炉火纯青是什么意思-
乙型肝炎病毒
e
抗原、
e
抗体检测试剂注册
技术审查指导原 则
(征求意见稿)
本指导原则旨在指导注册申请人对乙型肝炎 病毒
e
抗原、
e
抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。
本指导原则是针对乙型肝炎病毒
e
抗原、
e
抗体检测试
剂的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,
并依据产品的具体特性对注册申报资料的 内容进行充实和
细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件,
不涉及注册审批等行政事项,亦不作为法规强制执行,如有
能够满足法规要求的其他方法,也可以采用 ,但应提供详细
的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本
指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下
制定的,
随着法规、
标 准的不断完善和科学技术的不断发展,
本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、范围
(一)背景简介
乙型肝炎病毒(
hepatitis B virus
,
HBV
)属嗜肝
DNA
病
毒科,
是乙型病毒性肝炎的病原体。
HBV
主要经血(如不
安全注射等)
、
母婴及性接触传播。
HBV
感染呈世界性流行,
但不同地区
HBV
感染的流行强度差异很大。
据世界卫 生组织
报道,
全球约
20
亿人曾感染
HBV
,
其中
2.4
亿人为慢性
HBV
感染者,
每年约有
65
万人死于
HBV
感染所致的肝功能衰竭、
肝硬化和肝细胞癌(
HCC
)。
通过免疫学方法检测
HBV
标志物是临床最常用的
HBV感染的病原学诊断方法。
HBV
具有三个抗原系统,
如:
HBsAg与抗
-HBs
、
HBeAg
与抗
-HBe
、
抗
-HBc
及其抗
-HBc-IgM
检测等。
HBV
抗原与抗 体的血清学标志物与临床关系复杂,必须对几
项标志物综合分析,方有助于临床诊疗。
乙型肝炎病毒
e
抗原是从病毒
C
基因的第一个起始密码
子开始翻译 产生的包含
Pre
C
及
C
序列的蛋白,该蛋白经细
胞内蛋 白酶切除其
N
端
19
个氨基酸及
C
端
34
个氨基酸后成
为可分泌的
e
抗原。
HBeAg
为可溶性蛋白质,产生 后分泌入
血。它是在症状出现后大约
1
周出现,通常在几周后消失,
但
HBV
慢性感染者可能持续存在。血清
HBeAg
与
HBV
复制< br>及
疾病
传染性相关,在
HBsAg
阳性人群中,
HBeAg< br>的消失以
及抗
-HBe
的出现是血清学转换的标志,这与
HBV
复制和传
染性相对减弱相关。
e
抗原的血清学转换在临床治疗、预后
判断过 程中具有重要的意义。
近年来发现在一部分感染者中,
HBV
发生了在
Pre
C
区
的基因突变,
导致
HBeAg
不能合成或合成量降低,
从而出现< br>了患者血清
HBeAg
检测结果为阴性,但
HBV
DNA
仍在显著
复制的情况。
(二)本指导原则适用范围
1.
本指导原则适用于利用酶联免疫法、化学发光法、时
间分辨免疫荧光法等免疫学方 法,对来源于血清或血浆等人
体样本中的
HBeAg
、抗
-HBe
进 行体外检测,其临床预期用途
如下:
(
1
)
HBeAg< br>适用于:急性及慢性乙型肝炎病毒感染的
的辅助诊断;
慢性乙型肝炎病毒患者
H BeAg
阳性与阴性人群
区分;慢性乙型肝炎患者
HBeAg
血清学转换的 判定;慢性
乙肝病毒携带孕妇及产褥期产妇的检测。该指标定量检测可
用于抗病毒疗效的监测等 。
(
2
)抗
-HBe
适用于:急性及慢性乙型肝炎病毒感 染的
的辅助诊断及慢性乙型肝炎患者
HBeAg
血清学转换的判定。
目前相关文献尚未阐明该标志物定量检测的临床意义。
3.
本指南适用于检测
HBeAg
、
抗
-HBe
的定性检测 试剂,
关于
HBeAg
的定量检测可参考本指南。
二、注册申报资料要求
(一)综述资料
综述资料主要包括产品预 期用途、产品描述、有关生物
安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及其
他等内 容。其中,与预期用途相关的临床适应症应重点描述
申报产品临床预期用途
,
包括适用 人群、
适应症及临床使用环
境;产品描述应明确申报产品主要组成成分及检测原理;同
类产品在国内外批准上市的情况,应着重从预期用途、产品
性能等方面写明拟申报产品与目前市场上已获 批准的同类
产品之间的主要区别。综述资料的撰写应符合《体外诊断试
剂注册管理办法》(国家 食品药品监督管理总局令第
5
号)
和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准 证明文
件格式的公告》
(国家食品药品监督管理总局公告
2014
年第
44
号)的相关要求。
(二)主要原材料研究资料
1.
主要原材料的范围
体外诊断试剂产品主要原材料是指影响检测反应的灵
敏度与特异性的生物活性物质,本指南涉及产品的主要原材
料如下
:
(1
)
HBeAg
检测试剂:包被用抗
-HBe
,标记用抗
-HBe
抗体,反应体系中各种信号放大、显示系统中涉及的生物活
性物质,试剂盒中包含的 定标液
/
对照品(如涉及)
、质控品
(如涉及)等。
(< br>2
)抗
-HBe
检测试剂
:包被用抗
-HBe
抗体, 标记用抗
-HBe
抗体,
乙型肝炎病毒
e
抗原,
反应体系中 各种信号放大、
显示系统中涉及的生物活性物质,试剂盒中包含的定标液
/
对照品(如 涉及)、质控品(如涉及)等。
2.
主要原材料的筛选
申请人应 提供主要原材料的筛选过程及相关研究资料。
主要原材料的筛选过程应有科学合理的实验设计、完整的实
验过程、详实的实验数据及统计分析过程,申请人应能够依
据研究过程确定产品的主要原材料。
(
1
)
如主要原材料为外购,
应确定供应商名称,
供应商
应为原材料的生产商,
供应商应固定,
不得随意更换。
同时,
抗原应明确抗原名称、生物学来源;抗体明确抗体名称、生
物学来源、刺激免疫原名称及其来源(天然 或重组)、克隆
号(如为单克隆抗体)等信息。
(
2
)
如 主要原材料为申请人自制,
生产企业应明确原材
料的制备原理,描述制备过程。如抗原为天然抗 原,应明确
抗原制备所选病毒毒株、病毒的培养、抗原提取及纯化、抗
原鉴定等方法及相关参数 ;如为重组抗原,则应写明目的基
因的选择及来源、
基因克隆过程
(如特定脱氧核糖核 酸
(
DNA
)
分子的体外处理、重组连接、转化和宿主细胞繁殖等实验过程)、抗原表达及抗原纯化鉴定等方法及相关参数。针对主
要原材料抗体,应明确免疫刺激原的名称 及来源。如为多克
隆抗体,应明确免疫动物品系及抗体的收集、纯化过程;如
为单克隆抗体,应 明确免疫动物品系,杂交瘤细胞的制备、
细胞的培养及抗体的收集、纯化过程。
3.
主要原材料的质量控制标准
主要原材料的质量控制标准是生产企业对主 要原材料的
质量控制,生产企业应依据质量控制标准对原材料进行检验,
检验合格方可用于生产 。申请人应依据产品生产需求,制定
科学、合理的主要原材料质量控制标准,在制定标准过程中
建议遵循以下几点:
(
2
)
主要原材料的质量控制标准应包括相应 试验方法及
原材料应达到的客观评价标准。
(
3
)
主要原 材料的质量控制标准,
应至少包括原材料的
功能性指标要求,功能性指标可以为功能性实验指标 或其他
体现原材料相应生物活性的指标。
(
4
)
人源或其 他生物源性原材料质量控制标准中应包含
生物安全性指标。
(
5
) 对于涉及标记的主要原材料,如外购方提供的为
已标记好的原材料,则原材料质量控制标准除了对原材料 本
身的质量控制外,还应依据标记物特性,针对标记物制定相
应的质量控制标准。
< br>(
6
)质控品、定标液
/
对照品,主要原材料质量控制标
准除 被分析物外,还应包含基质的质量控制标准,例如基质
中被分析物的浓度要求、阴阳性要求及生物安全性 指标(如
适用),质控品应明确赋值方法。
本指南涉及的主要原材料常见的质量控制 指标见表
2
。
申请人可根据产品生产及质量控制需求,针对主要原材料制
定合 理的控制标准。申请人需在申报资料中提供依据主要原
材料的质量控制标准对原材料进行质检的资料,如 主要原材
料为外购,还需提供主要原材料供应商的出厂检测报告。
表
2.
主要原材料质量控制指标
序号
1
2
3
主要原材料类别
抗原
抗体
标记用酶
质量控制指标
外观、蛋白浓度、纯度、分子量及功能性实验等
外观、蛋白浓度、纯度、分子量、效价及功能性实验等
酶的纯度值(
RZ
值)以及功能性实验
4.
企业参考品
申请人应详细说明企业参考品的原料选择、制备、阴阳
性确认等试验。
企业 参考品的基质建议与申报产品适用的样本类型一
致。企业参考品应至少包括:阳性参考品、阴性参考品、 检
测限参考品、精密度参考品。参考品设置建议参考国家参考
品,阳性参考品应着重考虑抗体滴 度要求,阴性参考品则主
要涉及对分析特异性(交叉反应)的验证情况。
(三)主要生产工艺及反应体系的研究资料
1.
主要生产工艺介绍,可用流 程图方式表示,并简要说
明主要生产工艺的确定依据。
2.
产品基本反应原 理介绍,
HBeAg
检测试剂一般采用双
抗体夹心法,抗
-HBe
检 测试剂
一般为竞争法。
3.
申请人应提供产品生产工艺确定的研究资料,如 :包
被工艺、标记工艺、显色(发光)系统等研究资料。
4.
反应条件确定 :申请人应考虑反应时间、反应温度、
洗涤次数等条件对产品性能的影响,通过实验确定上述条件
的最佳组合。如涉及,申请人应提供酶催化底物(发光或变
色)的最适条件研究。
5.
体系中样品加样方式及加样量确定:申请人应考虑样
品加样方式、加样量对产品检测结果的 影响,通过实验确定
最佳的加样方式及加样量。如样本需采取稀释或其他必要的
方法进行处理后 方可用于最终检测,申请人还应对可用于样
本稀释的基质或处理方法进行研究,通过实验确定最终选择< br>的用于样本稀释的基质或处理方法。
6.
不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。
(四)分析性能评估资料
申请人应提交产品所有性能评价的研究资料,对于每项
分析性能的评价都应包括具体研究目的、 实验方法、可接受
标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证
的背景信息也应在 申报资料中有所体现,包括实验地点、适
用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等。
分析性能评价的实验方法可以参考国际或国内有关体
外诊断试剂性能评估的指导原则进行。对于此类产 品,性能
评估中所用样品(除非特别说明)可参考上述企业参考品的
制备要求。各项性能评价应 符合以下要求。
1.
最低检测限(分析灵敏度)
申报产品最低检测限的性能评估资料应包含最低检测
限的确定及验证过程。
(
1
)选取至少
3
份高浓度临床样本,采用临床参考方法
或国家/
国际标准品对其检测靶物质浓度进行确定,
之后将临
床样本做系列倍比稀释,将 检测结果的阳性率在
90%
~
95%
(
n
≥
20< br>)的最大稀释倍数
/
度作为试剂盒的最低检测限。
(
2)申报产品检测企业最低检测限参考品,检测结果
应满足相应要求。
2.
阴
/
阳性参考品符合率
申请人应考察申报产品检测企 业阴
/
阳性参考品的符合
情况,阳性参考品重在评估产品包容性,阳性参考品检测结< br>果应为阳性。阴性参考品旨在评价试剂特异性,阴性参考品
检测结果应为阴性。
3.
精密度
企业应对申报产品精密度指标,如标准差或变异系数等
的评价标准做出合理要求。因模拟样本并不能体现临床样本
可能带来的所有变异因素,因此精密度评价中 所用样本应至
少包含精密度参考品及若干临床样本。针对本类产品的精密
度评价主要包括以下要 求:
(
1
)对可能影响检测精密度的主要变量进行验证,除
检测试 剂本身的影响外,
还应对分析仪、
操作者、
实验地点、
检测批次等要素进行相 关的验证。
(
2
)设定合理的精密度评价周期,例如:为期至少
2 0
天
的检测,每天至少由
2
人完成不少于
2
次的完整检测, 从而对
批内
/
批间、日内
/
日间以及不同操作者之间的精密度进行综
合评价。
(
3
)用于精密度评价的临床样本均应至少包含
3
个水
平:临界阳性样品、(中或强)阳性样品,并根据产品特性
设定适当的精密度要 求。
4.
分析特异性
(
1
)交叉反应:
申请人应针对可能出现在检测样本中的病原体进 行交
叉反应验证,用于交叉反应验证的样品,除乙型肝炎病毒相
关标志物外,评估
< br>HBeAg
检测试剂交叉反应的样本应尽量
采用灭活病原体培养物或临床相关病原体抗原 阳性样本;评
估抗
-HBe
检测试剂
交叉反应的样本应尽量采用临床相关病< br>原体抗体阳性样本。
病原体种类应包括人类
EB
病毒
(
EBV
)
、
巨细胞病毒(
CMV
)、人类免疫缺陷病毒(
HIV< br>)、乙型肝炎
病毒
(表面抗原
/
抗体、
核心抗体)
、
丙型肝炎病毒
(
HCV
)
、
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