意大利面最简单的做法新生儿溶血病检测的设计性实验

2021年1月19日发(作者：屈集臣)
新生儿溶血病检测的设计性实验

一．发病机制：



1.
胎儿期妊娠后期胎盘出血，胎儿红细胞进入母体循环系统。

2.
胎儿红细胞被母体免疫系统识别。

3.
刺激母体产生抗体。

4.
抗体通过胎盘引起新生儿溶血病


Rh
新生儿溶血病：

1. 2. 3.


二

实验原理


由于母婴
Rh血型不合，母体产生相应的
IgG
类
Rh
抗体，经过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞发生特异性的抗原抗体反应，从而破坏胎儿红细胞并引起一
系列的临床症状。运用 直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验可检测出婴儿体
内是否有来自母体的与婴儿相对应的
Ig G
类
Rh
抗体。

三

标本、试剂与器材

1
标本

（
1
）

待检标本

取婴儿抗凝血
3~5ml
，分离出血清和红细胞。用生理盐水洗
涤红细胞，混匀，以
1000
×
g
离心
1min
，去除上清液，再加入生理盐
水，充分混匀，离 心洗涤，如此反复洗涤
4
次。第四次洗涤后尽量去除
上清液，取试管底部的婴儿压积红 细胞
2
滴用生理盐水配成
2%~5%
婴
儿红细胞悬液，余下的婴儿压 积红细胞备用；

（
2
）

阳性对照
IgG
抗
D
抗体致敏的
2%~5%RhD
阳性红细胞悬液
;
（
3
）

阴性对照

正常人
2%~5%
红细胞悬液
;
2
试剂


多特异性抗球蛋白试剂、但特异性抗
IgD
试剂、单特异性抗
C3d
试剂、
0.5%
菠萝酶或
1%
木瓜酶、谱红细胞、
5 %
（
A
、
B
）指示红细胞、生理盐水、化学纯
乙醚、
0.2mol/L
巯基乙醇货
0.01mol/L
二硫苏糖醇；

3
器材

试管、滴管、
37
水浴箱、
56水浴振荡箱、台式离心机、显微镜等

。

（一）

婴儿红细胞直接抗球蛋白试验

1)

实验目的

检测新生儿红细胞上是否存在不完全抗体。

2)

实验原理

不完全抗体多与其相应的红细胞结合，在盐水介质中不出
现凝 集反应。
Coomb
试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，通过连
接致敏红细胞表面的 特异性
Rh
抗体，使致敏红细胞出现特异性凝
集。

3)

操作步骤

1
取三只试管，表明待测标本管、阳性对照管、阴性对照管；

2
待测标本管加入
1
滴
2%~5%
婴儿红细胞悬液，阳性对照管加入
I gG
抗

D
抗体致敏的
2%~5%RhD
阳性红细胞悬液， 阴性对照管加入
1
滴
正常人

2%~5%
红细胞悬液；

3
各管加入抗球蛋白试剂
2
滴，混匀，
1000r/min
离心
1min
；

4
判断结果

斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，肉眼观察红细胞凝集情
况。若有可疑的，可讲混悬液倒在玻片上，在显微镜下观查结果。如
阳性对照管出现凝集，阴性 对照管不出现凝集，说明被检测管的结果
可信；若被检测管出现凝集，为
RhD
阳性， 反之为
RhD
阴性。

5
报告方式

直接抗球蛋白试验阳性或阴性。

（二）

婴儿血清中游离抗体检查

1
）

实验目的

检测新生儿血清中是否存在不完全抗体。

2
）

实验原理

不完全抗体多与其相应的红细胞结合，在盐水介质中
不出现凝 集反应。
Coomb
试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗
体，通过连接致敏红细胞表面的 特异性
Rh
抗体，使致敏红细
胞出现特异性凝集。

3
）

检测方法

有酶介质法、聚凝胺试验、间接抗球蛋白试验、人源
盐

水

介质抗
D
试验、低离子强度溶液实验

等。

4
）

间接抗球蛋白试验操作步骤

：

1

谱红细胞
1
滴加入试管中，再加入婴儿的血清
2
滴

，

混
匀；

2

温育
37
℃温育
30~60min
；

3

离心

以
1000r/min
离心
1min
；

4

观察

观察

是否有溶血和凝集，并记录结果；

5

洗涤红细胞

用生理盐水洗涤
3~4
次。最后一次洗涤后，
倒掉

全部的盐水，加抗球蛋白试剂
2
滴，充分混匀；

6

离心

以
1000r/min
离心
1min
；

7

观察

轻轻悬浮细胞，观察有否溶血和凝集，溶血和凝集
为阳性，否则为阴性；