广州吃婴儿事件菠菜中胡萝卜素的提取与鉴定

2020年10月26日发(作者：寿崇德)
一、 实验目的
1、 掌握从新鲜菠菜中提取、鉴定胡萝卜素的方法。
2、 掌握测定胡萝卜素紫外—可见吸收光谱的计算方法。
二、实验原理
绿色植物如菠菜中含有叶 绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
植物色素中的胡萝卜素是具有长链结构的 共轭多烯，有三种异构体，即α-、β-、γ-胡萝
卜素，其中β-体含量较多，也最重要。β-体具有 维生素A的生理活性，其结构由两分子
的维生素A在链端失去两分子水结合而成。在生物体内β- 体受酶催化氢化作用即形成维生
素A。目前β-体也可由工业生产，可以作为维生素A使用，同时也能作 食品工业中的色素。
胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂中。
三、 仪器与试剂
1、仪器：紫外—可见分光光度计、层析柱、玻璃漏斗、分液漏斗、抽滤装置一套、
研钵、试管、烧杯；
2、试剂：菠菜叶、乙醇、石油醚、丙酮、无水硫酸钠、硅胶GF
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、中性三氧化二铝、
石英砂。
四、 实验步骤
a) 样品处理：
取约5g新鲜菠菜叶，洗干净后用滤纸吸干并用剪刀剪碎，于研钵中捣烂，用
30mL2:1的 石油醚—乙醇浸取。抽滤浸取液，滤液转移到分液漏斗中，加等体积的水
洗1次，洗涤时要轻轻振荡，以 防止乳化，弃去下层的水—乙醇层，石油醚层再用等
体积的水洗2次，除去乙醇和其他水溶性物质。有机 相用无水硫酸钠干燥。蒸除大部
分溶剂至体积约为1mL为止，取四分之三作柱层析分离。
b) 柱层析分离
在层析柱底部垫一点棉花，加入15cm高的石 油醚，将中性三氧化二铝从玻璃漏斗
中缓慢加入，小心打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，必要时用装 在玻璃棒上的橡
皮塞轻轻地在柱周围敲击，使吸附剂装得平整致密。柱内溶剂面始终不低于吸附剂。装完后，再在上面铺一层2—3mm高地石英砂。打开下端活塞，放出溶剂，直到液面刚
好与石英砂 平面相切时为止。
将上述所剩的菠菜色素浓缩液用滴管小心的加到柱顶，加 完后打开活塞，让液面
下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞，加数滴石油醚并打开活塞，使液面下降， 反复
几次，使色素全部进入柱体。先用9:1（体积比）石油醚—丙酮洗脱，当第一滴黄色
液体 流出时，换一接收瓶接收，即为胡萝卜素。
c) TCL分析
在硅胶板上， 用分离后的胡萝卜素和原先剩余的四分之一原料点样，9:1的石油醚
—丙酮展开，计算其展开的Rt值 。

d) 胡萝卜素紫外光谱测定
将上述分离得到的胡萝卜素稀 释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，
用紫外光度计测定400—600nm范围内的吸收 。
五、数据记录及处理
从基线至展开剂斑点中心的距离(X)
Rf
=
________________________________
从基线至展开剂前沿的距离(Y)

X(cm)
Y(cm)
4.5
5.3
4.6
5.2
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Rf
平均值Rf

0.85
0.865
0.88
紫外光谱图

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