抗体效价超过正常值，
O
抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；

O
抗体效 价超过正常值，
H
抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染；

一般间隔
1~2
周复查，若抗体效价比前次结果增高
2~4
倍，则具有诊断价 值。


六、教师评价












实验报告

实验名称

院




系

姓




名



沉淀反应

专




业


学




号

实验日期

班




级




一、实验目的

掌握对流免疫电泳的原理和方法，了解其用途。


二、实验器材

器材
：

电子天平、锥形瓶、
200ml
量筒、药匙、称量 纸、水浴锅、微波炉、洗耳球、玻片、移液管、

’
.