试管婴儿畸形概率高吗实验五 凝集反应—医学免疫学实验指导

2021年1月20日发(作者：试管取卵之前可以吃花甲吗)










医学免疫学实验指导

实验五凝集反应

由长沙达尔锋生物科技有限公司整理





【文章介绍】

实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段 。
BioRike
博瑞克根
据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了
14< br>个实验项目，每个实验说明实验目的，实验
原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大 师生能够从中有所收获。

BioRike
简介：
BioRike
（ 中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品
品牌
,
由旗下专业的 生命科学实验室
BioRike
博瑞克研发和生产。
BioRike
是一家致 力于生命
科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以
Elisa
试剂盒、抗体、 细胞因子、免疫检
测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验目的】

1.
了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。

2.
熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。

【实验用品】

1.
材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌
18
～
24
小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌
H
血清、伤寒杆
菌
H
菌液、待测孕妇尿液、
HCG
阳性孕妇尿液、
1:10
稀释伤寒杆菌 诊断血清、
ABO
血型标
准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性
IgG
致敏的乳胶颗粒）、
HCG
致敏乳胶试剂、兔抗
HCG
诊断血清、待测血清 、生理盐水。

2.
器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种 铅笔（或记号笔）、小
试管、牙签、采血针、
75%
酒精棉球、无菌干棉球、试管架；
1ml
、
5ml
刻度吸管、
37
℃恒
温箱（或37
℃
/56
℃水浴箱）、显微镜。

【内容和方法】

一、玻片凝集试验
(slide agglutination)
1.
原理

玻片凝集试验
(slide agglutinatio n)
是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质
(
如细菌、立
克次体、钩端 螺旋体等
)
混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结
合而形成 肉眼可见的凝集物，即为阳性；
如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属
定性试验，主 要用于检测抗原，如
ABO
血型鉴定、细菌鉴定和分型等。

2.
方法

（
1
）取载玻片一张（平置实验台上），用特种 铅笔或记号笔划分为
3
格，并标明
1
、
2
、
3。

（
2
）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取
1:10
稀释的伤寒杆菌诊断血清
1
～
2
滴于第
1
、
2
格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水
1
～
2
滴于第
3
格内。

（
3
）
将接种环在酒精 灯火焰上烧灼灭菌，
冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第
1
、
3
格内 的
诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第
2< br>格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。

3.
结果观察与判定

如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明，并出现大 小不等的乳白色凝集块者即为阳性
（＋）；如混合物仍呈均匀混浊状则为阴性（－）。如肉眼观察不够清 楚，可将玻片置于显
微镜下用低倍镜观察。

本次实验结果第
1
格 内应出现大小不等的乳白色凝集物（阳性），第
2
、
3
格内无凝集物，
混合液仍呈均匀混浊状（阴性）。

【注意事项】

（
1
）伤寒杆菌为肠道致病菌，在实验中务必严格无菌操作，遵守实验规则，用后的载玻片
应立即投入指定的 容器中，接种环必须做灭菌处理。

（
2
）取细菌培养物时，不宜过多，与抗 血清混合涂抹时，必须将细菌涂散，涂均匀，但不
宜涂得太宽，以免很快干涸而影响结果观察。

二、人类
ABO
血型鉴定试验（玻片法）

1.
原理

人类
ABO
血型抗原有
A
和< br>B
两种。
A
型红细胞膜上有
A
抗原，
B
型红 细胞上有
B
抗原，
AB
型有
A
和
B
两种抗 原，而
O
型则不含有
A
和
B
抗原。据此，如分别将抗
A
和抗
B
血清
与待测红细胞混合，抗
A
和／或抗
B
血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝
集，根据其凝集状况便可判定受试者的血 型（见表
5-1
）。


表
5-1



血型鉴定试验结果与判定

2.
方法

（
1
）用酒精棉球消毒无名指指端皮肤或耳垂，待酒精干后用无菌采血针刺破表皮，用毛细
吸管 取血
1
～
2
滴，
放入含
1m1
生理盐水的小试管 中，
混匀，
即成待检红细胞悬液
(
约
2
％
)
。
取血后，应立即用无菌干棉球压迫针眼止血。

（
2
）取凹玻片 或载玻片一张，用记号笔分为两格，并注明
A
、
B
字样。

（
3
）用巴氏吸管吸取抗
A
血清、抗
B
血清各一滴分别滴于
A
、
B
格内（也可用
2ml
的一次
性注射器代替巴 氏吸管）。

（
4
）另用巴氏吸管取待测
5%
红细胞悬液， 于
A
格和
B
格内各加一滴。然后分别用牙签将
抗血清与红细胞搅拌均 匀
(
也可轻轻晃动载玻片以促其充分混匀
)
，以加速其反应。将玻片放
置于实验台上静置数分钟后，在白色背景下观察凝集情况。

3.
结果观察与判定

如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为澄清，
并 出现大小不等的红色凝集块者即为红细胞凝集；
若混合液仍呈均匀混浊状，则表明红细胞未发生凝集。< br>
如肉眼观察不够清楚，可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。


不凝集（
-
）







凝集（
+
）

4.
注意事项

（
1
）试验用凹玻片或载玻片要清洁，注明
A
和
B
字佯。

（
2
）所用抗
A
、抗
B
血清必须在有效期内
(
注意试剂包装说明的有效期限
)
使用。

（
3
）待检红细胞悬液不宜过稀或过浓。

（
4
）要及时观察结果，以防时间过长使标本干涸而影响结果观察和判定。

三、试管凝集反应

1.
原理

试管凝集反应是一种定量试 验，
常用已知颗粒性抗原来检测未知抗体及其含量。
方法是用生
理盐水将待测血清在试 管中进行连续倍比稀释，
然后于各管中加入等量已知抗原悬液，
37
℃
过夜或
56
℃水浴
2
小时后，观察有无凝集并根据凝集程度，判定待检血清抗体的效 价。

本法主要用于某些传染病的辅助诊断及流行病学调查，
如伤寒、
副伤寒 及布氏杆菌病的诊断
等。

2.
方法

（
1
）取洁净小试管
8
只并依次排列于试管架上，用特种铅笔或记号笔按顺序注明号码。