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血液分析仪五分类技术原理
随着电子技术、
流式细胞技术、激光技术、
电子计算机技术和新荧光化学物质等各种高
新技术在血细胞分析仪中的应用.
使血细胞分析仪的检测原理不断完善、
测量参数不断增加、
检测水平不断提高< br>.
尤其在白细胞五分类技术方面，已发展到利用多项技术
(
如射频、细胞化学染色、流式细胞术和荧光染色技术等
)
联合同时检测一个白细胞
.
再用 先进的计算机技术区
分、辨别经上述方法处理后的各自细胞间的细胞差别
.
综合分析实 验数据，得出较为准确的
白细胞分类结果。为临床疾病的诊断、治疗提供了重要的实验室依据。
近年来。可以对白细
胞进行五分类计数的血细胞分析仪已经普遍使用。
本文就目前血细胞五分类 测定中常用技术
及其最新应用进展作一综述。
1
血细胞五分类技术的原理
1.1
流式细胞术
流式细胞术
(flow cytometry
，
FCM)
是一种综合 应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、
细胞生物学、
分子免疫学等学科技术，
使 被测溶液流经测量区域，
并逐一检测其中每一个细
胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞 或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。
首先，
待测细胞经处理或染色后被压人流 动室，
与此同时，
不含细胞的缓冲液在高压下
从鞘液管喷出，
鞘液管人口方向 与待测样品流成一定角度，
这样鞘液就能被包绕着样品高速
流动，组成一个圆形的流束，待测细 胞在包绕下单行排列，依次通过检测区域
.
在激光束的
照射下产生散射光和激发荧光。 这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的信息
.
经光电倍增管接收后可转换为电信号 ，再通过模，数转换器
.
将连续的电信号转换为可被计
算机识别的数字信号，经计算机 处理，可将分析结果显示在屏幕上。
为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域，
鞘 流技术在流式细胞术中被广泛应用。
根
据层流理论，
由于两种液体的流速和压力不同。
在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液在流
动中可以保持相互分离并且同轴。
同时鞘液 流可以加速样品溶液中颗粒的流动并迫使他们的
流动轨迹保持在液流的中轴线上，
使细胞单排列 地逐一通过检测区域，
这便是所谓的液流聚
焦原理
1_2
阻抗法
根据库尔特原理，
将不良导体血液按一定比例稀释于等渗的电解液中 ，
在小孔电极的两侧加
一恒流源
.
在负压作用下，使稀释的血细胞通过小孔。 当细胞通过截面时会由于电阻增大产
生相应的脉冲，
其脉冲的幅度与细胞的体积成正比，
脉冲的频度与细胞的数量成正比。
这便
是著名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。利用库尔特原 理可以有效地区分淋巴及单核细胞。
1.3
激光散射法／多角度偏振光散射技术
根据光散射理论，
当激光照射到流动室 内流过的每一个细胞时，
由于细胞的物理特性，
部分
光线从细胞上经不同的角度散射。
其中，
前向小角度散射光的光强可以反应细胞体积；
大角
度散射光的光强可以 反应细胞核，
浆复杂度和细胞颗粒的信息；
而侧向散射光的光强可以反
应细胞膜、核膜 、细胞质的变化。因此，可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类。
1
26
.c om
用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区，在不同角度
(10
度～7O
度
)
对每个细胞进行扫描分析，测定其散射光强度，从而提供细胞结构、形态 的光散
射信息。
由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强，
故光散射对细胞颗粒的 构型和颗粒
质量具有很好的区别能力。
多角度偏振散射技术用偏振激光束射照单个排 列细胞，
并进一步分辨细胞。
该技术采用
了
l0
度窄角和偏振加消偏 振检测法，分辨能力有所提高。它首先测试中性，
单核细胞，用
0
度～
90< br>度的散射数据，再测得
90
度
D
的衍射差，将嗜酸性和中性细胞分开< br>.
而嗜碱性粒细
胞、
淋巴细胞及单核细胞则按其大小和内部结构不同的复杂性，
所产生的散射光也各异，
用
可调较的门限加以区分。
其采用特定程序自动储存 分析数据，
并经计算机软件处理，
在屏幕
上显示
6
个散点图和
2
个直方图。
1.4
各种细胞化学特性应用技术
利用五种白细胞自身不同的化学性质
.
应用相应的化学试剂加以区分
由于嗜酸性
(
或嗜碱性
)
粒细胞均有较强的碱性
(
或酸性
)
，因此在特殊的溶血剂作用下，
经过特定时间及温度的孵育，
可使除嗜酸性
(
嗜碱性
)
粒细胞之外的所有细胞溶解或萎缩
.
经处
理之后的细胞根据阻抗脉冲计数法，可得相应嗜酸性
(
嗜碱性
)
细胞有效数 值。
利用五种白细胞过
氧
化物酶活性的差异对白细胞进行染色，
测 定其酶反应强度，
对白细
胞进行分析。
血液中五种白细胞的过氧化物酶活性排列顺序为 ：
嗜酸性粒细胞
>
中性粒细胞
>
单核细胞。
淋巴细胞和嗜碱 性粒细胞均无过氧化物酶。
将待测血液加入清洗剂和甲醛的等渗
液体内经孵育，
再加入 过氧化氢和四氯一萘酚，
细胞内过氧化酶分解产生氧离子，
使四氯一
萘酚显色并沉淀，
并定位于酶反应部位。
根据酶反应强度的不同，
利用光电检测技术测定相
应吸 光度值的方法
,
用以区分嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞。
1.5
电导，射频法
与早期的三分类血液分析仪利用库尔特原理不同的是，
它在内 外电极上加了一个
RF
射频发
生器。
RF
是射频电流的简称
.
它是一种高频交流变化电磁波。按照工作频率的不同，
RF
可
以分为低频< br>(LF)
、
高频
(HF)
、
超高频
(UHF)
和微波等不同种类
.
不同频段的
RF
工作原理不同，
和
HF
频段一般采用电磁耦合原理，
而
UHF
及微波频段的
R F
一般采用电磁反射原理。
在血
液分析仪中多采用高频电磁波，
其原理是交变 电流通过导体时，
会在导体周围形成交变电磁
场，形成电磁波。因导体的密度及导电性质等差异 ，其周围所形成的电磁场也不相同。
因此
当射频电流穿透细胞膜透入胞内时，
由于核的 大小、
化学组分、
颗粒多少以及浆核比例的不
同，
使
RF
信 号发生不同的变化。
借此可以将体积大小相同但内部结构不同的细胞区分开来，
如淋巴细胞与嗜 碱性细胞。
1.6
荧光法
利用不同细胞的细胞膜、胞内因子以 及胞内
DNA
、
RNA
、胞内离子钙等不同染色特性，选
用具有特异 性抗原或抗体的荧光染料载体，
使待分离的细胞分别标记相应的荧光物质，
经过
特定波 长的激光照射激发出不同波长的荧光，利用各种
PMT
管检测荧光信号的个数，可以
完 成待检细胞的计数
如进一步分析计数淋巴细胞或网织红细胞等
2
血细胞五分类技术的应用及展望
2.1
五分类血液分析仪的现状
全自动五分类血细胞分析仪是多学科相互交叉、
渗透、
综合的产物，
涉及技术 领域包括电子
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