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乙型肝炎病毒e抗原、e抗体检测试剂注册技术审查指导原则

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-21 21:28

炉火纯青是什么意思-

2021年1月21日发(作者:娄世棠)
乙型肝炎病毒
e
抗原、
e
抗体检测试剂注册
技术审查指导原 则

(征求意见稿)


本指导原则旨在指导注册申请人对乙型肝炎 病毒
e
抗原、
e
抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。

本指导原则是针对乙型肝炎病毒
e
抗原、
e
抗体检测试
剂的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,
并依据产品的具体特性对注册申报资料的 内容进行充实和
细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件,
不涉及注册审批等行政事项,亦不作为法规强制执行,如有
能够满足法规要求的其他方法,也可以采用 ,但应提供详细
的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本
指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下
制定的,
随着法规、
标 准的不断完善和科学技术的不断发展,
本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、范围

(一)背景简介

乙型肝炎病毒(
hepatitis B virus

HBV
)属嗜肝
DNA

毒科,

是乙型病毒性肝炎的病原体。
HBV
主要经血(如不
安全注射等)

母婴及性接触传播。
HBV
感染呈世界性流行,
但不同地区
HBV
感染的流行强度差异很大。
据世界卫 生组织
报道,
全球约
20
亿人曾感染
HBV

其中
2.4
亿人为慢性
HBV
感染者,
每年约有
65
万人死于
HBV
感染所致的肝功能衰竭、
肝硬化和肝细胞癌(
HCC
)。

通过免疫学方法检测
HBV
标志物是临床最常用的
HBV感染的病原学诊断方法。
HBV
具有三个抗原系统,
如:
HBsAg与抗
-HBs

HBeAg
与抗
-HBe


-HBc
及其抗
-HBc-IgM
检测等。
HBV
抗原与抗 体的血清学标志物与临床关系复杂,必须对几
项标志物综合分析,方有助于临床诊疗。

乙型肝炎病毒
e
抗原是从病毒
C
基因的第一个起始密码
子开始翻译 产生的包含
Pre
C

C
序列的蛋白,该蛋白经细
胞内蛋 白酶切除其
N

19
个氨基酸及
C

34
个氨基酸后成
为可分泌的
e
抗原。
HBeAg
为可溶性蛋白质,产生 后分泌入
血。它是在症状出现后大约
1
周出现,通常在几周后消失,

HBV
慢性感染者可能持续存在。血清
HBeAg

HBV
复制< br>及
疾病
传染性相关,在
HBsAg
阳性人群中,
HBeAg< br>的消失以
及抗
-HBe
的出现是血清学转换的标志,这与
HBV
复制和传
染性相对减弱相关。
e
抗原的血清学转换在临床治疗、预后
判断过 程中具有重要的意义。

近年来发现在一部分感染者中,
HBV
发生了在
Pre
C

的基因突变,
导致
HBeAg
不能合成或合成量降低,
从而出现< br>了患者血清
HBeAg
检测结果为阴性,但
HBV
DNA
仍在显著
复制的情况。

(二)本指导原则适用范围

1.
本指导原则适用于利用酶联免疫法、化学发光法、时
间分辨免疫荧光法等免疫学方 法,对来源于血清或血浆等人
体样本中的
HBeAg
、抗
-HBe
进 行体外检测,其临床预期用途
如下:


1

HBeAg< br>适用于:急性及慢性乙型肝炎病毒感染的
的辅助诊断;
慢性乙型肝炎病毒患者
H BeAg
阳性与阴性人群
区分;慢性乙型肝炎患者
HBeAg
血清学转换的 判定;慢性
乙肝病毒携带孕妇及产褥期产妇的检测。该指标定量检测可
用于抗病毒疗效的监测等 。


2
)抗
-HBe
适用于:急性及慢性乙型肝炎病毒感 染的
的辅助诊断及慢性乙型肝炎患者
HBeAg
血清学转换的判定。
目前相关文献尚未阐明该标志物定量检测的临床意义。

3.
本指南适用于检测
HBeAg


-HBe
的定性检测 试剂,
关于
HBeAg
的定量检测可参考本指南。

二、注册申报资料要求

(一)综述资料

综述资料主要包括产品预 期用途、产品描述、有关生物
安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及其
他等内 容。其中,与预期用途相关的临床适应症应重点描述
申报产品临床预期用途
,
包括适用 人群、
适应症及临床使用环
境;产品描述应明确申报产品主要组成成分及检测原理;同
类产品在国内外批准上市的情况,应着重从预期用途、产品
性能等方面写明拟申报产品与目前市场上已获 批准的同类
产品之间的主要区别。综述资料的撰写应符合《体外诊断试
剂注册管理办法》(国家 食品药品监督管理总局令第
5
号)
和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准 证明文
件格式的公告》
(国家食品药品监督管理总局公告
2014
年第
44
号)的相关要求。

(二)主要原材料研究资料

1.
主要原材料的范围

体外诊断试剂产品主要原材料是指影响检测反应的灵
敏度与特异性的生物活性物质,本指南涉及产品的主要原材
料如下
:
1

HBeAg
检测试剂:包被用抗
-HBe
,标记用抗
-HBe
抗体,反应体系中各种信号放大、显示系统中涉及的生物活
性物质,试剂盒中包含的 定标液
/
对照品(如涉及)
、质控品
(如涉及)等。

(< br>2
)抗
-HBe
检测试剂
:包被用抗
-HBe
抗体, 标记用抗
-HBe
抗体,
乙型肝炎病毒
e
抗原,
反应体系中 各种信号放大、
显示系统中涉及的生物活性物质,试剂盒中包含的定标液
/
对照品(如 涉及)、质控品(如涉及)等。

2.
主要原材料的筛选

申请人应 提供主要原材料的筛选过程及相关研究资料。
主要原材料的筛选过程应有科学合理的实验设计、完整的实
验过程、详实的实验数据及统计分析过程,申请人应能够依
据研究过程确定产品的主要原材料。


1

如主要原材料为外购,
应确定供应商名称,
供应商
应为原材料的生产商,
供应商应固定,
不得随意更换。
同时,
抗原应明确抗原名称、生物学来源;抗体明确抗体名称、生
物学来源、刺激免疫原名称及其来源(天然 或重组)、克隆
号(如为单克隆抗体)等信息。


2

如 主要原材料为申请人自制,
生产企业应明确原材
料的制备原理,描述制备过程。如抗原为天然抗 原,应明确
抗原制备所选病毒毒株、病毒的培养、抗原提取及纯化、抗
原鉴定等方法及相关参数 ;如为重组抗原,则应写明目的基
因的选择及来源、
基因克隆过程
(如特定脱氧核糖核 酸

DNA

分子的体外处理、重组连接、转化和宿主细胞繁殖等实验过程)、抗原表达及抗原纯化鉴定等方法及相关参数。针对主
要原材料抗体,应明确免疫刺激原的名称 及来源。如为多克
隆抗体,应明确免疫动物品系及抗体的收集、纯化过程;如
为单克隆抗体,应 明确免疫动物品系,杂交瘤细胞的制备、
细胞的培养及抗体的收集、纯化过程。

3.
主要原材料的质量控制标准

主要原材料的质量控制标准是生产企业对主 要原材料的
质量控制,生产企业应依据质量控制标准对原材料进行检验,
检验合格方可用于生产 。申请人应依据产品生产需求,制定
科学、合理的主要原材料质量控制标准,在制定标准过程中
建议遵循以下几点:


2

主要原材料的质量控制标准应包括相应 试验方法及
原材料应达到的客观评价标准。


3

主要原 材料的质量控制标准,
应至少包括原材料的
功能性指标要求,功能性指标可以为功能性实验指标 或其他
体现原材料相应生物活性的指标。


4

人源或其 他生物源性原材料质量控制标准中应包含
生物安全性指标。


5
) 对于涉及标记的主要原材料,如外购方提供的为
已标记好的原材料,则原材料质量控制标准除了对原材料 本
身的质量控制外,还应依据标记物特性,针对标记物制定相
应的质量控制标准。
< br>(
6
)质控品、定标液
/
对照品,主要原材料质量控制标
准除 被分析物外,还应包含基质的质量控制标准,例如基质
中被分析物的浓度要求、阴阳性要求及生物安全性 指标(如
适用),质控品应明确赋值方法。

本指南涉及的主要原材料常见的质量控制 指标见表
2

申请人可根据产品生产及质量控制需求,针对主要原材料制
定合 理的控制标准。申请人需在申报资料中提供依据主要原
材料的质量控制标准对原材料进行质检的资料,如 主要原材
料为外购,还需提供主要原材料供应商的出厂检测报告。



2.
主要原材料质量控制指标

序号

1
2
3
主要原材料类别

抗原

抗体

标记用酶

质量控制指标

外观、蛋白浓度、纯度、分子量及功能性实验等

外观、蛋白浓度、纯度、分子量、效价及功能性实验等

酶的纯度值(
RZ
值)以及功能性实验


4.
企业参考品

申请人应详细说明企业参考品的原料选择、制备、阴阳
性确认等试验。

企业 参考品的基质建议与申报产品适用的样本类型一
致。企业参考品应至少包括:阳性参考品、阴性参考品、 检
测限参考品、精密度参考品。参考品设置建议参考国家参考
品,阳性参考品应着重考虑抗体滴 度要求,阴性参考品则主
要涉及对分析特异性(交叉反应)的验证情况。

(三)主要生产工艺及反应体系的研究资料

1.
主要生产工艺介绍,可用流 程图方式表示,并简要说
明主要生产工艺的确定依据。

2.
产品基本反应原 理介绍,
HBeAg
检测试剂一般采用双
抗体夹心法,抗
-HBe
检 测试剂
一般为竞争法。

3.
申请人应提供产品生产工艺确定的研究资料,如 :包
被工艺、标记工艺、显色(发光)系统等研究资料。

4.
反应条件确定 :申请人应考虑反应时间、反应温度、
洗涤次数等条件对产品性能的影响,通过实验确定上述条件
的最佳组合。如涉及,申请人应提供酶催化底物(发光或变
色)的最适条件研究。

5.
体系中样品加样方式及加样量确定:申请人应考虑样
品加样方式、加样量对产品检测结果的 影响,通过实验确定
最佳的加样方式及加样量。如样本需采取稀释或其他必要的
方法进行处理后 方可用于最终检测,申请人还应对可用于样
本稀释的基质或处理方法进行研究,通过实验确定最终选择< br>的用于样本稀释的基质或处理方法。

6.
不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。

(四)分析性能评估资料

申请人应提交产品所有性能评价的研究资料,对于每项
分析性能的评价都应包括具体研究目的、 实验方法、可接受
标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证
的背景信息也应在 申报资料中有所体现,包括实验地点、适
用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等。

分析性能评价的实验方法可以参考国际或国内有关体
外诊断试剂性能评估的指导原则进行。对于此类产 品,性能
评估中所用样品(除非特别说明)可参考上述企业参考品的
制备要求。各项性能评价应 符合以下要求。

1.
最低检测限(分析灵敏度)

申报产品最低检测限的性能评估资料应包含最低检测
限的确定及验证过程。


1
)选取至少
3
份高浓度临床样本,采用临床参考方法
或国家/
国际标准品对其检测靶物质浓度进行确定,
之后将临
床样本做系列倍比稀释,将 检测结果的阳性率在
90%

95%

n

20< br>)的最大稀释倍数
/
度作为试剂盒的最低检测限。


2)申报产品检测企业最低检测限参考品,检测结果
应满足相应要求。

2.

/
阳性参考品符合率

申请人应考察申报产品检测企 业阴
/
阳性参考品的符合
情况,阳性参考品重在评估产品包容性,阳性参考品检测结< br>果应为阳性。阴性参考品旨在评价试剂特异性,阴性参考品
检测结果应为阴性。

3.
精密度

企业应对申报产品精密度指标,如标准差或变异系数等
的评价标准做出合理要求。因模拟样本并不能体现临床样本
可能带来的所有变异因素,因此精密度评价中 所用样本应至
少包含精密度参考品及若干临床样本。针对本类产品的精密
度评价主要包括以下要 求:


1
)对可能影响检测精密度的主要变量进行验证,除
检测试 剂本身的影响外,
还应对分析仪、
操作者、
实验地点、
检测批次等要素进行相 关的验证。


2
)设定合理的精密度评价周期,例如:为期至少
2 0

的检测,每天至少由
2
人完成不少于
2
次的完整检测, 从而对
批内
/
批间、日内
/
日间以及不同操作者之间的精密度进行综
合评价。


3
)用于精密度评价的临床样本均应至少包含
3
个水
平:临界阳性样品、(中或强)阳性样品,并根据产品特性
设定适当的精密度要 求。

4.
分析特异性


1
)交叉反应:

申请人应针对可能出现在检测样本中的病原体进 行交
叉反应验证,用于交叉反应验证的样品,除乙型肝炎病毒相
关标志物外,评估
< br>HBeAg
检测试剂交叉反应的样本应尽量
采用灭活病原体培养物或临床相关病原体抗原 阳性样本;评
估抗
-HBe
检测试剂
交叉反应的样本应尽量采用临床相关病< br>原体抗体阳性样本。
病原体种类应包括人类
EB
病毒

EBV


巨细胞病毒(
CMV
)、人类免疫缺陷病毒(
HIV< br>)、乙型肝炎
病毒
(表面抗原
/
抗体、
核心抗体)

丙型肝炎病毒

HCV

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