泰国爱情电影推荐老年人食管鳞状细胞癌、腺癌和化生(一)

2021年1月2日发(作者：学生奶粉排行榜10强)
老年人食管鳞状细胞癌、腺癌和化生(一)
作者：蔡建春，刘棣，刘凯华，张海萍，钟山，夏宁邵
【关键词】癌,鳞状细胞；食管肿瘤, 腺癌；微卫星重复；聚合酶链反应；barrett食管；化生；
增生；序列分析
摘要:目的 评估老年人食管鳞状细胞癌(ESCC)、食管腺癌(EADC)和Barrett化生不典型增生腺癌
序列DNA微卫星的改变。方法应用稀释性PCR技术检测老年人ESCC、EADC和Barrett化生不典型增生腺癌序列中D2S123、D3S1616、D3S1300、BATRII、D5S346、D 17S787和D18S617
个位点DNA微卫星的改变。结果在非稀释DNA中，23例老年人ES CC和18例老年人EADC
微卫星不稳定性(MSI)的频率分别是47.8%(1123例)和38 .9%(718例)，杂合性丢失(LOH)的频
率分别是26.1%(623例)和16.7%(31 8例)，两者的MSI或LOH频率比较没有显著差别（P＞
0.05）。在稀释DNA中，8例老年人 正常食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌序列的
MSI和LOH频繁出现，尤其在D3S1 616、D2S123、D3S1300和D17S787位点上，与非稀释
DNA的MSI和LOH频 率相比有显著差别（P＜0.05）。结论老年人ESCC和EADC微卫星改变
没有差别。老年人正常 食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌组织DNA的MSI和LOH普
遍存在，它们可能是E ADC发生发展的早期分子事件，D3S1616、D2S123、D3S1300和D17S787
位 点的微卫星改变可能在此过程中起着重要作用。
关键词:癌，鳞状细胞；食管肿瘤，腺癌；微卫星重复 ；聚合酶链反应；barrett食管；化生；
增生；序列分析
Barrett食管发生腺癌 危险性是一般人群的125倍，其中间过程是柱状化生上皮向不典型增
生上皮转化，称之为Barret t化生不典型增生腺癌序列12]。食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺
癌(EADC)是老年人的常 见病。老年人反流性食管炎合并的Barrett食管比年轻人的更易发生
不典型增生和腺癌3]。为了 更好地了解老年人ESCC和EADC的发生发展过程，笔者检测了
ESCC、EADC、正常食管鳞状 上皮和Barrett化生不典型增生腺癌序列组织中D2S123、D3S1616、
D3S1300 、BATRII、D5S346、D17S787和D18S617个位点DNA微卫星的改变。
1材料与方法
1.1病例人与标本选自福建医科大学附属厦门第一医院病理科2002年3月 ～2005年10月存
档手术切除食管癌石蜡标本41例，患者年龄（68.2±9.6）岁（60～8 0.5岁）；术前未经过化
疗和放疗，标本经福建医科大学附属厦门第一医院伦理委员会批准收集。进行 常规组织切
片,HE染色和病理诊断。组织病理学分析：23例ESCC，18例EADC，其中8例E ADC在癌组
织旁同时存在Barrett化生和不典型增生上皮。由2位病理医师进行组织病理学分析 并核对。
1.2组织病理学分析、显微切割、DNA提取和DNA稀释先行常规组织切片、HE染色和 组织
病理学分析，在显微镜下标记所要切割的组织区域。再切厚度为10μm的组织3片，在显微
镜下按照HE染色切片上的标记进行显微切割，取出组织，装入0.5mL离心管。余下蜡块组
织再行 常规切片、HE染色并与切割前的切片比较（图1）。切割不同蜡块时均清洁石蜡切片
机刀头和刀片，显 微切割不同组织均用不同的洁净器械。采用蛋白酶K
（10mmolLTrisHCl,pH8.0,1 00mmolLKCl,2.5mmolLMgCl2,0.45%Tween20，2.5mgmL蛋白酶K）
消化方法提取基因组DNA：组织在50μL蛋白酶K消化液中95℃变性10min，常温冷却1h，
然后在65℃孵育1h，最后在95℃变性10min去除多余的蛋白酶K，混合物离心（5000rm in，
5min），吸出上清液，移至洁净的离心管。DNA质量测定值在1.0723～
1. 2401D(260nm)D(280nm)],DNA含量为255.36～406.98ngμL。8例正常 鳞状上皮、Barrett
化生上皮、不典型增生上皮和EADC组织的DNA分别按1∶100，1∶ 1000，1∶5000，1∶10000
和1∶50000稀释度用三蒸水进行稀释。
1. 3稀释性PCR和微卫星改变7个微卫星位点是D2S123，D3S1616，D3S1300，BATRⅡ， D5S346，
D17S787和D18S61（PCR引物购自美国ResearchGenetic s公司），分别位于hMSH2，hMLH1，
FHIT和TGFβRⅡ基因内，MCCAPC基因之间 以及p53和DCC基因邻近。每个不同稀释度
（1∶100，1∶1000,1∶5000,1∶10 000，1∶50000）的PCR扩增反应均包含1μLDNA模板，
0.4μCi:r32P]AT P放射性标志的微卫星引物，
0.2mmolLdNTP,10mmolLTrisHCl,pH8.3 ,1.5mmolLMgCl2,50mmolLKCl和0.4U的Taq多聚酶，
反应总体积为10 μL。PCR反应条件为：95℃5min→95℃30s→58℃40s→72℃1min，共35个
循环，最后72℃延伸2min。
A:切割前;B:显微切割后.
图1Barrett食管不典型增生上皮(HE染色×200)（略）
Fig1Epithe lialdysplasiainBarrettesophagus(HEstaining×200)
图1Barrett食管不典型增生上皮(HE染色×200)（略）
1Epithelia ldysplasiainBarrettesophagus(HEstaining×200)
图2Barrett食管不典型增生上皮被显微切割后(HE染色×200)（略）
Fig2 Epithelialdysplasiaaftermicrodissection(HEstaining ×200)
PCR引物序列如下：
D2S123上游引物：5’ACATTGCTGGAAGTTCTGGC3’
D2S123下游引物：5’CCTTTCTGACTTGGATACCA3’
D3S1616上游引物：5’CTCCCTACCTGAAAAGATGC3’
D3S1616下游引物：5’TCGGCTTAAAGACTCAGTTTATT3’
D3S1300上游引物：5’AGCTCACATTCTAGTCAGCCT3’
D3S1300下游引物：5’GCCAATTCCCCAGATG3’
BATRII上游引物：5’CTTTATTCTGGAAGATGCTGC3’
BATRII下游引物：5’GAAGAAAGTCTCACCAGGC3’
D5S346上游引物：5’ACTCACTCTAGTGATAAATCGG3’
D5S346下游引物：5’GTTTCCATTGTAGCATCTTGAC3’
D17S787上游引物：5’NEDTGGGCTCAACTATATGAACC3’
D17S787下游引物：5’TTGATACCTTTTTGAAGGGG3’
D18S61上游引物：5’ATTTCTAAGAGGACTCCCAAACT3’
D18S61下游引物：5’ATATTTTGAAACTCAGGAGCAT3’
对同一个 稀释度DNA标本均进行多次PCR检测，PCR产物用亚甲蓝加样缓冲液按1∶1稀释，
该缓冲液包含 95%亚甲蓝，0.05%溴芬蓝，0.05%埃先蓝和20mmolLEDTA。5μL的PCR产物
与2μL变性染料混匀后在7%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳2～4h，凝胶在真空干燥机80℃干
燥后， 用Kodak胶片（美国Kodak公司）曝光6～24h。