渭南妇科医院哮喘造模成功

2021年2月23日发(作者：螃蟹脚)
糖皮质激素与甘利欣对哮喘发作治疗的疗效比较



















郭兴华

王敏仪

庄圆

于亚楠

高鸿鹍


麦赞

指导老师
:
刘清华



[
摘要
]


目的
：探讨甘利欣及糖皮质激素对发 作期哮喘的疗效比较。
方法
：将
24
只豚鼠分为空白对
照组、氢化可 的松组、甘利欣组。哮喘模型用腹腔注射鸡蛋清致敏豚鼠并滴鼻激发。模型建立成功指标采
用记录豚鼠打 喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、肺泡灌洗液
(BALF)
细胞计数。
结果
：空白对照 组豚鼠打喷嚏数、鼻
痒抓鼻次数、白细胞增多。氢化可的松组打喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、白细胞减少。甘 利欣组打喷嚏数、鼻
痒抓鼻次数、白细胞减少。
结论
：甘利欣能改善豚鼠哮喘模型症状 及减少肺泡灌洗液白细胞数。



[
关键词
]

甘利欣；氢化可的松；哮喘；豚鼠；白细胞数

1
引言



支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和
T
淋巴细胞等多种炎症细胞参与 的支气管非特异性炎症。
这种炎症易使易感者对各种激发因子具有气道高反应性，并可引起支气管收缩、 狭窄，粘液分泌增多，表
现为喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状。支气管哮喘可发生于任何年龄。有资 料表明，全世界约有
1
亿
哮喘患者，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病。< br>
支气管哮喘的病因较复杂，大多认为是一种多基因遗传病，受遗传因素和环境因素的影响。其发 病与
变态反应有关，已被公认的主要是Ⅰ型变态反应，患者多为特异性体质，常伴有其他过敏性疾病，当 机体
接触某些致敏物质（抗原）后，便产生特异性抗体，以后若再接触同一抗原，即可发生抗原抗体反应 ，导
致哮喘发作。其发病与过敏反应有密切联系，可用嗜酸细胞计数作为指征。
1



目前对支气管哮喘严重急性发作时，主要使用糖皮质激素抢救，但长期应用其不良 反应较多。现有
文献报道中成药甘利欣对支气管哮喘有治疗作用。目前国内外在用甘利欣治疗支气管哮喘 方面研究甚少，
本实验应用此药与糖皮质激素作用于豚鼠哮喘模型试图讨论其对支气管哮喘发作的疗效对 比。



2

材料与方法

2
．
1
材料



（
1
）豚鼠
24
只，雌雄各半，体重
230g~330g
。由中山大学北校区动 物中心提供。

（
2
）鸡蛋
14
只，为广州市胜佳东川分店 产品；橄榄油一瓶（
50ml
）
，在千色店购买；
Wright
染色 剂，
诊基教研室提供；氢化考的松针剂
3
支，天津金耀氨基酸有限公司，批号
0403121
，规格
5ml:25mg
；甘利
欣针（规格：
10m l:50mg
）
2
支，中山大学第一附属医院购买；盐酸异丙嗪（注射剂）
， 天津金耀氨基酸有
限公司，批号
0312111
，规格
2ml:50mg；生理盐水
2L
，中山大学北校区实验生理教研室提供。

（
3
）玻片
50
张；普通手术器械。

2
．
2
方法

2
．
2
．
1
将
30
只豚鼠做成哮喘模型：在第
1d
，
3d
，
5d
分别给予腹腔注射鸡蛋清
2ml/
只致敏豚鼠。在
第
7
天，激发前给豚鼠腹腔注射盐酸异丙嗪（注射剂）
25mg/kg
防止过度反应所致 死亡
2
，后将以
1
：
1
溶
于橄榄油的鸡蛋清（0.04ml/100g
）给致敏豚鼠滴鼻，进行激发，使动物出现哮喘样发作，以豚鼠出现痉挛< br>性腹式呼吸为哮喘发作指征。
从滴鼻开始至哮喘发作的时间为引哮喘伏期，引哮喘伏期小于
360s
为造模成
功
3
。

2
．
2．
2
将豚鼠随机分成三组（空白对照组、氢化可的松（即糖皮质激素）组、甘利欣组），每组
8
只，
雌雄各半。分别进行如下处理：以
0.04ml/kg体重生理盐水静脉注射、以氢化考的松针剂静脉注射（药理剂
量：成人每次静注
25mg< br>，即豚鼠服用剂量
3
25/60*5.26/1.00 mg/kg =2.2mg/k g
）
、甘利欣针剂静脉注射（成人
3
每次静注
10ml(
剂 型：
10ml:50mg
）
，因此豚鼠剂量
10/60*5.26/1.00 ml/kg=0.88ml/kg
）
。给药后观察
30min
内
打喷 嚏次数、鼻痒抓鼻次数。给药
3
小时后处死豚鼠，开胸，结扎左主支气管，用钝长针头插入右侧 主支
气管，行支气管肺泡灌洗，每次缓慢注入
6 ml
生理盐水
,
保 留
20s
后回抽，重复
3
次，回收
BALF
约
4m l
4
。
摇匀，取
BALF
做白细胞计数
5
以评价炎 性反应程度。取
3mlBALF
离心
2500r
，
5min
，弃上清，加生理盐
水
1ml
，浑匀，取少许推片，
Wright
染 色
6
，高倍镜下计数嗜酸性粒细胞比例，以评价过敏反应程度。

2
．
3
观察指标

豚鼠打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数，
BALF
中白细胞数目、嗜酸性粒细胞数目。

2
．
4
数据统计

用
EXCEL
软件对三组实验数据进行统计。

3

结果
：



3
．
1
各组豚鼠激发后行为变化


空白对照组在 激发后出现明显鼻部瘙痒，进而呼吸加深、加快，少
动，点头呼吸，呈哮喘样表现；氢化可的松组、甘利 欣组在激发给药后
6~8
分钟症状明显减轻，表现为点
头呼吸消失，运动增多。
7


3
．
2
打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数



1
2
3
4
1
4
0
3
空白对照组

打喷嚏

抓痒

38
31
40
26
氢化可的松组

打喷嚏

6
6
4
3
抓痒

4
0
7
0
0
0
5
4
甘利欣组

打喷嚏

抓痒

8
1
6
24
平均值

3
．
3
白细胞数


1
2
3
4
5
6
7
8
平均值

标准差

2
33.75
4.75
2.75
2.25
9.75
空白对照组（个
/ml
）

1.70
×
10
5

1.275
×
10
5

1.85
×
10
5

0.125
×
10
5

0.775
×
10
5

0.80
×
10
5

0.10
×
10
5

0.45
×
10
5

88437.5
67081.21
氢化可的松组（个
/ml
）▲

1.2
×
10
5

0.40
×
10
5

0.025
×
10
5

0.05
×
10
5

0.025
×
10
5

0.80
×
10
5

0.60
×
10
5

0.025
×
10
5

39062.5
44459.8
甘利欣组（个
/ml
）
■

0
0.85
×
10
5

0.325
×
10
5

0.25
×
10
5

0.05
×
10
5

0.45
×
10
5

0.65
×
10
5

0.025
×
10
5

32500
31024.18
▲

▲

P=0.05231 6
＞
0.05,
与空白对照组相比■
P=0.025191
＜
0.05
，与空白对照组相比

4
讨论

从以上数据可 以看出两药对豚鼠支气管哮喘模型哮喘发作有明显改善。两药用药后，支气管肺泡灌洗
液中白细胞总数明 显降低，有显著抗炎作用，而空白对照组在哮喘发作后白细胞计数明显多于用药组。但
表一中组内豚鼠的 症状表现差别较大。

甘利欣为甘草次酸的铵盐，是甘草甜素（
glycrrhizi n,GL
）的商品。
GL
是从药用植物甘草根、茎中提取
的一种有效成份，具 有高甜度、低热量、安全无毒的特点。据文献报道，具有抗炎、抗病毒、抗变态反应、
免疫调节等作用。
8
它以
18H
两种构异差向异构体存在（即
α
体和
β
体）
，
β
体为甘草中的主要成分，在一
定条件下可转化为
α
体。甘草酸二铵（甘利欣）为
α
体制剂，具有明显的降酶、抗炎作用，其不良反应少 ，
主要为皮疹和药物热。

氢化可的松，肾上腺皮质激素类药，可通过不同机制，包括 抑制淋巴细胞及其他免疫及炎症细胞中细
，
胞因子基因转录来降低组织中的炎症
910
，具有抗炎、抗过敏和抑制免疫等多种药理作用。
(1)
抗炎作用：
糖皮质激素减轻和防止组织对炎症的反应，从而减轻炎症的表现。
(2)
免疫抑制作用：防止或 抑制细胞中介
的免疫反应，延迟性的过敏反应，并减轻原发免疫反应的扩展。
(3)
抗 毒、抗休克作用：糖皮质激素能对抗
细菌内毒素对机体的刺激反应，减轻细胞损伤，发挥保护机体的作用 。长期大量应用糖皮质激素，可产生
一系列不良反应：
(1)
医源性肾上腺皮质功能过 高症。
(2)
医源性肾上腺皮质功能减退症。
(3)
诱发或加重感染。
(4)
诱发消化道溃疡、出血、穿孔。
(5)
可出现精神症状。
(6)诱发胰腺炎。
(7)
诱发胰腺炎。



文献查得豚鼠每次致敏腹腔注射
10 %
的卵白蛋白
1ml/
只，< br>因鸡蛋清含卵白蛋白、
卵球蛋白等共五种
蛋白，共占
8.9%~11.6%，所以本实验豚鼠造模采用腹腔注射鸡蛋清
2ml/
只的方法。



滴鼻后，豚鼠反射性将溶于橄榄油的鸡蛋清喷出，虽都激发成功，但激发量会有不同，导致发 作程
度的差异。估计是表一中组内豚鼠的症状表现差别较大的原因之一。



由于豚鼠的静脉较细且易滑动，而且给药时豚鼠没有进行麻醉，注射时动物挣扎，增加给药困难，
以致一部分药物注射至皮下。

实验中取少许肺泡灌洗液推片，染色，镜下观察，未发现白细 胞，初步估计白细胞数量过少。故各取
3ml
进行离心，弃上清后，加入
1ml
生理盐水，混匀，取少许，推片，染色，镜下观察，亦未见白细胞。
其可能原因为：



①肺泡灌洗时间不够：
每次生理盐水在肺泡内停留时间过短，
灌 洗次数过少，导致洗出细胞数较少。

②肺泡灌洗液取出后滞留时间过长，并未低温保存，约半小时后才制片，导致细胞溶解。
③直接推片染色后未发现白细胞，初步估计白细胞数量过少，故离心以提高白细胞的检见率，但离心
后又加入过多的生理盐水，本来离心后弃上清已可能丢失一部分白细胞，再加入过量的生理盐水导致白细
胞浓度更低。





本实验没用应用鼻黏膜切片观察和呼吸频率的监测，减少了观察指标。

5
结论





糖皮质激素与甘利欣均能减低豚鼠 哮喘模型症状及肺泡灌洗液白细胞数，本实验条件下两者的疗
效无明显差异，但从长期应用的角度，甘利 欣不良反应少，更有应用价值。



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平喘合剂抑制哮喘模型大鼠气道炎症的实验研究






邢向晖

曹宏

潘月丽

张葆青

阎宗廷

刁娟娟

2005-11-8 11:19:59
中华
现代儿科学杂志

2005
年

9
月

第

2
卷

第

9
期


关键词：平喘合剂




【摘要】

目的

通过动物实验，探讨平喘合剂治疗儿童哮喘的作用机制。方法

40
只大鼠 随机分
为正常组、模型组、博利康尼组、痰喘丸组、平喘合剂组，分别测定各组大鼠血浆和肺泡灌洗液（
BALF
）
中
IL-2
、
IL-4
、
TN F-
α
、
ET-1
含量及肺组织嗜酸粒细胞（
EOS
）凋亡 情况。结果

平喘合剂具有良好的解
痉平喘、抗炎作用。结论

平喘合剂治疗儿童哮喘的作用机制与抑制气道炎症等机制有关。



【关键词】

平喘合剂；儿童哮喘；实验研究





Experimental studies on juvenile bronchial asthma treated with pingchuan mixture



XING Xiang-hui,CAO Hong,PAN Yue-li,et al.


Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250011,China


【
Abstract
】

Objective
Through experimental studies,to research the cure mechanisms of
pingchuan mixture to juvenile bronchial s
40 male rats were randomly divided into
normal group,model group,bricanyl group,Tan Chuan Wan group and pingchuan mixture group,then to
measure the level of IL-2,IL-4,TNF,ET-1 in plasma and BALF and the apoptosis of EOS in lung
s
Pingchuan mixture exert good effects on spasm,asthma and
sion
The mechanism of pingchuan mixture associated with depressing the airway
inflammation.


【
Key words
】

pingchuan mixture;child asthma;experimental study

支气管哮喘是一种以肥大细 胞反应、嗜酸粒细胞（
EOS
）浸润为主的气道慢性炎症性疾病，严重威
胁人类特别是 儿童的身体健康。近年来，全球发病率和死亡率均呈上升趋势，为探索其发病机制，寻求其
有效的防治药 物已成为当前的研究热点。平喘合剂是我们多年来治疗儿童哮喘发作期的有效方剂，为探讨
其作用机制， 我们进行了平喘合剂治疗哮喘的实验研究，现总结报告如下。



1
材料与方法



1.1
动物选择

健康雄性
Wistar
大鼠
40
只，体重（
200±
10
）
g
，由山东大学实验动物中心提供，
符合一级实验动物标准。



1.2
药物配制



1.2.1
平喘合剂药物组成

炙麻黄、炒杏仁、细辛、清半夏、炒苏子、川芎、炒地龙、黄芩、沉