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天王盖地虎 小鸡炖蘑菇交联聚乙烯基吡咯烷酮快速前处理方法结合液相色谱串联质谱分析红葡萄酒中酪蛋白过敏原

作者:陕西保健网
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更新日期:2020-11-25 07:08

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2020年11月25日发(作者:柳埕)
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交联聚乙烯基吡咯烷酮快速前处理方法结合
液相色谱串联质 谱分析红葡萄酒中酪蛋白过
敏原

作者:张伟等

来源:《分析化学》2013年第10期

摘要[HTSS]建立了 红葡萄酒酪蛋白过敏原的质谱分析方法。选择专一性SRM离子对,建
立3种亚型酪蛋白αS1, αS2, β的质谱定性与定量方法;利用交联聚乙烯基吡咯烷酮
(PVPP)处理红葡萄酒有效提取蛋 白,并直接快速酶解,使前处理缩短到2 h以内。结果表
明,酪蛋白的回收率提高到80%以上,检出限达10 μgL。
1引言
引起过敏的物质称为过敏原,一般为蛋白质类物质。随着食物过敏患者的增多 ,以及可能
导致过敏性休克甚至死亡等严重后果,已建立了一系列针对过敏原的法规及检测方法,包括核
酸法(PCR)和酶联免疫法(ELISA)等。新兴的质谱法(MS)灵敏度高、假阳性概率低,并具有方法开发快速、运行成本低等优势。
葡萄酒酿造过程中需要加入澄清剂去 除沉淀物质,使酒液获得长期稳定性。酪蛋白是常用
的澄清剂之一。酪蛋白是一种来源于牛乳的过敏原, 残留在葡萄酒中会对过敏人群产生危害。
但是葡萄酒,特别是红葡萄酒含有大量单宁等鞣质,单宁与蛋白 质之间存在多点疏水键和氢键
的作用,有很强的蛋白结合能力。单宁常用作酶抑制剂使酶失活。单宁极大 地抑制了葡萄酒蛋
白的提取与酶解,传统蛋白提取方法(超滤、透析、有机溶剂沉淀等)用于葡萄酒时回 收率只
有20%-30%
[1

2]
。因此,关于葡萄酒过敏原质谱 分析的报道很少,研究对象也集中在单宁含量

4]
很低的白葡萄酒,对于含有大量单 宁的红葡萄酒的前处理和质谱分析仍无成熟的策略
[3
要电泳去除单宁和两性电解质,工作量大 ,分析通量低,蛋白质的回收率很低
[5

6]
。已
报道的方法如十 二烷基硫酸钾(KDS)法、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)法等,提取后蛋白仍需

交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)是PVP交联后形成的颗粒(约110 μm),具有很强的吸
附能 力
[7]
。PVPP竞争性地与单宁结合,释放蛋白,可以有效去除单宁等多酚类物质
[8

9]
。本研
究利用PVPP建立了快速、高效的红葡萄酒蛋白提取与酶 解方法,使前处理时间缩短到2 h之
内,回收率达到80%以上。将本方法与三重四极杆液相色谱串联 质谱联用(LCMSMS)结
合,分析了红酒中3种亚型的酪蛋白,检出限达到10 μgL,比目前报道的方法提高了至少一
个数量级
[3]

2实验部分

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