PCR检验

2021年2月19日发(作者：牙缝变大怎么办)

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的
DNA
片段的
分 子生物学技术，
它可看作是生物体外的特殊
DNA
复制，
PCR
的最 大特点，是能将微量的
DNA
大幅增加。因此，无论是化
石中的古生物、历史人物的残 骸，还是几十年前凶杀案中凶
手所遗留的毛发、
皮肤或血液，
只要能分离出一丁点的< br>DNA
，
就能用
PCR
加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威
力之所在。
由
1983
年美国
Mullis
首先提出设想，
1985
年由
其发明了聚合酶链反应，即简易
DNA
扩增法，意味着
PCR
技
术的真正诞生。到如今
2013
年，
PCR
已发展到第三代技术。
1973
年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的
Taq
DNA
聚合
酶，为
PCR
技术发展也做出了基础性贡献。

PCR(
聚合酶链式反应）
是利用
DNA
在体外摄氏
95< br>°高温
时变性会变成单链，低温（经常是
60
°
C
左右）时引 物与单
链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至
DNA
聚合酶最适
反应温度
（
72
°
C
左右）
，
DNA
聚合酶沿着磷 酸到五碳糖
(5'-3')
的方向合成互补链。基于聚合酶制造的
PCR
仪实 际就是一个
温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地
进行控制。





荧光定量
PCR
技术检测的报告形式

一，拷贝数的意义：

表示原始标本内可供探针结合的核酸片段数量


二，拷贝数与病原体的关系：


拷贝数与病原体的数量成正相关

三，报告形式：
1
如果标本量是可以定量的，如血液等，则
检测结果报告为：
IU/ml(
可溯源到国际标准物质的标准品
)
如
HBV- DNA
：检测下限：
100IU/
毫升

即：
<1.00E+02IU/ml
如果标本不能定量，如痰液，分泌物等，则结果 只能报：
copies/
毎测试

荧光定量
PCR
< br>在
PCR
反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时
监测整个
P CR
进程，最后通过标准曲线对未知的起始模板进
行定量分析的方法。


Ct
值得意义

扩增越靠后定量的重复性就越差

--< br>扩增末期，扩增效率可能因为大量的靶序列而产生不可控
的影响，偏离线性

--
在
Ct
值处重复性非常好

--
荧光定量技术要求在低浓度进行





荧光定量
PCR
在临床中的应用

一
,
感染性疾病

1
，肝炎病毒定量检测

2
，结核杆菌及呼吸道病原体检测

3
，优生优育（
TORCH
）相关项目检测

4
，性病病原体检测

5
，手足口病相关病毒
EV71
，柯萨奇病毒的检测

二，肿瘤个体化诊断与治疗

三，遗传性疾病

四，疾病风险评估



乙型肝炎病毒（
Hepatitis B
）


HBV
基因分型与
CHB
（临床遗传性疾病）的关系

全基因组测序
HBV
可分为
A.B.C.D.E.F.G.H 8
个基因型

HBV
基因型
--HBV
基因型与病毒复制及 病毒标志物表达的关
系

--HBV
基因型临床疾病谱及疾病预后的关系

--HBV
基因型与抗病毒疗效之间有关系






血清学指标（
-
）不能排除
HBV
感染

HBeAg(-)/HBV-DNA(+)

编码
e
抗原的
pre C
区基因极易出现变异，在
pre C
区
出现终止密码子，在
pre C
区基因与
C
区基因不能 转译出完
整的
e
抗原。导致
HBeAg
表达缺失，机体感染
HBV
不表达
HBeAg
，当然血清学方法也不能检测出
HBeAg
的存在。


HBV
基因型
---HBV
基因型临床疾病谱及疾病预后的关系

--HBV
基因型是影响慢性乙型肝炎的临床转归的主要决定因
素之一。
< br>--HBV
感染的临床转归一方面决定于患者的年龄和免疫能
力，另一方面与基因型种类 密切相关。在
B,C
为优势地区，
C
型具有较强的疾病能力，
预后差 ；
在以
A,D
为优势的地区，
D
型具有较强的致病性，肝病严重，预 后不良；基因型
C
在
乙肝后肝硬化的发病中起一定的作用，然而基因型
B与年轻