试管婴儿预防宫外孕菌种的分离与培养

2021年1月20日发(作者：试管促排针忘打了一天可以么)
菌种的分离与培养






在自然界 里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细
菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把
这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯
的优良菌种。菌种分母种、原种、栽 培种。


(
一）母种的分离培养


食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及
基内菌丝分离等。


1.
孢子分离法


孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子 萌发成菌
丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体
之间有差异，且自然分化现 象较严重，变异大，需经出菇试
验才能在生产上应用。


（
l
）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，

让
它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分
离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分 离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分
离法。


（
2
）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，
让它们 萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具
体操作方法，有以下几种：

< br>①种菇孢子弹射法：
选择个体健壮、
朵形圆正，
无病虫害、
出菇均匀、 高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去
大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱 脂
棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌
褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面 ，漏斗倒盖在培养皿上面；
上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，
静置< br>12
～
20
小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形
成一层粉末状 孢子印
（平菇极淡紫色，
蘑菇、
草菇

为褐色，
香菇、金针 菇孢子印白色）
。用接种针沾取少量孢子在试管
中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发 ，生成菌落
时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。

还可用孢子采集器收集 孢子。方法是选好种菇后，按上述程
序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢
丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟
掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水 。移入

20℃
左右恒温箱培养。


②褶上涂抹法：按无 菌操作分离时；应选择成熟的种菇，
用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未
弹射的孢子，再在培养基上划线接种。


③钩悬法：
取成熟菌盖的几片菌褶 或一小块耳片
（黑木耳、
毛木耳、白木耳〕
，用无菌不锈钢丝（或铁丝、棉线等其他< br>悬挂材料）悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培
养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、 转接即可。


④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块，
用
溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养
基正上方的试管壁上。经6
～
12
小时的培养，待孢子落在斜
面上，立即把孢子连同部分琼脂培养 基移植到新的试管中培
养即可。

孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种 定植一
星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老
化、
无感染杂茵的母 种试管，
进而转管扩大，
一般到栽培种，
转管不宜超过
5
次。


孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌
种后，才可供生产使用。


一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等，
都可用多孢分离法获得母种。


现就银耳孢子分离略述于下：


按无菌操作获取种耳后，
悬挂种耳的三角瓶经
12
小时培养
后，
瓶底培养基表面就有
'孢子印
'
。
取出种耳，
置

20℃—25℃
温 箱培养
2
～
3
天，培养基表面会出现乳白色透明的糊状小
菌落，就是 银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此
时移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移接入营 养
丰富，且表面比较干燥的培养基上。经
30
天左右，菌落长
出白色菌丝。< br>

银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌
（香灰菌丝）混合 培养时，由后者帮助分解木材及其他一些
纤维物质，提供营养，才能利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成。


在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。


羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长迅速，爬壁力强
的试管斜面或种瓶，
取先端菌丝，
转管移接，
置
25℃—28℃
上培养，重复转管几次即可得到 优良纯种。


银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子也不易萌发。在
进行 两菌混合时，先取经
8
～
IO
天培养的银耳菌丝斜面，按
无菌操作方 法在该斜面上距银耳菌丝约
0.5
厘米处接入一

小块羽毛状菌丝。
置
25℃下培养
1
周即得到混合好的银耳母
种。


2
．组织分离培养法

利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获得母种的简便 方法，
即组织分离。该法操作简便，菌丝生长发育快，品种特性易
保存下来，特别是杂交育种后 ，优良菌株用组织分离法能使
遗传特性稳定下来。常采用以下分离方法。


（
l
）子实体分离：种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟
的优良品种。切去菇两基部 ，在无菌箱内以
0.1
％的升汞水
浸几分钟，
再用无菌水冲洗并揩干或用75
％酒精棉球擦拭菌
盖与菌柄
2
次，进行表面消毒。接种时，只要将种 菇撕开，
在萌盖和菌柄交界处或菌褶处，挑取一小块组织；移接

到
PDA< br>培养基上。置
25℃左右温度下培养
3-5
天，就可以看
到组织上产生 白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香
菇、平菇等可以用此方法。


（
2
）
菌核分离：
茯苓、
猪苓、
雷丸等菌的子实体不易采集 。
而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分离，同样可以获得
菌种。方法是将菌核表面洗净，用 酒精或升汞消毒后，切开
菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在
PDA
培养
基斜面上，保温培养。应注意的是，菌核是贮藏器官，大部
分是多糖类物质，只含有少量的菌丝 ，因此挑取的组织块要
大一些，如果组织块过小，则不易分出菌种。


（< br>3
）菌素分离：有一部分子实体不易找到，也没有菌核，
可以用菌素进行分离。如蜜环菌 、假蜜环菌。其操作方法是
先用酒精或升汞将菌素表面黑色皮层轻轻擦拭
2
～
3
次，

然
后去掉黑色外皮层（菌鞘）
，抽出白色菌髓部分；用无菌 剪
刀将菌髓剪一小段，接种在培养基上，保温培养，即得该菌
菌种。

菌素分 离要注意：因菌素比较细小，分离素也比较细小，分
离时极易污染杂菌，所以要严格操作。


3
．基内菌丝分离培养法

利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯菌种的一种
方法，叫基内菌丝分离法。

此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而且是朝生
暮死，不易采得的子实体。基内分离 法与组织分离法不同之
点是，干燥的菇木或耳木中的菌丝常呈休眠状态。接种后有
时并不立刻恢 复生长。因此，有必要保留较长的时间（约
1
个月）
，
以断定菌丝是否能成活 。
基内菌丝分离法又可分为，
材中菌丝分离
（即菇木或耳木分离法）
及土中菌 丝分离法等。


（
1
）材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法， 为了减少
杂菌的感染，菇（耳）木在分离之前，必须进行无菌处理。
可以把菇（耳）水表面用酒 精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌
的孢子，或再用
0.1
％的升汞水浸孢几分钟，然后用 无菌水
冲洗后用无菌滤纸吸干。接种块切取时应注意。接种块必须
在该菌菌丝分布的范围内切取 。所以，菌丝生长缓慢的种类
应浅取；菌种生长快的种类可以深取。同时。还应根据菇菌
的种类 、木材质地、菇（耳）木粗细、发育时间的长短来确
定菌丝分布的范围。然后用一把利刀进行切取。接种 块应尽
量小些，以减少杂菌感染机会，提离菌种的纯度。接种块移
到培养基上，就应该放到适合 菌丝生长的
22℃～26℃
的温
室或温箱中培养，使菌丝恢复生长。


（
2
）
土中菌丝分离：
食用菌种类很多，
许多土 生的食用菌；
孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得
纯种的方法，叫土中菌 丝分离。

土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多种