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2020年11月22日发(作者：桑秀娣)


肠道病毒的分类与检测


摘 要


肠道病毒 可引发多种感染，并且发病以综合症出现，一种综合症可有不同病毒所
引起，同一种病毒可以导致不同综 合症是肠道病毒感染的普遍现象。目前除脊髓灰质
炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的 重要病原之一。肠道病毒主要
经粪一口或呼吸道传播，所以对肠道病毒感染作出准确、及时的诊断是非常 必要的。
肠道病毒（Enterovirus）是小RNA病毒科，有67个血清型。人类肠道病毒包括 ：脊髓
灰质炎病毒（Poliovirus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、埃可病 毒（Echo）、甲
型肝炎病毒以及新型病毒。目前常用的检测肠道病毒的方法有病毒分离培养、血清学
鉴定、分子生物学方法，近年来，一些新型方法也使得肠道病毒的检测快速化与准确
化。

关键词 肠道病毒诊断分类
1 肠道病毒形态特点

肠道 病毒是球形、无包膜、核衣壳20面体立体对称。肠病毒属病毒粒子在酸性pH
下稳定，在病毒制品中可 观察到空衣壳，有时可观察到少量（1%）的重颗粒。基因组
编码单一的VPg蛋白，但不编码L蛋白。 不同肠道病毒及肠道病毒与鼻病毒间整个核
苷酸序列一致性大于50%，一种肠道病毒不同株之间整个核 苷酸序列的一致性大于
75%。病毒主要在肠道细胞中复制，也能在神经、肌肉和其它一些组织中复制。 大多
数病毒感染无明显症状，病毒感染的临床症状包括轻微脑膜炎、脑炎、肌炎、心肌炎
和结缔 组织炎。耐酸和脂溶剂，不易被胃酸和胆汁灭活，在污水和粪便中活数月。
2
肠道病毒的分类

脊髓灰质炎病毒

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2.1
此病症的典型临床经过六个阶段（潜伏期、前驱期、瘫痪前期、瘫痪期、恢复期
和残留麻痹）。感染期间患者表现为低热及咽痛、咳嗽、腹泻、不安、嗜睡、多汗、
脑膜刺激症、肌肉 疼痛、皮肤感觉过敏，突发急性弛缓性麻痹等症状，最后多遗留下
终生残疾。脊髓灰质炎病毒通过患者的 粪便或口腔分泌物传染。人类是脊髓灰质炎病
毒的唯一宿主，长期携带病毒的情况（例如无症状，但仍持 续排出病毒长达6个月以
上）很罕见。服用脊髓灰质炎疫苗（现在我国使用I、II、III型混合糖丸 疫苗，是
由减毒的脊髓灰质炎病毒制成的）是预防本病的主要措施。消灭脊髓灰质炎最根本的
手 段是提高人群免疫水平，断绝脊髓灰质炎野毒株在人群中的传播。
脊髓灰质炎病毒分为三个血清型；两 种不同抗原：D抗原和C抗原。D（dense，
致密）抗原：具有病毒RNA，为完整的病毒颗粒，又 称N（native）抗原；C（coreless，
无核心）抗原：不含RNA，是D颗粒经56 ℃ 灭活，RNA释放后形成的无核酸空心衣
壳，故又称H（heated）抗原；不同型别病毒C抗原可发 生交叉反应，但D抗原无交
叉反应；
传播方式主要是粪-口传播，所致疾病是脊髓灰质炎。中 毒机理：粪－口途径传
播为主—上呼吸道，咽喉，肠道为侵入门户—先在局部粘膜和淋巴结中增殖—入血 ，
形成第一次病毒血症—带有受体的靶组织（脊髓前角细胞、背根神经节细胞、运动神
经细胞等 ）—在靶细胞中再次增殖后形成第二次病毒血症及临床症状。
检测方法第一是微生物学检查，检测方法 ：病毒分离检查：取咽漱液、粪便等样
本，细胞培养出现CPE；血清学诊断：中和试验；病毒核酸测定 。第二是防治:口服
减毒活疫苗或者注射灭活疫苗.
2.2 柯萨奇病毒

柯萨奇病毒
[2]
对乳鼠的敏感性很高，根据它们感染乳鼠产生的病灶，柯萨奇病毒
可 以分为a、b两组。a组有23型病毒，b组有6型病毒。A组病毒：诱发新生乳鼠
弥漫性骨胳肌炎，导 致驰缓性麻痹。B组病毒：诱发新生乳鼠局灶性骨胳肌炎，导致
痉挛性麻痹。通过型特异性抗原，经中和 试验。Elisa方法等可以对各型进行鉴定。
所有的b组及a组的第9型有共同的组特异性抗原，在b 组内病毒之间有交叉反应，
但是a组病毒没有共同的组特异性抗原。a组某些型别的型特异性抗原可在3 7℃引起
人类O型红细胞凝集反应。
柯萨奇病毒A型感染潜伏期1-3天，上呼吸道感染，起病急，流涕、咳嗽、咽痛、
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发烧，全身不适。典型症状为疱疹性咽峡炎，即在鼻咽部、会厌、舌和软腭部出现小< br>疱疹，粘膜红肿，淋巴滤泡增生、渗出，扁桃体肿大，伴吞咽困难，食欲下降。据调
查（R0bi nson，1958）伴有口咽部疱疹和皮疹的急性热病中，79%为柯萨克A型病毒
所致。
检测方法：1.病人体液（脑脊液、疱疹液、心包液、胸水等）分离出病毒即可确
诊。）2．恢复期血清 出现抗体，或双份血清抗体效价增高4倍以上。
2.3 埃可病毒

埃可病毒(ECHO)（ECHO- viruses）病毒即肠性细胞致病性人类孤独型病毒
（enteric cytopatho- genic human orphan virus）。只对人类有感染性，多发于夏、
秋季，绝大多 数是隐性感染。ECHO病毒分为30多个型（1-34型，其中8、10、28、
34型已归入其他病 毒）。各型致病力和致病类型也不同，如ECHO6、19型致病力较强，
它类似于柯萨奇病毒B型引起 急性胸痛和心肌病。主要经口-粪途径传播，也可通过
咽喉分泌物排除病毒经呼吸道传播。病毒进入人体 在咽部机肠粘膜细胞增殖后，侵入
血流，形成病毒血症。
ECHO病毒感染的临床表现类似于 风疹，第一孕季感染虽可累及胎儿，但很少引
起畸形。发病年龄2.5～33岁，常见的症状为上呼吸道 感染、发烧、非化脓性脑膜炎
和皮疹。皮疹为斑丘疹或麻疹样皮疹，持续1～3天自然消退。可从大便、 咽分泌物
和脑脊液中分离出病毒。
防治：埃可病毒疹尚无特殊疗法。皮疹对症处理。对易感的 婴幼儿可注射丙球蛋
白3～6ml，脊髓灰质炎减毒疫苗可干扰本病毒的感染。ECHO-3，4，6， 9，11型减毒
活疫苗正在研制中。目前尚未有特效治疗，主要采用对症和支持疗法。静脉注射人血丙种球蛋白对新生儿严重感染可能有效，婴幼儿腹泻也有导致脱水及酸中毒的可能，
须酌情给予输液 治疗。
2.4 甲型肝炎病毒

临床上表现为急性起病，主要表现为乏力、食欲减退 、及肝功能异常，部分病例
可出现黄疸。甲型肝炎病毒主要通过粪口途径传播，传染源多为病人。甲型肝 炎的潜
伏期为15-45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5-6天就存在与患者的血液和粪便中。发病2-3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也随之消失。从
感染者的粪便 中排出，通过不同的途径污染了食物和用具，又经过口侵入人体。这就
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是甲肝病毒的传播方式。
2.5 新型病毒

新型病毒指在1969年以后 鉴定的除脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒以外
的几种小RNA病毒，主要包括68-71共四个 血清型。其中68型分离自下呼吸道感染
者，69型分离自健康人肛门拭子，70型分离自急性出血性结 膜炎患者，71型分离自
无菌性脑膜炎患者的粪便和脑脊液。EV70主要引起流行性出血性结膜炎；E V71感染
主要引起手足口病，还可引起中枢神经系统和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统疾
病 。
3 检测方法

3.1 病毒分离培养

利用组织培养技 术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒
性疾病诊断的标准。病人标本是最常采集 的标本。病毒培养对缩短抗生素治疗和住院
期有积极作用，但是病毒的分离鉴定繁琐、费力、耗时，一般 一周才能观察到细胞病
理反应，而且许多肠道病毒不能进行细胞培养，或者可以培养但不出现细胞病理效 应。
3.2 血清学鉴定
[2]

分离病毒和利用组合血清中和试验是对病 毒定型的重要方法。肠道病毒的血清学
鉴定中，多选用组合血清。此方法检测中不适用于早期诊断，可作 为回顾性诊断；且
由于肠道病毒血清型众多，临床使用检测价值有限，而多为流行病学采用。
3.3 分子生物学诊断

3.3.1 PCR技术

由于各型病毒 具有共同基因组序列，也可检出几乎所有血清型。PCR检测材料用
量少、快速、灵敏度高且具有特异性 ，并可通过设计不同的引物进行病毒分型，用于
检测相当宽的肠道病毒血清型。卢亦愚
[3]< br>等人发明了用肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR
检测试剂盒及检测方法，灵敏度高，非常适用于 如手足口病等有肠道病毒感染引起突
发疫情的实验室早期诊断，该方法具有高特异性。
3.3.2 核酸杂交技术
[4]

由于EV各型间存在序列高度保守区，利用针对此保守区的通用互补脱氧核
糖核酸(cDNA)核酸探针可进行大范围的EV诊断。
3.3 其他新型方法

2000年，Notomi 等开发了一种新颖的恒温核酸扩增方法， 即所谓环介导等温扩
增法。
[5]
该方法利用一种链置换DNA 聚合(BstDNApolymerase)和两对特殊的引物，特
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异地识别靶序列上的6 个独立区域，使反应在模板两端引物结合处循环出现环状单链
结构，从 而保证引物可以在等温条件下(65℃左右)与模板结合并进行链置换扩增反
应。
RT-LAMP 检测方法在满足特异性同时，灵敏度可达到普通RT-PCR 法的10-100 倍，
或荧光RT-PCR 法的110 或与之在同一水平。
优点：（1）高特异性 （2）高灵敏度 （3）鉴定简便 （4）操作简单 （5）快速、
高效：整个扩增反应只需1-1.5小时
[5]
。












参考文献



[1]
腾峥，张曦 上海市疾病预防控制中心微生物检验室 肠道病毒的检测方法及评价

[2]
张素兰，张霞平 柯萨奇病毒感染临床表现的多样性 中国医学文摘

[3]
卢亦愚，严菊英，徐昌平 浙江省疾病预防控制中心 肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR
33 6学习交流文档
检测试剂盒及检测方法

[4]
杨秀惠，严延生 肠道病毒诊断与分类

[5]
何雅青 深圳市疾病预防控制中心 RT_LAMP技术在肠道病毒检测中的应用

[6]
赵化冰，尹光雅，赵宏 中国人民武警警察部队医学院 用环介导恒温扩增技术检测
肠道病毒的引物组及检测体系

[7]
[8]
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，< br>努力就一定可以获得应有的回报）

[9]
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