试管bb生物化学实验项目

2021年1月20日发(作者：试管婴儿移植5次)
实验项目一

蛋白质等电点测定

【实验目的】


1
．验证蛋白质的两性电离和等电点。

2
．掌握测定酪蛋白等电点的原理和方法

【实验用品】


器材：试管、试管架、刻度吸管（
0.5
ml
、
1ml
、
5 ml
）
、吸耳球、记
号笔。

试剂：

1
．
0.01mol/L
乙酸

2
．
0.1mol/L
乙酸

3
．
1mol/L
乙酸

4
．
5g/L
酪蛋白乙酸钠溶液

称取纯酪蛋白
0.25
g
，加入蒸馏水
20
ml
及
1.0
mol/LNaOH
5ml
，
混合，
至酪蛋白完全 容易。
然后加入
1.0mol/L
乙酸
5 ml
，移入
50 ml
容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。

【实验原理】

蛋白质分子 中既含有酸性基团（如—
COOH
）
，又含有碱性基团（如—
NH
2
、胍基等）是两性化合物。这些基团在不同的
PH
值溶液中可发生酸式
电离或 碱式电离。
蛋白质在水溶液中的带电情况，
不仅取决于本身的结构，
还取决于溶液的< br>PH
值。调节溶液的
PH
值，可使蛋白质带有不同的电荷。

【实验方法】

取干净试管
5
支，编号后，按下表操作



试剂
1 2 3 4 5

蒸馏水
1.6
—
3.0 1.5 3.38
0.01mol/
乙酸
ml

—

—

—
2.5 0.62
0.1mol/L
乙酸
ml

—
4.0 1.0
—

—


1
1.0mol/L
乙酸

ml
2.4
—

—

—

—

5g/L
酪蛋白


乙酸钠溶液

ml
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
溶液
PH
值
3.2 4.1 4.7 5.3 5.3

沉淀结果


立即混合各管，静置
10
分钟，观察各管沉淀情况，结果用“
-
，< br>+
，
++
，
+++
”表示，并记录于表中。

【思考分析】

酪蛋白质的等电点是多少




















2
实验报告

实验名称


实验目的


实验用品


操作方法

实验时间

实验结果

结果分析及思考题

教师评语


3
【操作要求及考核标准】


考核

内容

素质

要求

操作

前

准备

分值

10
评价标准

工作衣帽穿戴整齐
--5
回答问题语言清晰流畅
--5
复习与实验有关的理论内容
--5
能简述出本次实验的名称、
操作要点、
预期结果
--5
称取纯酪蛋白
0.25
g
--5

加入蒸馏水
20
ml
及
1.0
mol/LNaOH
5ml
，混合，至
酪蛋白完全溶解。
--10
加入
1.0mol/L
乙酸
5
ml
，移入
50
ml
容量瓶中，
用蒸馏水稀释至刻度。
--10
取干净试管
5
支，编号加入各种试剂
--10
立即混合各管，静置
10
分钟，
观察各管沉淀情况，
记录于表中
--10
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案
--5
正确书写实验报告
--5
记录实验数据、分析实验结果
--10
正确回答实验指导中的问题
--5

清理实验物品、妥善处理废弃物—
5

消毒洗手—
5

100




10
操作

过程

及

实验

报告

70
操作

后

要求

合计

10

学生互评结果得分（乘以
0.3
系数）

教师评价结果得分（乘以
0.7
系数）

最后综合得分




4
实验项目二

温度、
pH
对酶促反应的影响

【实验目的】


通过观察不同的温度、
pH
条件下，唾液淀粉酶对淀粉的作用，了解
温度、< br>pH
对酶促反应的影响。

【实验原理】

唾液淀粉酶可催化 淀粉水解，
生成分子大小不同的糊精、
麦芽糖和少量葡
萄糖。由于在不同的温度、PH
条件下，淀粉酶的活性不同，使淀粉水解
的程度也不一样，因而遇碘后会产生不同的颜 色，
根据颜色的不同，可判
断淀粉水解的程度，从而了解温度、
PH
对酶活性 的影响。

淀粉

淀粉酶

糊精

淀粉酶

麦芽
+
葡萄糖

加碘液

（呈蓝色）

（呈紫色）

（呈黄色，为碘本身颜色）

【实验用品】






试剂：
1
、
1%
淀粉溶液

取可溶性淀粉
1g
，加
5mI
蒸馏水调至糊状，

再加蒸馏水
80mI
，加热使其溶解，然后加水至
100mI.

2
、稀碘溶液

取碘
2g
，碘化钾
4g
，溶于
1000mI
蒸馏水中，置棕
色瓶中贮存。

3
、缓冲液

（
1
）
pH3.0
缓冲液： 取
0.2mo/L
磷酸氢二钠溶液
205mI
，
0.1mo/L柠
檬酸溶液
795mI
，混合后即得。

（
2
）
pH8.0
缓冲液：取
0.2mo/L
磷酸氢二钠溶液
772mI
，
0.1mo/L
柠
檬酸溶液
228mI
，混合后即得。< br>
（
3
）
pH8.0
缓冲液：
取
0.2mo /L
磷酸氢二钠溶液
972mI,0.1mo/L
柠檬酸溶液
28mI
，
混合后即得。

器材

：

10mm
×
100mm
试管、试管架、蜡笔、恒温水浴、沸水浴、冰浴。

【实验方法】


稀释唾液制备：
用自来水漱口以清除口腔内的食物 残渣。
再含一口蒸馏水，
作咀嚼运动，
2
分钟后吐入小烧杯中，

然后用滤纸过滤后备用。温度对
酶促反应的影响

取
3
支试管编号，然后按下表操作。

管

号
pH6.8
缓冲液（滴）
1%
淀粉溶液（滴）

放入不同温度

1
20
10 37
水浴

2
20
10
沸水浴

3
20 10

冰浴

以上各管放置
5
分钟，各加入稀释唾液
5
滴，仍放回原处。

10
分钟后，在各管中加入稀释碘溶液
1
滴，观察各管颜色变化。


5
1.

pH
对酶促反应的影响

取
3
支试管编号，按下表操作。


管

号
pH3.0
缓冲
pH6.8
缓冲
pH8.0
缓冲
1%
淀粉溶

稀释唾液
（滴）

液（滴）

液（滴）

液（滴）

液（滴）


1
20

一

一

10 5
2
一
20
—
10 5
3
一

一
20 10 5
将各试管摇匀放入
37
0
C
水浴中保温。

10
分钟后，在各试管中加入稀碘液
1
滴，观察各试管颜色变化。

【注意事项】

注意不同人在不同的时间所釆集的唾液中唾液淀粉酶活性不同，
而使结果
有所差异，若想得到满意的结果，应事先确定稀释倍数。

【思考题】


说明温度、
pH
对酶促反应的影响？

















6
实验报告

实验名称


实验目的


实验时间

实验用品


操作方法

实验结果

结果分析及思考题

教师评语



7
【操作要求及考核标准】


考核

内容

素质

要求

操作

前

准备

分值

10
评价标准

工作衣帽穿戴整齐
--5
回答问题语言清晰流畅
--5
复习与实验有关的理论内容
--5
能简述出本次实验的名称、
操作要点、
预期结果
--5
试剂的配制
--10
稀释唾液制备
,
取试管编号
--10
观察各试管的颜色变化并准确记录
--10
随时分析实验中出现的问题，
并提出解决方案
—
10
操作步骤正确，动作熟练
--5
实验结果真实，出现预期结果
—
5
正确书写实验报告
--5
记录实验数据
--5
分析实验结果
--5
正确回答实验指导中的问题
--5

清理实验物品、妥善处理废弃物—
5

消毒洗手—
5

100


10
操作

过程

及

实验

报告

70
操作

后

要求

合计

10

学生互评结果得分（乘以
0.3
系数）

教师评价结果得分（乘以
0.7
系数）

最后综合得分





8
实验项目三


Vc
含量测定

【实验目的】


1.
学习定量测定维生素
C
的原理和方法；

2.
掌握滴定法的基本操作过程；

3.
了解并掌握青椒中维生素
C
的含量测定。

【实验用品】


试剂：
1
、
2%
草酸
.
2
、
2,6-
二氯酚靛酚
.

材料：
4g
青椒、三角瓶
.

【实验原理】
Vc
是人类营养中最重要的维生素之一。它分布广，绿色组织和水果含量
更为丰富，
V c
有强的还原性，碱性条件加热并有氧化剂存在时
Vc
易被
氧化破坏。 中性和酸性条件下，
Vc
能将
2,6-
二氯酚靛酚还原成无色的还
原 型
2,6-
二氯酚靛酚，同时
Vc
被氧化成脱氢
Vc
，因此 可用
2,6-
二氯酚
靛酚测样品中的
V c
含量。
V c< br>全部被氧化后，稍多加一点染料，使溶液
呈淡粉红色，即为终点。如无其它干扰，则消耗的染料与 样品中
Vc
含量
成正比。

【实验方法】



的提取：
4g
青椒（加
5ml2%
草酸，研磨成匀 浆）→转入
50ml
容
量瓶
（残渣用
2%
草酸提取
2
—
3
次）
→并入
50ml
容量瓶
（加
2 %
草酸
35ml
）
→用
1%
草酸定容到刻度→过滤或离心→ 滤液（清液）备用。

2.
空白滴定：取
20ml
空白液（加
35 ml2%
草酸，用
1%
草酸定容到
50
ml
）用
2,6-
二氯酚靛酚滴定。

3.
标准液 滴定，取标准
Vc
液
20ml2
—
3
份，置三角瓶中，用< br>2 .6-
二
氯酚靛酚滴定。

4.
样液滴定，取样液
20ml
各
2
份，置于三角瓶中，进行滴定。

【注意事项】

1.
终点的判定：
2,6-
二氯酚靛酚（兰 ）滴至样液（标准液）呈淡粉红
色，并保持
15
—
30
秒不褪色，即 这终点。

2.2,6-
二氯酚靛酚的体积一般在
1
—
4m l
之间，
Vc
含量高时，可稀释
或减少用量。

3.
滴定要迅速，不超过
2
分钟


9
【思考题】

试述
Vc
的功能？

实验报告

实验名称


实验目的


实验时间

实验用品


操作方法

实验结果

结果分析及思考题

教师评语


10
【操作要求及考核标准】


考核

内容

素质

要求

操作

前

准备

分值

10
评价标准

工作衣帽穿戴整齐
--5
回答问题语言清晰流畅
--5
复习与实验有关的理论内容
--5
能简述出本次实验的名称、
操作要点、
预期结果
--5
Vc
的提取—
10
空白滴定
--10
标准液滴定
—
10
样液滴定
—
10
操作步骤正确，动作熟练
--5
实验结果真实，出现预期结果
—
5
正确书写实验报告
--5
记录实验数据
--5
分析实验结果
--5
正确回答实验指导中的问题
--5

清理实验物品、妥善处理废弃物—
5

消毒洗手—
5

100


10
操作

过程

及

实验

报告

70
操作

后

要求

合计

10

学生互评结果得分（乘以
0.3
系数）

教师评价结果得分（乘以
0.7
系数）

最后综合得分





11
实验项目四


血糖测定

【实验目的】


了解葡萄糖氧化酶法定测定血清葡萄糖的原理、操作方法及临床意义。

【实验用品】


器材：试管及试管架、吸量管、水浴箱、
721
分光光度计。

试剂：

1
．
0.1mol/L
磷酸缓冲液（
p H7.0
）溶解无水磷酸氢二钠
8.67g
及无
水磷酸二氢钾
5.3 g
与
800ml
蒸馏水中，用
1mol/L
氢氧化钠或盐酸调节pH
至
7.0
，然后用蒸馏水稀释至
1L
。

2.
酶试剂

取葡萄糖氧化酶
1200
单位，过氧化物酶
1200
单位，
4-
氨基安替比林
10mg
，叠氮钠
100mg
，加上述磷酸缓冲液至
80ml
左右，调
节
pH
至
7.0
，加磷酸缓冲液至
100ml
。置冰箱保存，至少可稳定
3
个月。

3.
酚试剂

酚
100mg
溶于
100ml
蒸馏水中
（酚在空气中易氧化成红色，
可先配成
50 0g/L
的溶液，贮存与棕色瓶中，用时稀释）
。

4.
酶酚混合试剂

酶试剂及酚试剂等量混合，
在冰箱内可以存放一个
月。

5.
葡萄糖标准贮存液（
100mmol/L
）无水葡萄糖（预先置
80
℃烤箱 内
干燥恒重，移置于干燥器内保存）称取
1.802g
，以
12mmol/L
苯甲酸溶液
溶解并移入
100ml
容量瓶内，再以
12mmol/L
苯甲酸溶液稀释至
100ml
刻
度处，放置
2
小时后放可应 用。

6.
葡萄糖标准应用液
（
5mmol/L
）
吸取葡萄糖标准贮存液
5ml
，
于
100ml
容量瓶中，用
12mmol/L
苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【实验原理】

葡萄糖氧化酶（
glucose oxidase,GOD
）能催化葡萄糖氧化成葡萄 糖酸内
酯，并产生一分子过氧化氢。

GOD

葡萄糖
+ O2
葡萄糖酸内酶
+ H2O2

在过氧化物酶作用下，过氧化氢 分解，将无色的
4-
氨基安替比林偶
联酚，
氧化缩合生成红色的醌类化合物。
其颜色深浅在一定范围内与葡萄
糖浓度成正比。在
505nm
测定吸光度，与 标准管比较可计算血糖浓度。

【实验方法】


1
．取< br>3
支
16mm
×
10mm
试管，按表进行操作。





12