中和试验

2021年1月23日发(作者：宁宝庭)
第五节


中和试验





抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合，因抗体主要来自血清，因此在体外
进行的抗 原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。






第一节




概


述




免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为：

1.
凝聚性反应


包括凝集试验和沉淀试验。

2.
标记抗体技术


包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体技术等。

3.
补体参与的反应


补体结合试验、免疫黏附试验等。

4.
中和反应


病毒中和试验、毒素中和试验。


一、血清学反应的一般特点

1.
特异性与交叉性


血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结
合，而不能与口 蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗原和进行疾病诊断的基础。





但若两种天然抗原之间含有部分共同抗原时，
则发生交叉反应。
交叉反应是区分血清型
和亚型的重要依据。

2.
抗原抗体结合机理


抗原和抗体的结合为弱能非共价键结合，其结合力决定 于抗原决定
簇和抗体的抗原结合点之间形成的非共价键的数量、性质和距离。





常规的血清学反应，
如凝集反应、沉淀反应、
补体结 合反应等，只有在抗原与抗体呈适
当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应，在最适比例时，反 应最明显。





这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象。

二、血清学反应的影响因素

1.
电解质


特异 性的抗原和抗体具有对应的极性基
(
羧基、氨基等
)
，它们互相吸附后，其电
荷和极性被中和因而失去亲水性，变为憎水系统。









易受电解质作用失去电荷而互相凝聚、发生凝集或沉淀反应。

2.
温度


较高的温度可以增加抗原和抗体接触的机会，
从而加速反应的出现。
常用
37
℃水浴
保温。

3.
酸碱度


血清学反应常用
pH
为
6 -8
，过高或过低的
pH
可使抗原抗体复合物重新离解。







第二节


凝聚性试验






抗原与相应抗体 结合形成复合物，在有电解质存在下，复合物相互凝聚形成肉眼可见
的凝聚小块或沉淀物，
根据 此现象来测定相应抗体或抗原，
称为凝聚性试验。
分为凝集试验
和沉淀试验。

一、凝集试验






细菌、红细胞 等颗粒性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，形成肉眼可
见的凝集团块，称为凝集试验。参 与的抗体主要为
IgG
、
IgM
。凝集试验可用于检测抗原或
抗体， 优点是操作简便。







根据抗原的性质分为直接凝集试验和间接凝集试验。

1.
直接凝集试验


颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象 的试验称作直接凝集试验。
按操作方法可分玻片法和试管法两种。

（
1
）
玻片法


为一种定性试验。
将含 有已知抗体的诊断血清与待检抗原悬液在玻片上混合，
数分钟后，如出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反 应。









此法简便快速，
适用于新分细菌的鉴定或分型。
如沙门氏菌的鉴定。
也可用已知的< br>诊断抗原，检测待检血清中的相应抗体，如布氏杆菌、鸡白痢全血平板凝集试验。

（
2
）试管法


为一种定量试验，用以检测血清抗体含量。








将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等量抗原，置
3 7
℃水浴数小时观察。
视不同凝集程度记录为
++++(100
％凝集
)
、
+++(75
％凝集
)
、
++(50
％凝集
)
、
+(25
％凝集
)
和
-(
不
凝集
)
。以其
++
以上的血清最大稀释度为该血清的凝集价
(
或称滴度
)
。








试验时必须设置阳性血清、阴性血清和生理盐水等对照。

2.
间接凝集试验


将可溶性抗原
(
或抗体
)
吸附不溶性颗粒载体的表面，与相应抗体
(
或抗原
)
作用，在电解质存在条件下，出现的特异性的凝集反应称为间接凝 集反应。





优点

:
敏感性高，比直接凝集反应敏感
2-8
倍。




常用载体
:

红细胞
(
绵羊红细胞
)
、 胶乳颗粒等。当载体吸附了可溶性抗原后即称为致敏
颗粒。





间接血凝试验

:
是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体。




反向间接血凝试验

:
如将抗体致敏于红细胞表面，用以检测检样中相应抗原

。





3.
乳胶凝集试验
(LAT)






用它胶乳微球
（直径约
0.8um
）
作载体吸附某些抗原
(
或抗体
)
，
可用以检测相应的抗 体
(
或
抗原
)
。





优点


:
快速简便、易保存、较准确等。

4.
协同凝集试验
(COAG)

葡萄球菌
A
蛋白
(SPA)
能与多种动物
IgG
分子的
Fc
片结合，
结合
后保持其抗体活性，
当与相应的抗原结合时 ，
就可产生凝集反应。
本法广泛应用于多种细菌
和某些病毒的快速诊断。

二、沉淀试验









可溶性抗原与相应抗体结合，
在电解质存在下，
形成肉眼可见的白色沉淀，
称为沉
淀试验。









参与沉淀试验的抗原称沉淀原，
抗体称为沉淀素。抗原可以是多糖、蛋白 质、
类脂
等，抗原分子较小，如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清 、组
织浸出液等。


1.
环状沉淀试验



在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待检抗原于血
清表面，使之 成为分界清晰的两层。
数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为阳
性反应。

用途


用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的
Ascoli
试验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效
价滴定等。试验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血清 的沉淀价。


2.
琼脂（免疫）扩散试验


琼脂凝胶呈多孔结构，孔内充满水分，
1
％琼脂凝胶的孔径约为