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博士硕士研究生入学考试-细胞生物学-简答论述及参考答案

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-21 05:51

类似小时代的电影-

2021年1月21日发(作者:唐虽)
1.
简述酵母双杂交系统原理及应用

答:酵母双杂交系统(
yeast two-hybrid system
)是在酵母 体内分析蛋白质
-
蛋白质相互作用
的基因系统,
也是一个基于转录因子模块结 构的遗传学方法。
酵母双杂交系统的建立得力于
对真核细胞调控转录起始过程的认识。
许多真核生物的转录激活因子都是由两个可以分开的、
功能上相互独立的结构域
(domain )
组成的。例如,酵母的转录激活因子
GAL4
,在
N
端有一
个由
147
个氨基酸组成的
DNA
结合域
(DNA binding domain,BD)

C
端有一个由
113
个氨 基
酸组成的转录激活域
(transcription activation domain ,AD)

GAL4
分子的
DNA
结合域可以和
上游激活序 列
(upstream activating sequence

UAS)
结合,
而转录激活域则能激活
UAS
下游的
基因进行转录。但是,单独的< br>DNA
结合域不能激活基因转录,单独的转录激活域也不能激

UAS
的下游基因,它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的
功能。酵母双杂交系统 正是利用了
GAL4
的功能特点,通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的
相互结合及对报告 基因的转录激活来捕获新的蛋白质。



siRNA

ds RNA

shRNA
的区别和联系

答:
miRNA

siRNA

dsRNA

shRNA
都是
R NA
干扰技术中用到的小分子
RNA
,其不同
之处在
miRNA < br>是单链
RNA
,其余均为双链
RNA

siRNA

dsRNA
相似;
shRNA
需通过
载体导入细胞后,然后利用细胞 内的酶切机制得到
siRNA
而最终发挥

RNA
干扰作用。

3.
试述磷酸酰肌醇双信号通路的基本内容及功能

答:
在这一信号 转导途径中
,
膜受体与其相应的第一信使分子结合后,
激活膜上的
Gp
蛋白
(


G
蛋白
),
然后由
Gq蛋白激活磷酸脂酶
Cβ (phospholipase Cβ, PLC),
将膜上的 脂酰肌醇
4,5-
二磷酸
(phosphatidylinositol biphosphate, PIP2)
分解为两个细胞内的第二信使:二酰甘油
( diacylglycerol, DAG)

1,4,5-
三磷酸肌醇
(I P3)

IP3
动员细胞内钙库释放
Ca2+
到细胞质中与
钙调蛋白结合,随后参与一系列的反应;而
DAG

Ca2+
的协同下激活蛋 白激酶
C(protein
kinase C

PKC)
,然后通 过蛋白激酶
C
引起级联反应,进行细胞的应答
,
故此将该系统称为
PKC
系统
,
或称为
IP3

DAG

C a2+
信号通路。

静息状态时,
G
蛋白的
α
亚基 上结合的是
GDP
,所以没有活性,磷脂酶
C
也是处于非活性状态。第二信使
IP3/DAG
还是以前体
PIP2
存在。内质网上的
Ca
2+
离子配体闸门通道是关闭的,蛋白激酶
C
也是以可溶的非活性状态
存在于 细胞质中。

4.
简述细胞质基质的功能

答:
细胞质基质 是除去能分辨的细胞器和颗粒以外的细胞质中胶态的基底物质。
由水、
无机
盐、脂质、 糖类、氨基酸、核苷酸等组成。现又称细胞溶胶。其主要功能包括:
1.
活细胞进
行新 陈代谢的主要场所,其为新陈代谢的进行,提供所需要的物质,如酶;
2.
提供细胞器的
稳定微环境;
3.
影响细胞的形状。

5.
受体酪氨酸激酶通路的组成特点和功能

答:受体酪氨酸激酶
( RTKS)
是细胞表面一大类重要受体家族,当配体与受体结合,导致受
体二聚化,
激 活受体的酪氨酸蛋白激酶活性,
随即引起一系列磷酸化级联反应,
终至细胞生
理和基因 表达的改变。
RTK-Ras
信号通路是这类受体所介导的重要信号通路。其基本模式
为:配体→
RTK
→接头蛋白→
GEF

Ras

Raf (MAPKKK)

MAPKK

MAPK
→进入细胞核< br>→其他激酶或基因调控蛋白
(
转录因子
)
的磷酸化修饰,对基因表达产 生多种效应。
RTKS

号通路主要参与控制细胞生长、分化过程。
RTK- Ras
信号通路具有广泛的功能,包括调节
细胞的增殖分化,促进细胞存活,以及细胞代谢的调 节与校正。

6.
什么是非组蛋白?其结构特点和结构模式

非组蛋 白是指细胞核中组蛋白以外的酸性蛋白质。
非组蛋白不仅包括以
DNA
作为底物的酶,
也包括作用于组蛋白的一些酶
,
如组蛋白甲基化酶。此外还包括
DNA结合蛋白、组蛋白结
合蛋白和调节蛋白。非组蛋白能识别特异的
DNA
序列,识别 信息来源于
DNA
核苷酸序列
本身。
根据它们与
DNA
结合 的结构域不同,
其结构模式包括:
螺旋
-
转角
-
螺旋模式< br>(
HTH


锌指模式、亮氨酸拉链模式(
ZIP
) 、螺旋
-

-
螺旋模式(
HLH
)、
HMG
框模式。

7.
细胞骨架特异性药物有哪些及应用

细胞松弛素< br>B
:切断微丝,结合在微丝正极阻抑肌动蛋白聚合,破坏微丝网络结构,并阻止
细胞运动 。鬼笔环肽:与微丝有强亲和作用,使肌动蛋白纤维稳定,防止微丝解聚。秋水仙
素:结合到未聚合的微 管蛋白二聚体上,
阻断微管蛋白组装成微管,可破坏纺锤体结构。是
细胞停留在分裂期,以加倍 染色体。紫杉醇:促进微管装配,并使已形成的微管稳定。

8.
论述叶绿体结构及功能

高等动物的叶绿体多呈凸透镜状或香蕉形,含量较多。
藻类植物通常只有一个巨大的叶绿体,
其形态有带状、螺旋状、星状等。由叶绿 体膜、类囊体和基质三部分组成。


9.

3
例说明细胞 蛋白质相互作用的实验方法,说明实验原理及应用

①免疫共沉淀是探测活体细胞内蛋白间的相 互作用的一门技术。
它的原理是当细胞在非变性
条件下被裂解时,
完整细胞内存在的许 多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。
如果
用蛋白
X
的抗体免疫沉淀
X
,那么与
X
在体内有相互作用的蛋白
Y
也能沉淀下来。< br>
首先
从细胞中提取蛋白质,获得蛋白提取液,并将其与抗体孵育,使抗体与蛋白
X
结合。将预
处理过的
protein G
琼脂糖珠(
Sepha rose
)加入到抗体与蛋白提取液的孵育液中反应,使抗
体与
protein G< br>结合。通过离心将琼脂糖珠沉降到管底,去除上清液,然后再用缓冲液将琼
脂糖珠冲洗数次,最后 用
western blot
(或
SDS-PAGE
)进行检测。

②荧光共振能量转移技术的原理是:
处于激活状态的供体,
可以将其本身的荧光传递到 与之
十分邻近(通常在
10 nm
之内)
的受体上。因此,如果用遗传突变 的绿色荧光蛋白(
GFP

或是合成的荧光染料标记蛋白质,
则可以通过荧光 体之间的能量传递来确定两蛋白质的相互
作用。这种方法较之上述的方法有两个优点:(
1)蛋白质之间的相互作用是发生在完整细
胞里,比较完整地反映了蛋白质在生理状态的活动。(2
)利用这种方法,可以观察到蛋白
质在细胞内的定位。


P ulldown
技术利用的是亲和层析技术以及特异的配体(如
GSH
或者镍)。以下 图为例,

GST
的基因与蛋白
X
的基因融合,表达出融合蛋白。将 该融合蛋白的溶液过带有
GSH
配体的层析柱,
那么这一融合蛋白就能结合在配体上,
然后将待测蛋白的溶液过柱,
并让其
与融合蛋白反应一段时间。


接着开始进行洗脱。如果待测蛋白与蛋白
X
无相互作用,那
么在开始清洗的时 候就会被洗下来;
如果在用洗脱液洗脱后才能在收集到的样品中发现待测
蛋白(以及蛋白
X
),说明待测蛋白与蛋白
X
可能有相互作用。

10.
细胞质膜的主要功能

①为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境②选 择性的物质运输并伴随着能量的转移③细
胞识别与信息传递④为多种酶类提供结合位点⑤介导细胞与细胞 、
细胞与基质之间的连接⑥
参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构⑦某些膜蛋白的异常与疾 病直接相关。

11.
蛋白质分选的类型及途径

蛋白质分选有两条 途径:
一条是在细胞质基质中完成多肽链的合成,
然后转运至膜围绕的细
胞器,如线粒 体
(
或叶绿体
)
、过氧化物酶体、细胞核及细胞质基质的特定部位;一条是蛋 白
质在糙面内质网上合成,
经高尔基体运至溶酶体、
细胞膜或分泌到细胞外。
包括四种类型
1

门控运输(
gated transport
): 如通过核孔复合体的运输。
2
、跨膜运输:蛋白质通过跨膜通
道进入目的地。如细胞质 中合成的蛋白质通过线粒体上的转位因子(
translocator
)进入线粒
体。
3
、膜泡运输(
vesicular transport
):被运输的物质 在内质网或高尔基体中加工成有被小
泡,选择性地运输到靶细胞器。
4
、细胞质基质中 的蛋白质的转运。

12.
溶酶体的功能

①清除功能:消化无用的 生物大分子、衰老细胞及细胞器,保持正常细胞的代谢与调控;②
防御功能:
识别并吞噬入侵的 病毒或细菌,
形成异噬溶酶体③正常的消化作用,
为细胞提供
营养④在分泌细胞中,< br>溶酶体往往参与调解分泌过程⑤受精过程中,
精子的顶体相当于特化
的溶酶体,内含多种 水解酶类⑥自噬死亡中的功能。

13.
核小体结构要点

①每个核小体单位包括
200 bp
左右的
DNA
链、一个组蛋白八 聚体及一分子组蛋白
H1
。②
组蛋白八聚体构成核小体的盘状核心结构。③
1 46 bp

DNA
分子超螺旋盘绕组蛋白八聚体
1.75
圈,组蛋 白
H1
在核心颗粒外结合额外
20 bpDNA
,锁住核小体
DNA
的进出端,起稳
定核小体的作用。
④相邻核小体之间以连接
DNA
相 连
(
典型长度
60 bp)

不同物种变化值为
0~80 bp

⑤组蛋白与
DNA
的相互作用是结构性的,
基本不依赖于核苷 酸的特异序列,
核小
体具有自组装的性质。⑥核小体在
DNA
分子中的形成部 位受诸多因素影响,核小体位置改
变可影响基因表达。

14.
核糖体中
rRNA
的作用

rRNA
与蛋白 质结合形成核糖体,
其功能是作为
mRNA
的支架,
使
mRNA分子在其上展开,
形成肽链

(肽链在内质网、高尔基体作用下盘区折叠加工修饰 成蛋白质,原核生物在细胞
质内完成)的合成。
rRNA
单独存在时不执行其功能,它 与多种蛋白质结合成核糖体,作为
蛋白质生物合成的“装配机”。

15.
凋亡的生物学特征及检测方式

细胞凋亡的生物学特征包括:细胞体积 缩小,
连接消失,
与周围的细胞脱离,细胞质密度增
加,
核质浓缩,
核膜核仁破碎,
胞膜有小泡状形成,
胞膜结构仍然完整,
最终形成凋亡小体。
细胞凋亡的检测方法包括:
细胞凋亡的形态学检测;
磷脂酰丝氨酸外翻分析;
线粒体膜 势能
(△ψ
mt

的检测;
DNA
片断化检测;
T UNEL
法检测

DNA
断裂的原位末端标记)

Casp ase-3
活性的检测等。

16.
什么是
RT- PCR
,影响

RT-PCR
效率的因素

逆转录
PCR(reverse transcription PCR)
或者称反转录
PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)

是聚合酶链式反应
(PCR)
的一种广泛应用的变形。在< br>RT-PCR
中,一条
RNA
链被逆转录成
为互补
DNA,再以此为模板通过
PCR
进行
DNA
扩增。影响

RT-PCR
效率的因素主要有温
度循环参数、引物引物设计、
DNA
聚合酶、
Mg2
+


结合蛋白的结构模式

蛋白 质结合
DNA
的结构域主要有
5
类:螺旋
-
转角
-
螺旋模式(
HTH
)、锌指模式、亮氨酸
拉链模式(
ZIP
)、螺旋
-

-
螺旋模式(
HLH
)、
HMG框模式
.
18.
分泌蛋白的在细胞内产生,修饰,分泌过程

首先细胞核中
DNA
转录成为
mRNA,mRNA
经过核孔进入细胞质
,
被细胞质中的核糖体发现
,
进入核糖体进行翻译
,
经过原料氨基 酸的合成为多肽
,
经过信号肽引导,核糖体附着在内质网

,
核糖体 合成的多肽进入内质网
,
被内质网上附着的大量的酶加工、剪切
,
内质网腔 膨大、
出芽形成具膜的小泡,
包裹着蛋白质转移到高尔基体,
把蛋白质输送到高尔基体 腔内,
做进
一步的加工。接着,高尔基体边缘突起形成小泡,把蛋白质包裹在小泡里,运输到细 胞膜,
小泡与细胞膜融合,把蛋白质释放到细胞外。

19.
以哺乳动物精子和卵子发生为例。简述减数分裂。

精子的发生是指从 精原细胞到产生精细胞的过程。
精子的形成过程:
哺乳动物的精子是在睾
丸中形成的。
睾丸里有许多极度弯曲的曲细精管。
曲细精管中含有大量的原始生殖细胞,

做精原细胞。
每个精原细胞中的染色体数目都与体细胞的相同。
当雄性动物性成熟以后,

丸里的一部分精原细胞就开始进行减数分裂,
经过两次连续的细胞分裂——减数第一次分裂
和减数第二次分裂,形成成熟的生殖细胞——精子。

在减数第一次分裂的分裂间期,
染色体进行复制,
成为初级精母细胞。
复制后的每条染色体
都含有两条姐妹染 色单体,
这两条姐妹染色单体并列在一起,
由同一个着丝点连接着。
分裂
期开 始后不久,
初级精母细胞中最显著的变化是原来分散存在的染色体进行配对。
配对的两
条染色体,形状和大小一般都相同,一条来自父方,一条来自母方,叫做同源染色体。同源
染色体两两配 对的现象就叫做联会。
联会后的每对同源染色体就含有四条染色单体,
叫做四
分体。< br>四分体中的非姐妹染色单体之间常发生交叉互换。
经过四分体期,
各对同源染色体排列在细胞的赤道板上,每条染色体的着丝点都附着在纺锤丝上。不久,
在纺锤丝牵引下,配
对的同源染色体彼此分离,
分别向细胞的两极移动,
成为新的两组染色体。
一个初级精 母细
胞分裂成了两个次级精母细胞。由于同源染色体相互分离,分别进入到不同的子细胞中去,
使得每个次级精母细胞只得到初级精母细胞中染色体总数的一半。
因此,
减数分裂过程中染色体数目的减半,
发生在减数第一次分裂中。
减数第一次分裂结束后,
紧接着进入 到减数第
二次分裂的分裂期。
在次级精母细胞中,
每条染色体的着丝点分开,
两条姐妹染色单体也随
着分开,成为两条染色体。在纺锤丝的牵引下,这两条染色体分别向细胞的两极移 动,
并且
随着细胞的分裂,
进入到两个子细胞中。
这样,
在减数第一 次分裂中形成的两个次级精母细
胞,经过减数第二次分裂,就形成了四个精细胞。
与初级精母细 胞相比,每个精细胞都含有
数目减半的染色体。精细胞再经过一系列复杂的形态变化,形成精子。

20.
简叙述细胞的有丝分裂及其调控


间期
:
完成
DNA
的复制和有关蛋白质的合成
.
前期
:
染色质转变为染色体
,
核摸解体
,
核仁消失
,
形成纺锤体
(
简称
:
膜仁消失显两体
)
中期< br>:
着丝点排列在赤道板的中央
,
染色体的数目最清晰
,
形态最 固定
(
简称
:
形定数清赤道板
)
后期
:
着丝点分裂
,
染色单体分离
,
在纺锤丝牵引下移向细胞两极
(
简称
:
点裂数加均分向两极
)
末期
:
染色体转变成染色 质
,
核摸重建
,
核仁出现
,
纺锤体解体

21.
试述细胞以哪些方式进行通讯
?
各方式之间有何不同
?
细胞以三种方式进行通讯:①

细胞通过分泌化学信号进行细胞间相互通讯,这是多细 胞生
物包括动物和植物最普遍采用的通讯方式;


细胞间接触性依赖的通讯 ,
细胞间直接接触,
通过与质膜结合的信号分子影响其他细胞;③

细胞间形成间隙连接使细胞质相互沟通,通
过交换小分子来实现代谢偶联或电偶联。

22.
细胞连接有哪几种类型,各有何功能?

细胞连接的类型:㈠封闭连接 :紧密连接;㈡锚定连接:
1
、与中间纤维相关的锚定连接:
桥粒和半桥粒;
2
、与肌动蛋白纤维相关的锚定连接:粘合带和粘合斑;㈢通讯连接:间隙
连接。

紧密连接是封闭连接的主要形式,
是指相邻细胞质膜直接紧密地连接在一起,
能阻止溶 液中
的分子特别是大分子沿着细胞间的缝隙渗入体内,
维持细胞一个稳定的内环境。
紧 密连接具
有:
1
、形成渗漏屏障,起重要的封闭作用;
2
、隔离作用 ,使游离端与基底面质膜上的膜蛋
白行使各自不同的膜功能;
3
、支持功能。

桥粒:位于粘合带下方。是细胞间形成的钮扣式的连接结构,跨膜蛋白(钙粘素)通过附着
蛋白 (致密斑)与中间纤维相联系,提供细胞内中间纤维的锚定位点。中间纤维横贯细胞,
形成网状结构,< br>同时还通过桥粒与相邻细胞连成一体,
形成整体网络,
起支持和抵抗外界压
力与 张力的作用。
半桥粒相当于半个桥粒,
但其功能和化学组成与桥粒不同。
它通过细胞质
膜上的膜蛋白整合素将上皮细胞锚定在基底膜上
,
在半桥粒中,中间纤维不是穿过而 是终止
于半桥粒的致密斑内。
存在于上皮组织基底层细胞靠近基底膜处,
防止机械力造 成细胞与基
膜脱离。

粘合带:又称带状桥粒,
位于紧密连接下方,
相邻细胞间形成一个连续的带状连接结构,跨
膜蛋白通过微丝束间接将组织连接在一起,提高组织的机 械张力。

粘合斑:
细胞通过肌动蛋白纤维和整联蛋白与细胞外基质之间的连接方式 ,
微丝束通过附着
蛋白锚定在连接部位的跨膜蛋白上。
存在于某些细胞的基底,
呈局限性斑状。
其形成对细胞
迁移是不可缺少的。体外培养的细胞常通过粘着斑粘附于培养皿 上。

间隙连接:
是动物细胞间最普遍的细胞连接,
是在相互接触的细胞之 间建立的有孔道的连接
结构,允许无机离子及水溶性小分子物质从中通过,从而沟通细胞达到代谢与功能 的统
一。

间隙连接在代谢偶联中的作用:使代谢物(如氨基酸、葡萄糖、核苷酸、维 生素等)
及第二信使(
cAMP

Ca2+
等)直接在细胞之间流通 。间隙连接在神经冲动信息传递过程中
的作用:
在由具有电兴奋性的细胞构成的组织中,
通过间隙连接建立的电偶联对其功能的协
调一致具有重要作用。
间隙连接在早期胚胎发育和细 胞分化过程中具有重要;
间隙连接对细
胞增殖的控制也有一定作用。

23.
简述内质网的结构和功能

内质网膜约占细胞总膜面积的一半,
是真核细胞中最多的膜。
内质网是内膜构成的封闭的网
状管道系统。
具有高度的多型 性。
可分为粗面型内质网

rough endoplasmic reticulum

RER

和光面型内质网(
smooth endoplasmic reticulum

SER
)两类。内质网的主要功能包 括:蛋
白质的合成与转运(粗面内质网);蛋白质的加工(如糖基化);脂类代谢与糖类代谢(滑
面内质网);解毒作用(滑面内质网上有分解毒物的酶。

24.
核糖体上的功能位点及在蛋白质翻译中的功能?

核糖体上存在四个活性部位
,
在蛋白质合成中各有专一的识别作用。

1.A
部位
:
氨基酸部位或
受位
:
主要在大亚基上
,
是接受氨酰基
-tRNA
的部位。

2.P
部位
:
肽基部位或供位
:
主要在小亚
基上
,
是释放
t RNA
的部位。

3.
肽基转移酶部位
(
肽合成酶
),
简称
T
因子
:
位于大亚基上
,
催化氨
基酸间形成肽键
,
使肽链延长。


酶部位
:
即转位 酶
,
简称
G
因子
,

GTP
具有活性,
催化
肽键从供体部位→受体部位。

25.
线粒体在细胞凋亡中的作用?

在细胞凋亡的过程中
,
线粒体起着主要的作用。线粒体外膜
(OMM)
上的
VDAC2ANT
复合 物
是线粒体通透性转换孔
(PTP)
的主要成分
,
调节着膜两侧的电 位
,
是线粒体凋亡蛋白释放的主
要通道。线粒体中细胞色素
C(CytC)< br>的释放可通过一种新的通道

MAC
直接进入胞质
,
而且
OMM
的结构不发
< br>生破裂。另外
,
其他因子诸如
Bcl22
族因子、
CytC< br>、
AIF
等能够直接或间
接地调节
PTP
或线粒体凋亡通道< br>(MAC),
令线粒体的通透性改变
,
将各种促凋亡因子释放
,

而激活
caspase
的水解反应
,
诱导细胞的凋亡。

26.
氧化磷酸化偶联机制的化学渗透假说的主要论点和证据?

化学渗透假 说主要论点:
电子传递链各组分在线粒体内膜中不对称分布,
当高能电子沿其传
递时, 所释放的能量将
H+
从基质泵到膜间隙,形成
H+
电化学梯度。在这个梯度驱 使下,
H+
穿过
ATP
合成酶回到基质,同时合成
ATP
, 电化学梯度中蕴藏的能量储存到
ATP
高能
磷酸键。实验证据:质子动力势乃
ATP
合成的动力;膜应具有完整性;电子传递与
ATP

成是两件相关而又 不同的事件。

27.
细胞周期主要有几个检查点(
checkpoint< br>)
?
与细胞癌变有何关系?常用什么方法检测细
胞周期异常

细胞周期细胞周期检查点


checkpoint
)是细胞周期(
cell cycle
)中 的一套保证
DNA
复制
和染色体(
chromosome
)分配质量 的检查机制,是一类负反馈调节机制.当细胞周期进程
中出现异常事件,如
DNA
损伤 或
DNA
复制受阻时,这类调节机制就被激活,及时地中断
细胞周期的运行.待细胞修 复或排除故障后,细胞周期才能恢复运转.

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