做试管子宫内膜要多厚MIC的测定(微量二倍稀释法)

2021年1月20日发(作者：试管卵子受精后还会有变数吗)
微量肉汤稀释法测
MIC
一、试验原理目的

细菌在
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孔板
MH
培养基中生长，
过段时间由于量大会产生白色沉淀，
很容< br>易区别有无菌落生长，
将抑菌剂依次对倍稀释，
加入菌悬液培养一段时间后，
无
沉淀的最后一个空即为
MIC
浓度。本试验微量样品即可测出最小抑菌浓度，且
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孔板占地少，
一板可做
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个试验梯度，
适用于大批量的检测 试验，
节约时间。

二、试验器材、化学试剂及菌种

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孔板、试管、
5uL-50uL
微量移液器、
100uL-1 000uL
微量移液器、以及配
套的枪头、
10mL
离心管、麦氏比浊管、超 净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、
生化培养箱、
MH
肉汤培养基、
PBS
缓冲液、无菌水。

菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌 、白喉棒
状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌

三、试验准备

1
、培养基的配置

MH
培养基
42g
，蒸馏水< br>1000ml
。灭菌后待用，若一次用不完可放入
4
℃冰
箱中放置。使 用前拿出放置室温即可。

2
、工器具的灭菌





将配置好的
MH
培养基、
PBS
缓冲液、无菌 水、配套枪头、离心管放入高
压灭菌锅中灭菌，
121
℃杀菌
25min。试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，
170
℃杀
菌
2h
。
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孔板在超洁净工作台上紫外杀菌
30min
以上。

2
、抑菌剂的配置

抗菌药物的溶解与稀释，
一般情况下，
水溶性抗菌药物采用灭菌蒸馏水溶解，
而对于不溶或者难溶于水的抗菌药物要根据其特性，采用甲醇，缓 冲液，
NaOH
溶液，
DMSO
溶液等，尽量将抗菌药物溶解后用蒸馏水或者 缓冲液稀释后，作
为抗菌药原液。

3.
、菌悬液的配置

从冰箱取出需要测试的菌种活化
0.5h
后，
加入
5mL
的
PBS
缓冲液将斜面上，
在手掌上轻轻振打
80
次，使菌株完全 冲下，倒入试管中轻轻摇匀。吸取
1mL
的
菌液加入到
4mL
的
PBS
缓冲液中，再吸取
1mL
稀释的菌悬液依次进行
5
倍 梯度