黑匣子是什么东西提高小鼠原代肝星状细胞获得率及纯度的分离方法

2021年1月1日发(作者：毛孔收敛水怎么用)

提高小鼠原代肝星状细胞获得率及纯度的分离方法
徐莹[1];张定棋[1,2]; 慕永平[1];陈佳美[1];王清兰[2];平键[1];刘伟[1];刘平[1,2];;;;;;;;;;


【期刊名称】《中国组织工程研究》

【年(卷),期】2018(022)021

【摘要】背景：由于小鼠肝脏小、血管 较细，其原代肝星状细胞分离的难度相
对较大，且得率有限，难以满足体外实验需求。目的：建立小鼠原 代肝星状细
胞高效稳定的分离方法，提高小鼠原代肝星状细胞的得率与纯度，为研究肝纤
维化的 机制奠定实验基础。方法：取成年雄性C57BL6小鼠，以无钙镁离子的
前灌流液经门静脉充分灌注肝 脏，再先后以1 gL链霉蛋白酶和0.7 gL Ⅳ型
胶原酶灌注，使用Nycodenz进行梯度密 度离心，获取中间层原代肝星状细胞，
锥虫蓝染法观察肝星状细胞活力，流式细胞法检测细胞纯度，免疫 荧光法检测
Desmin表达，并于倒置显微镜下观察细胞培养3，5，7 d后的形态变化，
PCR法检测培养3，5，7 d后α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白基因表达情< br>况。结果与结论：①每只小鼠肝脏可获得肝星状细胞（5.5±0.4）×10^6个，
锥虫蓝检 测细胞活力均大于95%，流式细胞法检测细胞纯度为94%，免疫荧
光检测细胞高表达Desmin； ②随着体外培养时间的延长，可见原代肝星状细
胞逐渐由圆形向星型发展；③随培养天数增长，α-平滑 肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原
蛋白表达逐渐升高； ④结果提示，实验成功建立了高效分离小鼠肝星状细胞
的方法，可为获得高纯度、高细胞活力的小鼠原代肝星状细胞提供技术方案，
也为肝纤维化的机 制研究提供技术保障。

【总页数】5页(P.3376-3380)

【关键词】肝星状细胞;细胞分离技术;原代细胞;细胞外基质;荧光鉴定;肝纤维化;