洋具是什么《肺炎支原体IgMIgG抗体检测试剂注册技术指导原则》(征求意见稿)

2021年1月17日发(作者：傅彬然)
附件
1
：


肺炎支原体
IgM/IgG
抗体检测试剂注册技
术指导原则

(
征求意见稿
)


本指导原则旨在指导注册申请人对肺炎 支原体
IgM/IgG
抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审
评部 门对注册申报资料的技术审评提供参考。

本指导原则是对肺炎支原体
IgM/IgG
抗体检测试剂的
一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是
否适用，若不 适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，
并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不
包括注册审批所涉 及的行政事项，亦不作为法规强制执行，
如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相
关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水
平下制定的，随着法规和标准的不断完 善，以及科学技术的
不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围

肺炎支原体（
Mycoplasma pneumonia< br>，
Mp
）属于
柔膜体纲，支原体属，是引起人类呼吸道感染的常见病原
微生物，是我国儿童和成人社区获得性肺炎（
community-
acquired pne umonia
，
CAP
）的重要致病原之一。
Mp
感
染广泛 存在于世界各地，平时散在性发病，每隔数年会出
现地区周期性流行，每次流行持续数月到数年不等。对 于
群聚性发病或初始经验性治疗无效的
CAP
患者，住院或重
症
CA P
患者，建议进行致病原检查，明确
CAP
致病原可有
助于进行目标性抗感染 治疗。

根据肺炎支原体主要黏附基因
P1
基因的重复序列
RepM P2/3
或
RepMP4
，肺炎支原体可分为
I
型和
II< br>型两个
基因型，不区分血清型。

肺炎支原体的检测对于支原体肺炎的治疗至关 重要，
实验室检测方法包括病原体培养、抗原检测、抗体检测和
核酸检测。肺炎支原体培养难度 较大，需采用专门的培养
基和培养技术，耗时长，敏感性低，但特异性好。血清特
异性抗体检测 是目前诊断肺炎支原体肺炎的重要手段，免
疫层析法、酶联免疫法和化学发光法抗体检测试剂在临床中广泛应用。颗粒凝集（
particle agglutination
，
PA
）试
验和补体结合（
complement fixation
，
C F
）试验是检测
肺炎支原体抗体的传统方法，但无法区分
IgG
和
I gM
。

本指导原则所述肺炎支原体
IgM/IgG
抗体检测试剂是
指采用胶体金法、荧光免疫层析法、酶联免疫法、酶免渗滤
法或化学发光法，体外定性检测人血 清、血浆或全血中的肺
炎支原体
IgM
和
/
或
IgG
抗体的试剂。结合临床和其他实验
室指标，可用于肺炎支原体感染的辅助诊断。对基于其他方
法学的试剂，及肺炎支原体其他抗体或总抗体检测试剂，可
能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全 面，申请人可
以根据产品特性对适用部分进行评价或补充其他的评价资
料进行相应验证。

二、注册申报资料要求

（一）综述资料

综述资料主要包括产 品预期用途、产品描述、有关生物
安全性的说明、主要研究结果的总结评价以及同类产品上市
情 况介绍等内容。产品描述中应说明产品所采用的技术原理，
选择捕获法或间接法的考虑。
同类产 品上市情况介绍部分应
着重从方法学、检测原理、特异性抗原等主要组成成分、样
本类型等方面 写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同
类产品之间的主要区别。

（二）主要原材料的研究资料

此类产品的主要原材料一般包括抗原、抗体、对照品、
质控品、校准品、参考品等。如主要原材料为企业自制，应
提供其详细的选择、制备、鉴定和质 量控制过程；如主要原
材料源于外购，应提供资料包括：选择该原材料的依据及对
比筛选试验资 料、选定的供应商名称，供应商提供的原材料
质量标准、出厂检验报告，以及该原材料到货后的质量检验
资料，供应商应固定，不得随意更换。申请人应对各主要原
材料均明确质量控制标准。

1.
肺炎支原体抗原

肺炎支原体抗原决定了检测的敏感度和特异性，对抗 体
检测试剂至关重要。应注重抗原的选择，详细描述抗原的名
称，
天然
/重组表达信息及选择该抗原的依据。
提交抗原来源、
制备、纯化、鉴定及质量标准（外观、 蛋白浓度、纯度、分
子量、功能性试验等）等详细试验资料。

2.
抗人
IgM/IgG
单克隆抗体

详述抗体的选择过程，提交抗体生 物学来源、免疫原及
质量标准（外观、蛋白浓度、纯度、分子量、效价、功能性
试验等）等详细 试验资料。

3.
试剂盒质控线
/
对照品
/
质控品
/
校准品


免疫层析方法学的产品应设置质控线，详述质控线相关
抗体的选择依据和质量标准。

对照品
/
质控品应至少包含阴性和阳性两个水平。
阳性对
照品
/
质控品
/
校准品可选择经合理稀释的临床阳性样本，阴
性对照品
/
质控品
/
校准品可选择临床阴性样本或阴性基质等。
提交相关原料的来源、 选择和性能确认等相关研究资料，明
确供应商和质量控制标准。
企业应对对照品
/质控品的检测结
果做出明确的范围要求（试验有效性的判断）。

4.
其他主要原辅料

除上述主要原材料外，产品中包含的其他主要原辅料，
如胶 体金、辣根过氧化物酶、吖啶酯、硝酸纤维素膜、微孔
板、磁微粒、样本稀释液等，均应进行选择及验证 ，并提交
相关资料。明确主要原辅料的供应商和质量控制标准。免疫
层析方法学的产品如适用于 全血，应介绍血细胞去除方式及
相关原材料，并验证去除效果。

5.
企业参考品

企业参考品是保证产品性能稳定的重要构成之一。应提交企业参考品的原料来源、
选择、
制备、
阴阳性及浓度
/
滴度< br>确认方法或试剂等相关验证资料。企业参考品的基质应与待
测样本相同。企业参考品的设置应至少 包括：阳性参考品、
阴性参考品、检测限参考品和重复性参考品。其中阳性参考
品重在评估产品 的包容性，应选择不同来源的临床样本，并
设置不同滴度水平。阴性参考品应可评价产品的特异性，建< br>议包括含有类风湿因子、其他病原体抗体等可能的干扰和交
叉样本，对于检测肺炎支原体
IgM
抗体的试剂，阴性参考品
中建议包括肺炎支原体
IgG
抗体阳性样本。 检测限参考品可
设置临床阳性样本的系列稀释样本，其中应包含检测限水平。
重复性参考品可设 置高、低两个浓度的临床样本，其中一个
浓度在最低检出限附近。对于同时检测肺炎支原体
Ig M
和
IgG
抗体的试剂，企业参考品需对
IgM
抗体和
Ig G
抗体分别
设置。

（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料

1.
产品基本反应原理介绍。

2.
主要生产工艺介绍，可用流程图 方式表示，并简要说
明主要生产工艺的确定依据。

3.
包被
/标记工艺研究，申请人应考虑如包被
/
标记液量、
浓度、时间、条件等指标对产品 性能的影响，通过实验确定
上述指标的最佳组合。

4.
显色系统、酶作用底物等的介绍以及最适条件研究。

5.
反应 条件确定：
申请人应考虑反应时间、
判读时间、
反
应温度、洗涤液体积和洗涤 次数（如涉及）等条件对产品性
能的影响，通过实验确定上述条件的最佳组合。

6.
反应体系中样品加样方式及加样量确定：通过实验确
定最佳的加样方式及加样量。如样本需采取 稀释或其他必要
的方法进行处理后方可用于最终检测，申请人还应对样本稀
释液及其用量、其他 必要的处理方法等进行研究。对于
IgM
抗体检测试剂，如采用间接法，建议考虑高浓度特异性
IgG
对结果的影响，合理设置
IgG
去除相关样本处理步骤（例如
采用含有
IgG
吸附剂的样本稀释液等）
，或者详述产品设计
中关于避免IgG
影响
IgM
检测结果的合理措施，
尽量减少特
异性
IgG
对
IgM
检测造成的假阴性和假阳性。

（四）分析性能研究资料

企业应提交在符合质量管理体系的生产环境下生产的
试剂盒进行的所有性能评估资料，包括具体研究方法、实验
方案、实验数据、统计分析等详细资料。有 关分析性能评估
的背景信息也应在申报资料中进行描述，包括试验地点，试
验采用的试剂名称、 规格和批号，仪器名称和型号，样本类
型和来源等。分析性能评估的实验方法可以参考相关的美国
临床实验室标准化协会批准指南
（
CLSI-EP
）
文件或国内有关
体外诊断产品性能评估的指导原则进行，建议着重对以下分
析性能进行研究。

1.

企业参考品检验

根据主要原材料研究资料中的企业参考品设 置情况，采
用三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的实验数据。

2.
最低检测限

建议采用已明确肺炎支原体抗体滴度的阳性临床样本，采用阴性样本进行系列稀释，进行最低检测限的建立和验证
评价。
应采用合理方法确认抗体 类型和滴度，提供详细的确
认方法及结果。

2.1
选取至少
3份临床样本，系列稀释获得多个浓度梯
度，
每个浓度重复检测不少于
3
次 ，
以
100%
可检出的最低浓
度水平作为预设检测限。在此浓度附近制备若干 浓度梯度样
品，
每个浓度至少重复检测
20
次，
将具有
95 %
阳性检出率的
最低浓度作为最低检测限。

2.2
选择与
2.1
不同的
3
份临床样本，
采用阴性基质稀释
到最低检测限浓度水 平进行验证，应达到
95%
阳性检出率。

3.
阴阳性符合率

应选择中国境内来源于不同地域、不同人群的多份临床
确诊且 经合理方法判定肺炎支原体抗体阳性的患者样本进
行检测，建议覆盖已知基因型，检测结果的阴阳性应与 预期
结果相符。


对于肺炎支原体
IgM
抗体检测试剂，
还需选择
IgM
单阳
性样本进行颗粒凝集试验，以滴度
1
：
160
作为阳性判定标
准，申报试剂对滴度
1
：
160的样本检测结果应为阳性。

4.
精密度

申请人应对精密度 指标的评价标准做出合理要求，如标
准差或变异系数的范围等。应对可能影响检测精密度的主要
变量进行验证，包括不同时间、地点、操作者、检测轮次、
试剂批次、适用仪器（如适用）等。

设定合理的精密度评价周期，
例如：
为期至少
20
天的检
测 。
至少采用
3
个水平的临床样本进行精密度评价，具体要
求如下：

4.1
阴性样本：
待测物浓度低于最低检测限或为零浓度，
阴性检出率应为
100%
（
n
≥
20
）
。

4. 2
临界阳性样本：
待测物浓度略高于试剂盒的最低检
测限，
阳性检出率应大于
95%
（
n
≥
20
）
。

4.3
中
/
强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，阳性
检出率为
100 %
且
CV
≤
15%
（如适用）
（
n
≥20
）
。

5.
分析特异性

5.1
交叉反应

应对肺炎支原体的近缘微生物，易引起相同或相似的临床症状，及易合并感染的微生物（表
1
）
，高浓度肺炎支原体
特异性IgG
抗体
/
特异性
IgM
抗体进行交叉反应验证。

如果试剂原料采用基因重组抗原，则还需考虑对重组基
因导入微生物特异性抗体的交叉反应评价 。例如，如果采用
大肠埃希菌作为宿主菌，建议考虑大肠埃希菌抗体阳性样本
可能产生的交叉反 应。

交叉反应用临床样本中相关病原体抗体滴度水平应较
高，并且抗体类型（
IgM
、
IgG
）应与申报试剂检测抗体类型
一致。
提供所有用于 交叉反应验证的样本来源、阴阳性和滴
度确认等信息。

表
1
用于交叉反应研究的病原体（
*
为必做项目）

肺炎支原体的近缘微 生物：解脲支原
体
*
，生殖支原体
*
，人型支原体
*

肺炎链球菌

*

肺炎衣原体

*

流感嗜血杆菌

*

肺炎克雷伯菌

*

金黄色葡萄球菌

*

结核分枝杆菌

*

嗜肺军团菌

*

铜绿假单胞菌
*

鲍曼不动杆菌

结核分枝杆菌

流感病毒

副流感病毒

鼻病毒

腺病毒

人偏肺病毒

呼吸道合胞病毒

5.2
干扰试验

应根据所采集样本类型，
选择适用的干扰物质进行研究。
建议申请人在每种干扰物质的 潜在最大浓度（
“
最差条件
”
）
下，采用待测抗体为弱阳性和阴性水 平的多例样本进行试验，
应至少包括下列可能的干扰物质。

5.2.1
内 源性物质：
血红蛋白、
胆红素、
血脂、
类风湿因
子、
其他自 身免疫性抗体，
异嗜性抗体
（如
HAMA
）
、
总
I gG
、
总
IgM
、
红细胞压积
（全血样本适用）
，
高浓度肺炎支原体特
异性
IgG
抗体与特异性
IgM
抗体的 干扰。

5.2.2

常见治疗性药物：
左氧氟沙星、
莫西 沙星、
吉米沙
星等喹诺酮类抗菌药物、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素等大
环内酯类抗菌 药物、多西环素、米诺环素等四环素类抗菌药
物。

5.2.3
症状相关其他经验性药物。

5.2.4
抗凝剂：
如果试剂盒适用样 本类型包括血浆、
全血
样本，可采用一定数量同源样本进行比对试验的方法，或采
用回 收试验的方法，验证各种抗凝剂的适用性。

6. IgM
抗体破坏试验
< br>对于肺炎支原体
IgM
抗体检测试剂，建议对至少
5
份含
有肺 炎支原体特异性
IgM
抗体的样本进行
IgM
破坏实验研究，
方法为 采用特定的化学制剂
（如
2
－巯基乙醇或二硫苏糖醇）
处理样本后，重新进行 检测，
IgM
检测结果应为阴性。

7.
钩状（
HOOK
）效应研究

须采用多份高滴度样本进 行梯度稀释后由低浓度至高
浓度开始检测，每个梯度的稀释液重复
3
～
5份，对钩状效应
进行合理的验证。

8.
其他需注意问题
对于使用仪器进行结果判读的产品，应提供产品说明书
【适用机型】项中所有型号仪器的性能评估资 料。

9.
适用的样本类型