美赞臣金装奶粉甲型H1N1流感住院发热病人咽拭子病毒核酸测定排查诊断-最新年精选文档

2020年11月25日发(作者：甘子玉)
甲型H1N1流感住院发热病人咽拭子病毒核酸测定排
查诊断

本文对马鞍山市传染病医院收治住院的111例甲型H1N1流
感流行期间所有发热病人咽拭子RT-P CR病毒核酸测定并对阳性
患者治疗后再次复查，共采集上呼吸道标本124份，进行回顾性
分 析报告如下。
呼吸科共收治甲型H1N1流感流行期间住院的111例发热病
人，RT-PCR病毒核酸测定确诊病例 83例（阳性率74.78%），临
床诊断及疑似病例28例（阴性率25.22%）。阳性病人治疗时 间
5～9天，平均6～7天后再次复查，咽拭子甲型H1N1病毒核酸
检测均阴性，所有病例体 温正常，流感样症状消失，临床症状稳
定。初步判断甲型H1N1流感治疗后RT- PCR病毒核酸最长转阴时
间5～9天。测定结果与临床症状基本相符。
1 临床标本的采集
（由马鞍山市传染病医院呼吸科临床医师完成）
1.1采集对象所有收治住院甲型流感（ H1N1）流行期间发
热病人、疑似病人、确诊病例治疗后病 人，均采集上呼吸道标本
来检测进行RT-PCR甲型H1N1病毒的相关检测。共采集上呼吸道
标本124份（包括复查）送检（由马鞍山市传染病医院呼吸科临
床医师完成）。
1 .2采集种类鼻咽拭子或者鼻腔冲洗液。口腔含漱液、鼻咽
或气管抽取物、痰、气管插管的病人也可收集 气管吸取物。标本
应置于无菌病毒运输液（ VTM ）中，密封，置于特制箱，周围
用冰块或 冰排保存，立即运送至马鞍山市疾病控制中心实验室进
行检测。
1.3采样器材要求
1.3.1拭子应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），
用铝或塑料做杆，不推 荐棉拭子和木杆，不能用海藻酸钙做的拭
子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液。
1.3.2采样管外螺旋口、耐－70℃冻存的标准管
1.3.3采样液含有蛋白 质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗
生素，缓冲液（可使用Hank's或Eagle's等培养液加入 抗菌素
和0.5%BSA）
1.3.4临床标本储存所有呼吸道标本应保存在-70℃ 度冰箱
中，如果没有，应保存在4℃冰箱，但不应超过4天。
1.3.5临床标本运输 应按照A类包装标准进行样品的包装，
所有标本应标示清楚。病例标本运送应包含病例的详细信息。
1.3.6标本运送方式省内运送：公路运输，专人（由马鞍山
市传染病医院呼吸科临床医 师完成），专车（由马鞍山市传染病
医院120完成）。
2临床标本检测
（由马鞍山市疾病控制中心实验室完成）
2.1流感快诊检测以区别甲、乙型流感病毒，如乙型 流感阳
性可排除甲型H1N1流感，全部阴性结果则不能排除甲型H1N1流
感。
2.2RT-PCR检测针对甲型流感病毒的特异性引物，有效地诊
断病毒感染；甲型流感病毒（H1N 1）PCR引物
SW Inf A:目标片段大小164 bp
5`-GCA CGG TCA GCA CTT ATY CTR AG-3`
5`-GTG RGC TGG GTT TTC ATT TGG TC-3`
SW H1:目标片段大小115 bp
5`-GTG CTA TAA ACA CCA GCC TYC CA-3`
5`-CGG GAT ATT CCT TAA TCC TGT RGC-3`
检测实验室生物安全防护要求； 采集疑似感染甲型H1N1病
毒病毒的患者临床标本、进行标本处理、 包装、诊断性检测的工
作人员必须进行严格的安全防护。
所有的涉及病例标本的实验操 作（包括样本的处理、包装及
包装拆除）必须在生物安全柜内进行，呼吸防护装备，检测合格
的 N95呼吸器或更高级别的防护装备，鞋套，前封式手术服，双
层手套，眼部防护装备（护目镜或面罩） 。
3结果
疑似病例或临床诊断病例（28例）：RT-PCR病毒核酸测阴< br>性，符合下列情况之一：⑴.密切接触者发病前7天内接触传染
期甲型H1N1流感病例，并出现 流感样临床表现的。密切接触者
是指在未采取有效防护情况下接触传染期甲型H1N1流感病例的
人群，具体包括：诊断、治疗或护理、探视甲型H1N1流感病例
的人员；与病人共同生活、工作的人 员；接触过病人的呼吸道分
泌物、体液的人员。⑵.发病前7天内曾到过甲型H1N1流感流行
（出现病毒的持续人间传播和基于社区水平的流行和暴发）的国
家或地区，也包括曾到过明确有甲型H1 N1流感流行的社区，出
现流感样临床表现。⑶.出现流感样临床表现，甲型流感病毒（非
H1 N1）检测阳性，但进一步检测排除既往已存在的亚型 。确诊
病例：（83例）甲型H1N1流感病毒核酸RT- PCR方法检测阳性，
出现流感样临床表现。
4 讨论
甲型H1N1 流感病毒属于正粘病毒科，典型病毒蛋颗粒呈球
状，直径为80～120nm，有囊膜。囊膜上有许多放 射状排列的突
起糖蛋白，分别是红细胞血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）和基
质白M2。病 毒颗粒内为核衣壳，呈螺旋状对称,直径为10nm。为
单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb ，由大小不等的8个独
立片段组成。病毒对乙醇、碘伏、碘酊等常用消毒剂敏感；对热
敏感，5 6℃条件下30分钟可灭活流感病毒，有甲、乙、丙三种，
至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚 型（H1-H16），神
经氨酸酶9个亚型（N1-N9），目前，已从猪身上分离到四种主
要 的亚型：H1N1、H1N2、H3N2和H3N1。 甲型流感病毒H1N1亚
型是目前疫情的主要病 原体甲型H1N1流感是由AH1N1流感病毒
引起的新发急性呼吸道传染病，具有年轻人群患病率及死 亡率
高、传染性高于季节性流感等特点，一旦发病，蔓延十分迅速。
2009年6月11日世界 卫生组织（WHO）宣布将甲型H1N1流感大
流行警告级别提高为最高级6级、卫生部已明确甲型H1 N1流感
为乙类传染病，病采取甲类传染病的预防控制措施，为尽快发现、
诊断和救治可能发生 的甲型H1N1流感病例，目前对甲流最快速
有效的诊断方法是依赖于PCR原理的病毒核酸监测，我国 主要应
用的是RT-PCR技术，我市主要应用的也是RT-PCR技术。
但是值得注 意的是：临床PCR影响因素很多，很容易出现错
误的结果。发挥PCR更大的作用，笔者认为必须做到 以下几点：
4.1加强标本管理疑似流感病人呼吸道标本规范采集，运送，
核酸检测是 值得注意关键环节，至关重要。当疑似甲流病人呼吸
道标本（鼻拭子、咽拭子，鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液 或气管吸取
物）运送到PCR实验室后，实验室人员必须按照规定程序收集标
本，首先核对“疑 似感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单”，
仔细确认标本采集时间、保存方式及运送方式符合要求 后才能接
受标本。当发现采集和运送不规范的标本时，应立即电话通知临
床医护人员重新规范留 取；同时对于不能及时检测的标本要严格
按规定保存和管理。
4.2做好室内质控实验 室工作人员在充分了解PCR测定的不
确定性基础上，采取相应质控措施，才能确保实验结果的准确性。
目前部分PCR实验室还存在一些室内质控不规范的问题，比如说
忽视了空白管和阴性对照管的 重要性，省去了高低值；室内质控
原始数据未保存，不绘图，对失控或系统误差无分析和处理意见；在更换试剂或耗材时不做相关质量控制和比对试验等等。
4.3重视仪器维护与管理PCR 试验对仪器的依赖性是很高
的，许多仪器如离心机、扩增仪都可能是造成PCR假阴性的因素，
工作中一定要重视主要仪器设备的日常维护。
4.4PCR实验室具备较好的生物安全防护设施 和设备，污物
标本处理规范，日常消毒灭菌及时登记，检验人员加强自我防护
意识，不造成各区 域混杂，不逆向行走，不导致假阳性和假阴性
试验结果的出现，减少检验人员潜在感染的职业风险。