(完整版)微生物的接种、分离纯化与培养方法

2021年2月27日发(作者：娈童是什么)

微生物的接种、分离纯化与培养方法

实验目的：
学习掌握 无菌操作技术；
学习接种方法；
学习常用的分离、
纯化菌种的方法。

实
验内容：


一、接种


将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

１、接种
工具和方法


在实验室或工厂实践中，用得最多的接 种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的
不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙 形等之分。有时滴管、吸管也可作为
接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需 要用到涂布棒。
（图３
－３）



图３－３

接种和分离工具

1
．接种针
2.
接种环
3.
接种钩
4.5.
玻璃涂棒
6.
接种圈
7.
接种锄
8.
小解剖刀





常用的接种方法有以下几种：


１）划线接种

这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达
到接种的作用。常用 的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此
法。

２）
三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。
此法即把少量的微生物 接种在平板表面上，
成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点 外，也
有一点或多点进行接种的。


３）穿刺接种

在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接
种工具是接种针。
用 的培养基一般是半固体培养基。
它的做法是：
用接种针蘸取少量的菌种，
沿半固体培养 基中心向管底作直线穿刺，
如某细菌具有鞭毛而能运动，
则在穿刺线周围能够
生长。< br>

４）浇混接种

该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至
45
°

C
左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合
适温 度下培养，就可长出单个的微生物菌落。


５）涂布接种

与 浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板
上面，
迅速用涂布棒在 表面作来回左右的涂布，
让菌液均匀分布，
就可长出单个的微生物的
菌落。


６）液体接种

从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液 体培养物中，用移
液管将菌液接至液体培养基中，
或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，
都可称为液体
接种。


７）注射接种

该法 是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物
中，
常见的疫苗预防接种 ，
就是用注射接种，
接入人体，
来预防某些疾病。

８）
活体接种

活
体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一 种方法，
因为病毒必须接种于活的生物体
内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以 是某个离体活组织，
例如猴肾等；也
可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养 。


２、无菌操作


培养基经高压灭菌后，用经过 灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材
料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上， 这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中
的各种接种必须是无菌操作。

< br>实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼
脂培养基 时利于培养皿内平板的厚度保持一致。
在实验台上方，
空气流动应缓慢，
杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂
进行空气 消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。


空气中的杂菌在气流小的情况下，随着 灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量
短。
用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌 。
接种环的火焰灭菌方法：
通常接种环在火焰
上充分烧红
（接种柄，
一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次）
，
冷却，
先接触一下培养基，
待接种 环冷却到室温后，
方可用它来挑取含菌材料或菌体，
迅速地接种到新的培养基上。
（图
３－４）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留
在接 种环上的菌体爆溅而污染空间。
平板接种时，
通常把平板的面倾斜，
把培养皿的盖打开
一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，
试管 或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。


二、分离纯化


含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（
Mixed culture
）
。如果在一个菌落中所有细
胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（
Pure culture
）
。在进行菌种鉴定时，
所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到 纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多
种。

１、倾注平板法