实验三 微生物的接种、分离纯化与培养方法

2021年2月27日发(作者：上海多动症医院)


实验三



微生物的接种、分离纯化与培养方法

实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方 法；学习常用的分
离、纯化菌种的方法。

实验内容：


一、接种



将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

１、接种工具和方法



在实验室或工厂实践中，
用得最 多的接种工具是接种环、
接种针。
由于接种要求或方法的
不同，接种针的针尖部常做成 不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接
种工具进行液体接种。
在固体培 养基表面要将菌液均匀涂布时，
需要用到涂布棒。
（图３－３
）



图３－３

接种和分离工具

1
．接种针
2.
接种环
3.
接种钩
4.5.
玻璃涂棒
6.
接种圈
7.
接种锄
8.
小解剖刀







常用的接种方法有以下几种：



１）划线接种

这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可
达到接种的作用。
常 用的接种工具有接种环，
接种针等。
在斜面接种和平板划线中就常用此法。



２）三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在 平板表面上，
成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也 有
一点或多点进行接种的。



３）穿刺接种

在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的
接种工具是接种针。
用 的培养基一般是半固体培养基。
它的做法是：
用接种针蘸取少量的菌种，
沿半固体培养 基中心向管底作直线穿刺，
如某细菌具有鞭毛而能运动，
则在穿刺线周围能够生
长。< br>


４）
浇混接种

该法是将待接的微生物先放入 培养皿中，
然后再倒入冷却至
45
C
左右的固
体培养基，
迅 速轻轻摇匀，
这样菌液就达到稀释的目的。
待平板凝固之后，
置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。



５）涂布接种

与 浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平
板上面，
迅速用涂布棒在 表面作来回左右的涂布，
让菌液均匀分布，
就可长出单个的微生物的
菌落。



６）液体接种

从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中， 或者从液体培养物中，用
移液管将菌液接至液体培养基中，
或从液体培养物中将菌液移至固体培 养基中，
都可称为液体
接种。



７）注射接种

该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动
物中，常见的疫苗预防 接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。



８）活体接种

活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒 必
须接种于活的生物体内才能生长繁殖。
所用的活体可以是整个动物；
也可以是某个离 体活组织，
例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

２、无菌操作



培养基经高压灭菌后，
用经过灭菌的工 具
（如接种针和吸管等）
在无菌条件下接种含菌材
料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培 养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的
各种接种必须是无菌操作。



实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、
水平。
光滑是便于用消毒剂擦洗 ；
水平是倒琼
脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。
在实验台上方，
空气流动应缓慢，
杂菌应尽量
减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验 室的门窗，并用消毒剂进行
空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。



空气中的杂菌在气流小的情况下，
随着灰尘落下，
所以接种时，
打开培养皿的 时间应尽量
短。
用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。
接种环的火焰灭菌方法：< br>通常接种环在火焰上
充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触 一下培养基，待
接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。< br>（图３
－４）
然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以 免残留在接
种环上的菌体爆溅而污染空间。
平板接种时，
通常把平板的面倾斜，
把培养皿的盖打开一小部
°
分进行接种。
在向培养皿内倒培养基或接种时，
试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，
试管或瓶
口应倾斜一下在火焰上通过。





图３－４

斜面接种时的无菌操作


(1)
接种灭菌
(2)
开启棉塞
(3)
管口灭菌
(4)
挑起菌苔
(5)
接种
(6)
塞好棉塞

二、分离纯化



含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（
Mixed culture
）。如果 在一个菌落中所
有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（
Pure
culture
）。在进行菌种鉴定
时，
所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，
方法有许多种。

１、倾注平板法



首先把微生物悬液通过一系列稀释，
取一定量的稀释液与熔化好的保持在
40~50
°左右的
营养琼脂培养基充分混合，
然后把这混合液倾注到无菌的 培养皿中，
待凝固之后，
把这平板倒
置在恒箱中培养。
单一细胞经过多次增殖 后形成一个菌落，
取单个菌落制成悬液，
重复上述步
骤数次，便可得到纯培养物。（图 ３－５，
a
）