过期的红糖处理小妙招微生物检验支原体及检验

2021年1月18日发(作者：范瑞五)
第二十九章

支原体及检验


本章考点：

（
1
）概念

1.
概述

（
2
）分类与命名

（
3
）生物学特性

（
4
）微生物学检验

（
1
）生物学特性

2.
肺炎支原体

（
2
）致病性

（
3
）微生物学检验

（
1
）生物学特性

3.
解脲脲原体

4.
其他支原体




一、概述



支原体是
一类①无细胞壁，②呈 高度多形态性，③能通过除菌滤器，在④人工培养基上能生长繁殖的
⑤最小原核型微生物
。


（一）分类与命名



支原体种类繁 多，分布广泛。支原体科分为
支原体和脲原体
两个属。在支原体属中，对人有致病性的
主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体、穿透支原体等；而脲原体属中解脲脲原体（也称溶脲脲
原体）对人致病。



（二）生物学特性



1.
形态与结构：
支原体个体微小，大小约
0.2
～
0.3
μ
m
，呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。
革兰染色为阴性
，但不易着色，常用姬姆萨染色，呈淡紫色。



无细胞壁仅有细胞膜是与 细菌区别的主要特点
。支原体的细胞膜，有外、中、内三层所组成，内外两
层主要为蛋白质，中 间层系脂质，其中胆固醇类含量高。凡能作用于胆固醇的物质如两性霉素
B
、皂甙及毛
地黄甙均可破坏细胞膜致其死亡。



2.
培养特性：支原体大多 数
需氧或兼性厌氧
，通常在含
95%N
2
、
5%C0
2
环境中生长良好。
营养要求较一
般细菌高
，可在含
牛心浸液、马 血清与酵母浸液
的培养基上生长。支原体与脲原体对最适
pH
要求不同。支
原 体一般在
pH7.8-8.0
间生长，低于
7.0
则死亡。



支原体的菌落特征与细菌
L
型菌落极相似
，37℃培养
3
～
10
天可形成直径为
0.2
～
0.5mm大小的菌落，
用低倍镜观察，菌落呈
“荷包蛋”
样，即中央部分较厚，不透明，向 下长入培养基内，周边为一层薄薄的
透明颗粒区。



支原体有许 多特性与细菌
L
型相似，如
多形性、可通过滤菌器、对低渗敏感、菌落呈“荷包蛋”样
。
两者不同点在于细菌
L
型在无抗生素等诱导因素作用下，易返祖为原菌，而 支原体为独立的一类微生物，
不出现
返祖现象
。


3.
生化反应：常以发酵葡萄糖、水解精氨酸和尿素等生物学特性不同，作为初步鉴别支原体的依据 。

支原体

肺炎支原体

生殖道支原体

葡萄糖

+
+
精氨酸

-
-
尿素

-
-
吸附红细胞

+
-
（
2
）致病性

（
3
）微生物学检验

简介


人型支原体

穿透支原体

解脲脲原体


-
+
-
+
+
-
-
-
+
-
+
-


4.
抗原成分：支原体的抗原性主要来自
细胞膜
，其外层蛋白质是 主要的型特异性抗原，具有免疫原性。
生长抑制试验（
GIT
）和代谢抑制试验（MIT
）利用针对此抗原的型特异性血清来抑制支原体在培养基上生
长，可将支原体分成若 干血清型。



5.
抵抗力：
支原体对热的抵抗力一般与 细菌相似
。45℃经
15
～
30
分钟或
55℃经
5
～
15
分钟即告死亡。
支原体耐冷
，不耐干燥。支原体对一些化学物 质比细菌敏感，容易被重金属盐类、石炭酸、来苏儿等化学
消毒剂灭活。



支原体因无细胞壁，
对渗透压敏感
，对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等 不敏感，对抑
制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。



（三）微生物检查



由于支原体无固定形态，染色结果不易与标 本中的组织碎片等杂物区别，故取患者标本直接镜检对各
种支原体的诊断意义不大。
微生物学检 验方法主要靠分离培养与血清学检查
。




二、肺炎支原体



（一）生物学特性



菌体呈
短细丝状
。长约
2
～
5
μ
m
，典型的形态类似
酒瓶状
。
姬姆萨染色呈淡紫色
。分离培养的最 适
pH
为
7.6
～
8.0
。
P1
蛋白是肺 炎支原体的主要特异性免疫原，是目前血清学诊断的主要抗原。



（二）致病性



肺炎支原体可从口腔、呼吸道分离到，主要通过
飞沫传播
，是
人类原发性非典型性肺炎的主要病原体
之一
。儿童和青 年易感，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染。病理变化主要是间质性肺炎、急性细支
气管炎。还可引 起肺外并发症。



（三）微生物学检验



采集咽分泌物、痰、支气管分泌物、胸水等。



1.
分 离与鉴定：
这是确诊支原体感染的可靠方法之一
。
常以牛心消化液为基础另加
20%
小牛血清及新鲜
酵母浸液制成液体或固体培养基。初次分离生长缓慢，通常先将标本接种 于液体培养基中增菌，
1
周后培养
基指示剂颜色改变，
液体清晰，
可 转种于固体平板培养基，
在
5%C0
2
环境中培养，
初次分离肺炎支 原体需
1
～
2
周才长菌落。菌落常不出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌 落开始典型。肺炎支原体分离培养有时需
20
天或更长时间，对临床快速诊断意义不大。



支原体在固体培养基上长出典型菌落，以此可初步诊断
，再进一步进 行生化反应和血清学鉴定。生化
反应如：



（
1
）葡萄糖、精氨酸、尿素分解试验：
发酵葡萄糖产酸，不能利用精氨酸、尿素
。



（
2
）氯化三苯基四氮唑（
TTC
）还原试验 ：使
无色
TTC
还原为粉红色
。



（
3
）生长抑制试验（
GIT
）和代谢抑制试验（
MIT
）。 抗血清。



（
4
）红细胞吸附试验；
肺炎支原 体的菌落能发生红细胞吸附
。



2.
血清学试验



（
1
）特异性血清学试验（临床少用）



1< br>）
ELISA
技术：敏感性和特异性高，可检测
IgM
和
Ig G
抗体。利用
ELISA
捕获法，以抗
P1
蛋白单抗检
测标 本中的肺炎支原体
P1
蛋白。



2
）补体结合 试验：诊断肺炎支原体常用的血清学方法，一般
血清滴度≥1：
64
～
1：
128
为阳性，病程

中恢复期和急性期双份血清至少效价有
4
倍增长，
近期感染可能性越大。主要检测
IgM
抗体。初次感染时
出现阳性，再次感染时常不出现阳性。



3
）间接血细胞凝集试 验：敏感度略高于补体结合试验，主要检测
IgM
抗体。



（
2
）非特异性血清学试验（辅助诊断）：



冷凝集试验：将患者的稀释血清与
O
型
Rh
阴性红细胞在
4℃下作凝 集试验。一般血清滴度≥1：
64
即
为阳性，病程中双份血清至少效价有
4< br>倍增长，近期感染可能性越大。




试验快速检测。




三、解脲脲原体



（一）生物学特性



解脲脲原体（
Uu
）在液体培养基中菌体以
球形为主，直径约
50
～
300nm
。姬姆萨染色呈
紫蓝色
。
生长最
适
pH
为
5.5
～
6.5
，因其具有尿素酶分解培养基中的尿素产氨，使
pH
升高，可加速其死亡。解脲脲原体除
脂多糖抗原和蛋白抗原外，还有脲酶抗原，后者是种特异性抗原。< br>


（二）致病性



解脲脲原体是人 类生殖道最常见的寄生菌之一
，在特定的环境下可以致病。主要通过
性行为传播，是
非 淋菌性尿道炎的主要病原体之一
。若上行感染，还可引起男性和女性的其他泌尿生殖道炎症。另外解脲< br>脲原体还可
通过垂直传播
，引起新生儿，特别是早产儿，呼吸道感染和中枢神经系统感染 。



（三）微生物学检验



合理采集相应标本，如尿液、前列腺液、精液、阴道分泌物等。



1.
诊断解脲脲原体感染，
分离培养是相对容易和快速的
。取标本少许接种于含酚红 、尿素及血清的液
体培养基内，
最好在
95%N
2
和
5%C 0
2
环境中，
37℃孵育，
1
～
2
天内即可出现生 长现象。
取培养物少许
（约
0.2ml
左右）转种在相应的固体培养基上，培 养
48
小时。



如出现典型菌落，则进行形态观察及生 化试验，进行初步鉴定。解脲脲原体只分解尿素，不分解葡萄
糖、精氨酸。进一步利用特异性血清作MIT
和
GIT
试验进行最终鉴定。



2 .
核酸检测：以部分脲酶基因的核酸序列为模板，利用
PCR
方法扩增后的产物进行核 酸杂交，鉴定解
脲脲原体，其特点是快速、敏感、稳定、可靠。



3.
解脲脲原体的血清学诊断意义不大
，主要原因是有些无症状者也可有低效价的抗体。



四、其他支原体



人型 支原体最常见的寄生部位是泌尿生殖道，多引起妇女泌尿生殖道感染，还能感染胎儿和在分娩时
感染婴儿 ，造成新生儿感染和死胎。



穿通支原体、发酵支原体、梨形支原体被认 为是加速
AIDS
进程的一个协同因子。

第二十八章

立克次体及检验


本章考点：

1.
概述

2.
生物学特性

3.
致病性

4.
微生物学检验

立克次体共同特征与分类

（
1
）形态与染色

（
2
）抗原构造

（
3
）培养特性

概述

（
1
）标本的采集

（
2
）直接检查