常用血细胞化学染色原理及应用

2021年1月13日发(作者：当归的功效与作用)
常用血细胞化学染色原理及应用
（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）
[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四 甲基联苯胺氧化为蓝
色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。
正常血细胞的染色反应：
1. 粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑 色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，
阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞 阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性
粒细胞呈阴性反应。
2. 单核细胞系- 原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。
3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）
[原理] 过碘酸-雪夫又称糖原染 色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二
醇基经过碘酸氧化 ，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在
的 部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。
正常血细胞的染色反应：
1. 粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性, 至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强 度逐渐增强。
嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大 小不一的紫红色颗粒。
2. 单核细胞系--- 原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。
3. 淋巴细胞系 ---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。
4. 红细胞系---- 红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。
5. 巨核细胞系-- 巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应。
6. 其他---- 浆细胞呈阴性反应,少数呈较弱阳性。巨噬细胞可呈阳性反应。均定位于胞质内。
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[临床意义]
1）急性白血病类型的鉴别
红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；
急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；
急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；
急性早幼粒细胞白血病 异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；
急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈 弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈
阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或 块状。
2）各类贫血的鉴别 MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼 红细胞PAS染色多为阴性反应，
有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞 PAS染色为阴性。
3）其他细胞类型的鉴别 戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞PAS染色 为弱阳性，空泡中心阴性。非霍奇金淋巴细
胞PAS染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应 。骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗
粒或块状。
（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法）（NAP）
[原理] 中性粒细胞内碱性磷酸酶在pH9.4-9.6时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦 联成
不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。
阳性 —（+）1分：胞质见浅红色，无颗粒或有少量细小颗粒但小于胞质14面积。
（++）2分：胞质见红色，有较粗红色颗粒但小于胞质12面积。
（+++） 3分：胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积34以上。
（++++）4分：胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积甚至可掩盖于胞核上。
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正常血细胞的染色反应：
1. 碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他细胞均呈阴性反应。
2. 成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分的计算100（包括分叶核和杆状核粒细胞），参考值为7-51 。
[临床意义]
生理变化：①新生儿高，老年低； ②应激状态可增高； ③月经前期高，行经后降低； ④妊娠后逐月增高
NAP 积分增高：
1. 细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、活力显著升高；病毒感染无明显变化。鉴别细菌性感染和病毒感染。
2. 慢粒NAP积分明显减低，常为“0”，缓解时上升。类白血病,由化浓性球菌引起的类白反应, NAP活力明显升高。鉴别
慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效。
3. 急性粒细胞白血病NAP减低，急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,鉴别急粒和急淋。
4. 急单减低。
5. 再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。对再障的诊断 疗效观察和估计病情均有一定意义。阵
发性睡眠性血红蛋白尿NAP减低，可鉴别PNH和再障。
6. 真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,而继发性红细胞增多症NAP无明显变化，鉴别真红和 继发红细胞增多症。
7. 骨髓增生异常综合征NPA减低。
8. 红白血病NAP减低， 镰形细胞型贫血，家族地磷酸酶血症减低；慢淋、骨髓纤维化、原发性血小板增多和红血病增高。
9. 其它应用肾上腺皮质激素、雌激素、和ACTH后NAP增高。
（4）氯乙酸AS- D萘酚酯酶染色的原理和临床意义NAS-DCE
[原理] 细胞内的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS－D萘酚，产生AS－D萘酚， 进而与基质
液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。
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正常细胞反应 :
1. 粒细胞系---中性粒细胞(除原粒细胞外) 均可呈阳性或强阳性,且酶活性并不随细胞成熟而增强，定位于胞浆内。嗜酸
粒细胞为阴性和弱阳性，嗜 碱为阳性。
2. 单核为阴性，个别阳性。淋巴细胞系、浆细胞系、幼红细胞系、血小板均呈阴性。
[临床意义]
临床上主要用于急性白血病类型的鉴别 急性粒细胞白血病时，白血病性原粒 细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病、
急性淋巴细胞白血病：白血病性细胞为阴性反应；
（5）α-醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义（α-NAE）
[原理] 血细胞中的α- 醋酸萘酚酯酶（α-NAE）水解基质液中的α-醋酸萘酚，释放出α- 萘酚，进而与基质液中的重
氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。
正常细胞阳性反应:
1.粒细胞系---- 各期粒细胞均为阴性，少数粒细胞可呈阳性反应,不被NaF抑制。
2.单核细胞系—原单为阴性或弱阳性，单核和幼稚单核为阳性, 被NaF抑制。
3.巨核细胞系--巨核细胞和血小板为阳性。
4.其他红细胞系----- 幼红和淋巴一般为阴性，少数可可呈弱阳性，不被NaF抑制，浆细胞阴性。
[临床意义] 主要用于急性白血病类型的鉴别。单核细胞阳性受氟化钠抑制，其他不受抑制。
（6）碱性α- 丁酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义α-NBE
[原理] 细胞内的α- 丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH碱性条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者与
基质液中的重氮盐耦联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱 GBC，
形成的有色沉淀为红色。α-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其 他细胞系列的阳性产物不能被
氟化钠抑制。
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正常细胞阳性反应:
1.粒细胞系----各期粒细胞均阴性。
2.单核细胞系—分化差的原单阴性，分化好的原单阳性，幼稚及成熟单核细胞呈阳性，被NaF抑制。
3.淋巴细胞----T、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞阴性。
4.其他细胞—— 幼红细胞、巨核细胞系、浆细胞均呈阴性或弱阳性。组织细胞可以呈阳性，但不被NaF抑制。
[临床意义] 与α-NAE临床意义相同，敏感性不如α- NAE，而特异性较差，是急性白血病常用的化学染色。
（7）酸性磷酸酶染色的原理和临床意义
[原理] 细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS－BI水解，释出萘酚AS－ BI，再与重氮盐耦联，形
成不溶性有色沉淀，定位于胞浆中。
[临床意义]
1）白血病类型鉴别 多毛细胞白血病的多毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性反应，并耐L－酒石 酸抑制作用；慢性淋
巴细胞白血病和淋巴瘤的淋巴细胞ACP染色也可阳性，但可被L－酒石酸抑制，有 助于与多毛细胞鉴别。
2）鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞 T淋巴细胞ACP染色呈阳性反应；B淋巴细胞ACP染色呈阴性反应。
3）戈谢细胞和尼曼－匹克细胞的鉴别
戈谢细胞ACP染色呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞呈阴性或弱阳性反应。
（8）酯酶双染色的原理和临床意义
[原理] 血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐 偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。氟化钠抑制试验是以相同
方法制备2份基质液，其中一份加 入适量NaF，另一份不加NaF作对照。将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同
基质液中，分 别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。属于非特异性酯酶染色。
用油镜观察计数100或200个被检细 胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。
抑制率（%）=（抑制前阳性率或阳性积分- 抑制后阳性率或阳性积分）抑制前阳性率或阳性积分×100
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[临床意义]
鉴别急性白血病类型，除单核细胞被NaF抑制，都不受抑制。都阳性。
（9）骨髓铁染色的原理和临床意义
[原理] 骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁）和幼红细 胞胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰
化铁沉淀，定位于细胞内外铁存在的 部位。
细胞外铁：观察骨髓小粒重点铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。分为（-）、（+）、 （++）、（+++）、（++++）
细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼 细胞的百分比。根据蓝色铁粒的多少分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、
Ⅳ型及环铁粒幼红细胞（指幼红细胞胞质内 蓝色颗粒在6颗以上，围绕核周二分之一以上者）。
1. 正常人骨髓细胞外铁为+-++。
2. 大多数为++铁粒幼细胞阳性率为19%-44%。铁染色（iron stain；IS）中的细胞外铁反映骨髓中铁的储
存量，细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。
[临床意义]
1）鉴别缺铁性贫血骨髓细胞外铁减少甚至消失，铁粒幼细胞的阳性率明显减低 ，经有铁剂治疗后，细胞外铁增多。作为
诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的方法。
2）有助于 铁粒幼细胞贫血的诊断和鉴别诊断。铁粒幼细胞贫血时出现较多的环形铁粒幼细胞，铁粒幼细胞也增多，所含的< br>铁颗粒数目也较多，颗粒也粗大，有时还可见铁粒红细 胞。作为诊断铁粒幼细胞贫血的重要方法。
3） 骨髓增生异常综合征是铁粒幼细胞的百分比可增高，其所含铁颗粒的数目可增多，环铁粒幼细胞常见。
4）非缺铁性贫血如溶血贫、营养性巨幼贫、再障和白血病细胞外铁正常或增高，铁粒幼细胞正常或增高，。
5）感染、肝硬化、慢性肾炎及尿毒症、血色病及多次输血后，骨髓细胞外铁增加。
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