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试管膜细胞小鼠脾脏中分离淋巴细胞

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-14 19:43

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2021年1月14日发(作者:试管经历知乎)
从小鼠脾脏中分离淋巴细胞
1小鼠断颈处死,酒精浸泡5分钟,超净台内打开左侧腹部皮肤, 小心分离皮下
组织和腹部肌肉暴露出脾脏,提起,剪去周围结缔组织,放入有PBS的小瓶中。
无菌镊子夹碎,挤压脾脏,将获得的细胞悬液移入无菌试管中。
2另取无菌试管,先加入淋巴细胞分离 液,然后将试管倾斜,略放平,吸取刚刚
制备的细胞悬液缓慢的加入试管中,一般分离液和细胞悬液的体 积比为1:2,
要轻要慢,不要冲破了淋巴细胞分离液和细胞悬液的界面。选用适合自己分离目
的细胞的离心力和时间进行离心。个人用1500转分钟,20分钟。
3离心后取出试管,可以看到不 同的分层,一般上面是非细胞成分和细胞碎片,
接下来是单个核细胞,再往下是红细胞等。吸走上层非细 胞层弃之,吸出单个核
层在另外无菌试管中,因为淋巴细胞分离液对细胞有毒性作用,加入PBS 离心
洗两遍(PBS1000转分钟,10分钟)。
4,洗好的细胞加入1640培养液和2 0%的血清中重悬,缓慢加入已经制备
好的尼龙毛柱子中,封好,放37度孵育一小时。一小时后取出, 超净台内将柱
子立起,针头下面放无菌试管(我们的柱子是用大号注射器做的),以HANKS液
和血清先后缓慢冲洗,巨噬细胞贴在尼龙毛上不下来,B细胞也相对吸附冲洗下
来的不多,所以冲洗来 的大多是T细胞,纯度可打到80%到90%,再次冲洗
并且用力挤压,这样得到的就是B细胞。得到的 细胞可以以1640加血清配制
的培养液进一步培养或做它用。但是淋巴细胞分离液得到的细胞只能算是 粗分,
如果实验要求高最好选用磁珠或流式分离。

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